【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本文公开提供单克隆抗体，特别是特异性结合人或小鼠cd98的单克隆抗体。还提供编码抗cd98抗体的核酸分子，以及包含所述核酸分子的表达载体以及宿主细胞。还公开了包含抗cd98抗体的药物组合物、偶联物以及多特异性抗体。还提供用于治疗各种疾病，特别是肿瘤，例如表达cd98的肿瘤的方法。
技术介绍
1、ii型跨膜蛋白cd98(也被称为cd98重链(cd98hc)或4f2hc，由slc3a2基因编码)与多种轻链相互作用，形成不同的异二聚体氨基酸转运体(hat)。轻链在氨基酸转运过程中发挥作用，而cd98通过稳定轻链结构并帮助轻链定位到细胞膜的方式参与转运活性。cd98已被证明通过促进氨基酸转运活性参与肿瘤发生、肿瘤发展和转移，以促进细胞的存活，增强整合素信号传导，并增加细胞的扩散、迁移、存活和生长。在过去的十年中，cd98已成为开发癌症治疗方法的一个有吸引力的靶点，因为它在多种类型的实体肿瘤和血液系统恶性肿瘤中表达上调，并与不良的临床结果相关。值得注意的是，cd98蛋白在正常组织中广泛表达，包括脑、脾、肾、小肠、睾丸、造血系统等。
2、在hayes等人(int j cancer 137(2015),710-720)中，抗人cd98(hcd98)抗体ign523在白血病、淋巴瘤和肺癌的异种移植肿瘤模型中显示出强大的抗肿瘤活性。
3、cn105385694b公开了一种与cd98结合的单克隆抗体，并教导了其作为载体递送抗肿瘤或抗炎剂的应用。cn105385694b的公开内容仅提供了体外数据，表明抗cd98抗体能够在细胞裂
4、wo2007114496a公开了多种抗cd98抗体，其中一些抗体对膀胱癌细胞系中亮氨酸摄取有抑制作用，对携带表达hcd98/hlat1-egfp的小鼠ct26结肠癌细胞系的小鼠展现出抗肿瘤作用。克隆之一c2igg1在移植了人类伯基特(burkitt)淋巴瘤细胞系ramos的小鼠中显示出抗肿瘤作用。
5、还有其他专利申请公开，包括abbvie的wo2017214456a1、wo2017214458a2、wo2017214462a2和第一三共株式会社(daiichi sankyo co ltd.)的wo2015146132a1，提供了包括抗cd98抗体和药物如bcl-xl抑制剂的偶联物。
6、然而，上述文件中都没有讨论正常组织中抗cd98抗体与cd98结合可能引起的问题。这个问题在携带经基因工程化改造以表达hcd98的癌细胞系的动物模型或异种移植模型中不存在，因为动物模型的正常组织表达小鼠cd98，而其不是抗体的靶标。抗cd98抗体的上靶/脱靶肿瘤(on target/off tumor)结合，一方面可能会破坏正常组织中存在的cd98的功能，另一方面可能会减弱抗体对靶标肿瘤细胞的抗肿瘤作用。
7、事实上，cd98在正常组织中的广泛表达为临床应用带来了几个主要挑战。靶向破坏cd98基因导致胚胎死亡(tsumura等人，(2003)，biochemical and biophysicalresearch communications 308，第847-851页)。条件性敲除cd98损害造血干细胞和祖细胞的增殖和再生能力(bajaj等人，(2016)，cancer cell 30，第792-805页)。因此，靶向性副作用和“抗原沉没(antigen sink)”问题是开发靶向cd98的抗体疗法的主要关注点。
8、目前对抗cd98抗体作为抗肿瘤疗法的需求尚未得到满足。此外，希望能够开发出对cd98正常生理功能的影响较小，并减少“抗原沉没”现象的副作用的抗cd98抗体。
技术实现思路
1、本专利技术人成功地鉴定了一种抗cd98抗体(s1-f4)，该抗体在异种移植和cd98人源化小鼠构建的同源肿瘤模型中引起广谱的fc依赖性抗肿瘤活性，且不依赖于干扰cd98的生理功能。s1-f4的抗肿瘤活性需要先天免疫和适应性免疫组分，包括fcγrs、巨噬细胞、树突状细胞和cd8+t细胞。随后，为了克服在正常组织中cd98抗体结合的“抗原沉没”问题，本专利技术人解析了s1-f4/cd98复合物结构，并生成了一系列ph依赖性结合变体，从而通过增加肿瘤特异性结合和显著改善药代动力学特征来促进整体抗肿瘤活性。
2、在第一方面，本公开内容涉及分离的抗体或其抗原结合片段，其结合人或小鼠cd98，其中所述抗体或其抗原结合片段包括：
3、重链cdr1(hcdr1)，包括选自seq id no:10、20、30、40、50、60和70的氨基酸序列或由其组成；
4、重链cdr2(hcdr2)，包括选自seq id no:11、21、31、41、51、61和71的氨基酸序列或由其组成；
5、重链cdr3(hcdr3)，包括选自seq id no:12、22、32、42、52、62和72的氨基酸序列或由其组成；
6、轻链cdr1(lcdr1)，包括选自seq id no:15、25、35、45、55、65和75的氨基酸序列或由其组成；
7、轻链cdr2(lcdr2)，包括选自seq id no:16、26、36、46、56、66和76的氨基酸序列或由其组成；
8、轻链cdr3(lcdr3)，包括选自seq id no:17、27、37、47、57、67和77的氨基酸序列或由其组成。
9、在一个实施方案中，所述抗体或其片段包括以下(a)至(g)中的任一项：
10、(a)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其分别包括seq id no:10、11和12的氨基酸序列或由其组成；和lcdr1、lcdr2、lcdr3，其包括seq id no:15、16和17的氨基酸序列或由其组成；
11、(b)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其分别包括seq id no:20、21和22的氨基酸序列或由其组成；和lcdr1、lcdr2、lcdr3，其包括seq id no:25、26和27的氨基酸序列或由其组成；
12、(c)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其分别包括seq id no:30、31和32的氨基酸序列或由其组成；和lcdr1、lcdr2、lcdr3，其包括seq id no:35、36和37的氨基酸序列或由其组成；
13、(d)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其分别包括seq id no:40、41和42的氨基酸序列或由其组成；和lcdr1、lcdr2、lcdr3，其包括seq id no:45、46和47的氨基酸序列或由其组成；
14、(e)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其分别包括seq id no:50、51和52的氨基酸序列或由其组成；和lcdr1、lcdr2、lcdr3，其包括seq id no:55、56和57的本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种分离的抗体或其抗原结合片段，其结合人或小鼠CD98，其中所述抗体或其抗原结合片段包括：
2.根据权利要求1所述的抗体或其片段，其包括以下(a)至(g)中的任一项：
3.根据权利要求1或2所述的抗体或其片段，其包括：
4.根据权利要求3所述的抗体或其片段，其包括：
5.根据权利要求3所述的抗体或其片段，其包括以下(a)至(g)中的任一项：
6.根据权利要求1～5中任一项所述的抗体或其片段，其结合hCD98具有pH依赖性，其中所述抗体或其片段在酸性pH下的结合活性高于在中性pH下的结合活性。
7.根据权利要求6所述的抗体或其片段，其中当通过ELISA法测量结合活性时，当测量抗体与hCD98的结合时，所述抗体或其片段在酸性pH下的EC50比在中性pH下的EC50低至少2倍、3倍、5倍、10倍、15倍、20倍、30倍、40倍、50倍。
8.根据权利要求6或7所述的抗体或其片段，其中所述酸性pH为5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7或6.8，和所述中性pH为
9.一种分离的多核苷酸，其编码根据权利要求1～8中任一项所述的抗体或其片段。
10.一种表达载体，其包括根据权利要求9所述的分离的多核苷酸。
11.一种宿主细胞，其包括根据权利要求10所述的表达载体。
12.一种组合物，其包括：根据权利要求1～8中任一项所述的抗体或其片段；和，药学上可接受的载体。
13.一种在有需要的受试者中减少肿瘤、抑制肿瘤细胞生长、治疗癌症或预防癌症复发的方法，包括向受试者施用治疗有效量的根据权利要求1～8中任一项所述的抗体或其片段，或权利要求12所述的组合物。
14.根据权利要求13所述的方法，其中所述肿瘤或癌症为表达CD98的肿瘤或癌症。
15.根据权利要求13所述的方法，其中所述肿瘤或癌症具有呈酸性pH的微环境，所述酸性pH例如pH 7.0、6.9、6.8、6.7、6.6、6.5、6.4、6.3、6.2、6.1、6.0或更低，和所述受试者的正常生理pH为约pH 7.4。
16.根据权利要求13所述的方法，其中所述肿瘤或癌症选自淋巴瘤、急性早幼粒细胞白血病、肝细胞癌、胰腺癌、胰腺上皮样癌、乳腺癌、结直肠腺癌、皮肤表皮样癌、黑色素瘤、纤维肉瘤、非小细胞肺癌、胃癌、急性髓系白血病、胶质瘤、舌癌、下咽鳞状细胞癌、胆管癌、骨软化症、骨肉瘤、肾癌和神经母细胞瘤。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种分离的抗体或其抗原结合片段，其结合人或小鼠cd98，其中所述抗体或其抗原结合片段包括：
2.根据权利要求1所述的抗体或其片段，其包括以下(a)至(g)中的任一项：
3.根据权利要求1或2所述的抗体或其片段，其包括：
4.根据权利要求3所述的抗体或其片段，其包括：
5.根据权利要求3所述的抗体或其片段，其包括以下(a)至(g)中的任一项：
6.根据权利要求1～5中任一项所述的抗体或其片段，其结合hcd98具有ph依赖性，其中所述抗体或其片段在酸性ph下的结合活性高于在中性ph下的结合活性。
7.根据权利要求6所述的抗体或其片段，其中当通过elisa法测量结合活性时，当测量抗体与hcd98的结合时，所述抗体或其片段在酸性ph下的ec50比在中性ph下的ec50低至少2倍、3倍、5倍、10倍、15倍、20倍、30倍、40倍、50倍。
8.根据权利要求6或7所述的抗体或其片段，其中所述酸性ph为5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7或6.8，和所述中性ph为7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5或7.6，优选地，所述酸性ph为6.5和所述中性ph为7.4。
9.一种分离的多核苷酸，其编码根...
【专利技术属性】
技术研发人员：隋建华，田欣欣，
申请(专利权)人：华辉安健北京生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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