本发明专利技术提供一种检测试剂盒，包括样品垫、结合物垫、硝酸纤维素膜、吸水滤纸、反应支持物，所述样品垫、结合物垫、硝酸纤维素膜、吸水滤纸依次连接并均设置在所述反应支持物上，所述结合物垫含有示踪物标记的生物活性原料Ａ，所述硝酸纤维素膜设置有检测条带和质控条带，所述检测条带设置于靠近所述结合物垫的一侧并含有生物活性原料Ｂ，所述质控条带设置于远离结合物垫的一侧并含有生物活性原料Ｃ，所述检测试剂盒还包括设置在所述样品垫上并与所述样品垫连通的样品处理单元，所述样品处理单元包括能够过滤样品的样品处理垫和吸附有生物活性原料Ｄ的渗透滤膜，所述生物活性原料Ｄ能够吸附所述样品中的待测物。本发明专利技术使得样品的待测物浓度通过样品处理单元的处理后降低一个水平，通过控制该水平的具体值，可以通过判断是否显色达到更敏感地待测物浓度是否在某个水平之上。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及免疫检测领域的一种快速，尤其涉及一种通 过显色来判断检测结果的。
技术介绍
快速检测试剂盒主要应用免疫层析技术，免疫层析技术是二十世纪九十年代出现 的一种基于免疫胶体金技术的快速诊断技术。其原理是将特异的蛋白(抗原或者抗体)先 固定于硝酸纤维膜的某一区域，当该干燥的硝酸纤维素膜一端浸入样品后，由于毛细管作 用，样品将沿着该膜向前移动，当移动至该区域时，样品中相应的抗原即与该抗体发生特异 性结合。若用免疫胶体金标记技术可使该区域显示一定的颜色，从而实现特异性的免疫诊 断。部分检测项目(比如促黄体生成激素、铁蛋白等)应用目前的检测试剂盒进行检 测时，需要将检测线的显色强度与标准显色强度对比，或者对比检测线和质控线的显色强 度。由于人为地比较显色强度(尤其是在显色强度比较接近时)存在误差，因此使得试验 结果的可靠性也较小。目前需要一种通过是否显色来比较样品中的待测物的浓度与检测限度的试剂盒， 从而减少结果判断的主观依赖性。
技术实现思路
针对现有技术的缺点，本专利技术的目的是提供一种通过显色来判断检测结果的检测 试剂盒及其应用方法。本专利技术的所采用的具体技术方案如下。本专利技术的检测试剂盒包括样品垫、结合物垫、硝酸纤维素膜、吸水滤纸、反应支持 物，所述样品垫、结合物垫、硝酸纤维素膜、吸水滤纸依次连接并均设置在所述反应支持物 上，所述结合物垫含有示踪物标记的生物活性原料A，所述硝酸纤维素膜设置有检测条带和 质控条带，所述检测条带设置于靠近所述结合物垫的一侧并含有生物活性原料B，所述质控 条带设置于远离结合物垫的一侧并含有生物活性原料C，所述检测试剂盒还包括设置在所 述样品垫上并与所述样品垫连通的样品处理单元，所述样品处理单元包括能够过滤样品的 样品处理垫和吸附有生物活性原料D的渗透滤膜，所述生物活性原料D能够吸附所述样品 中的待测物。优选地，所述生物活性原料A、B、C、D是抗原或抗体，其中，所述生物活性原料A、B、 D相似或不同，所述生物活性原料C不同于所述生物活性原料A、B、D。优选地，所述检测试剂盒还包括固定卡，所述样品垫、结合物垫、硝酸纤维素膜、吸 水滤纸、反应支持物、样品处理单元通过所述固定卡固定连接在一起。优选地，所述检测试剂盒还包括固定在所述固定卡中的稀释液孔，所述稀释液孔 与所述样品垫连通、设置在所述样品处理单元的远离所述结合物垫的一侧并且与所述样品处理单元连接。优选地，所述样品处理垫由纤维素制成，所述渗透滤膜由硝酸纤维素或醋酸纤维 素制成。本专利技术还提供一种应用上述权利要求的检测试剂盒的生物制品检测方法，其特征 在于，包括以下 步骤(1)样品通过所述样品处理单元，样品中的部分待测物与所述生物活性原料D反 应并停留在所述渗透滤膜上；(2)样品经过所述样品垫后移动至所述结合物垫，未与生物活性原料D反应的待 测物与所述示踪物标记的生物活性原料A结合，形成复合物；(3)所述复合物在经过所述硝酸纤维素膜的过程中依次与相对于所述复合物不足 量的生物活性原料B和生物活性原料C特异性结合；(4)如果所述检测条带出现红色或粉红色，则表明所述待测物含量在检测限度以 上，为阳性，如果所述检测条带未出现红色或粉红色，则表明所述待测物含量在检测限度以 下，为阴性；(5)如果所述质控条带出现红色或粉红色，则表明步骤(4)的实验结果有效，如果 所述质控条带未出现红色或粉红色，则表明所述示踪物失效或者实验操作有误，步骤(4) 的实验结果无效。优选地，在所述步骤(1)中，如果所述待测物在所述样品中的浓度或阈值偏高，则 在样品进入所述样品处理单元后，通过所述稀释液孔加入稀释液。优选地，根据所述样品中待测物的性质相应地选择渗透滤膜的厚度、层数以及处 理所述渗透滤膜的参数，所述参数包括生物活性原料的种类及浓度、封闭方法。优选地，所述选择的方法为正交试验设计。本专利技术的有益效果如下。样品的待测物浓度通过样品处理单元的处理后可以降低一个水平，通过控制该水 平的具体值，可以达到更敏感地待测物浓度是否在某个水平之上。通过本专利技术的方法以及试剂盒，能够改进目前很多检测，尤其是促卵泡生成激素、 铁蛋白等需要比色确定其浓度的检测项目以及目标浓度和正常浓度相差不大的检测项目。 本专利技术使这些检测项目改进成为只需要判断是否出现有色检测条带即可判断。通过本专利技术的方法以及试剂盒，避免了比色本身引起的结果判断和稳定性的不一 致性；同时可以通过调整样品处理单元的处理程度，对一个目标检测物进行梯度检测；这 种方法的实现使得临床更多的检测项目采用胶体金快速检测法，从而大幅度改善这些检测 项目的效率和操作。附图说明图1是本专利技术的一个具体实施方案的试剂盒的剖面图；图2是本专利技术的另一个具体实施方案的试剂盒的剖面图；图3是本专利技术的一个具体实施方案的试剂盒的正视图；图4是样品处理单元的结构示意图；图5是本专利技术的一个具体实施方案的阳性结果示意图6是本专利技术的一个具体实施方案的阴性结果示意图；图7是本专利技术的一个具体实施方案检测结果无效示意图；图8是本专利技术的一个具体制作方案检测结果无效示意图。其中1.吸水滤纸；2.反应支持物；3.硝酸纤维素膜；4.结合物垫；5.样品垫； 6.样品处理单元；7.稀释液孔；8.固定卡；9.样品处理垫；10.渗透滤膜；C.质控条带； T.检测条带。具体实施方式 本专利技术的基本思路是，在试剂盒中增加一个样品处理单元，通过该样品处理单元 对于样品进行预处理，使得样品中的待测物的浓度降低，将处理后的样品再通过试剂盒的 其他部分进行检测。样品处理单元包括样品处理垫和渗透滤膜。样品处理垫的主要作用为支撑所述渗 透滤膜以及将样品中大颗粒过滤。渗透滤膜的主要作用为结合样品中待测物和层析处理。一般情况下，渗透滤膜选用渗透型硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜，样品处理垫选 用玻璃纤维膜。样品处理垫一般有纤维素制成，其一般不需要处理。在比较特殊的样品情况下，可 以为了平衡样品中的离子或者PH值等，用一定的缓冲体系(比如PBS、TRIS-HC1等)处理。渗透滤膜的处理方式主要为生物活性原料吸附处理以及封闭处理。首先采用检测条带所含有的生物活性原料对渗透滤膜进行处理，使得渗透滤膜吸 附，使得渗透滤膜能够对样品中的待测物具有吸附作用。再将渗透滤膜进行封闭处理，以避 免发生非特异性吸附；封闭处理渗透滤膜使用的处理液一般的主要成分为缓冲体系结合牛 血清白蛋白、酪蛋白或者动物血清等。处理样品处理垫或者渗透滤膜的缓冲体系选择0. 02M、pH8. 0的TRIS-HCl缓冲液 与0. 02% TX-100的混合物。封闭渗透滤膜的处理液选择0. 02M、pH8. 0的TRIS-HCl与0. 5%牛血清白蛋白的混合物。以下是采用正交试验设计对渗透滤膜的处理方法和使用层数进行选择，结果如表 1所示(以LH检测数据为例，目标阈值为40到50mIU/ml，其他条件的选择过程与此类似)表 1一渗透滤膜的处理方式检测巧果综合评定序号单抗浓度 缓冲体系 表面活性剂~H^iI本底I流动____层数(mlU/ml)___ __~1 160""" 0. 02MTRIS无丨2丨90. O —般 3 阈值过高 在阈值合适的四个条件中，7号成本偏高，12号流速偏慢，不满足总体要求，2号和 3号条件对比，2号条件在组装过程本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种检测试剂盒，包括样品垫、结合物垫、硝酸纤维素膜、吸水滤纸、反应支持物，所述样品垫、结合物垫、硝酸纤维素膜、吸水滤纸依次连接并均设置在所述反应支持物上，所述结合物垫含有示踪物标记的生物活性原料Ａ，所述硝酸纤维素膜设置有检测条带和质控条带，所述检测条带设置于靠近所述结合物垫的一侧并含有生物活性原料Ｂ，所述质控条带设置于远离结合物垫的一侧并含有生物活性原料Ｃ，其特征在于，所述检测试剂盒还包括设置在所述样品垫上并与所述样品垫连通的样品处理单元，所述样品处理单元包括能够过滤样品的样品处理垫和吸附有生物活性原料Ｄ的渗透滤膜，所述生物活性原料Ｄ能够吸附所述样品中的待测物。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：顾子易，江兵泽，
申请(专利权)人：北京易斯威特生物医学科技有限公司，顾子易，江兵泽，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]
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