【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于应用微生物，涉及一种生产11α-oh-坎利酮的反应体系及方法。
技术介绍
1、坎利酮(canrenone)是一种甾体激素类药物，在临床上主要用作非选择性醛固酮受体拮抗剂来治疗心血管疾病，可有效阻断肾素-血管紧张素-醛固酮系统(raas)的作用，但在心脏病治疗中有可能引起用药过量而致死的风险。另一种药物依普利酮(eplerenone)就可以大大降低这种风险，且可以通过中间体11α-oh-坎利酮来合成。
2、目前微生物转化坎利酮生产11α-oh-坎利酮有一些研究和报道，主要是利用赭曲霉和根霉等。专利申请cn104046675a利用根霉(rhizopus sp.uj-0602)的酶液生产11α-oh-坎利酮，专利申请cn103255192a利用赭曲霉(aspergillus ochraceus tccc41060)通过高密度发酵高效生产11α-oh-坎利酮。同时，专利申请cn102876582a公开了金龟子绿僵菌突变株(metarhizium anisopliae)11490可以在19-去甲基-13-乙基-雄甾-4-烯-3,17-二酮、雄甾-4-烯-3,17-二酮及雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮上有效的引入11α羟基。也有研究报道金龟子绿僵菌还可以在甾体底物16α,17α环氧黄体酮上引入11α羟基，具有广泛的甾体底物选择性。但是利用金龟子绿僵菌转化坎利酮合成11α-oh-坎利酮还鲜有报道。
3、上述现有技术存在以下问题：专利申请cn104046675a需要将菌体用超声波破碎得到含羟化酶的酶液，
技术实现思路
1、为了解决现有合成11α-oh-坎利酮的技术中存在的操作繁琐、对设备的要求高和成本高的问题，本专利技术提供了一种生产11α-oh-坎利酮的反应体系及方法，本专利技术提供的反应体系和方法操作简便、对设备要求低且底物转化率高。
2、为了解决上述技术问题，本专利技术的第一方面提供了一种生产11α-oh-坎利酮的反应体系，所述反应体系包含：坎利酮和金龟子绿僵菌发酵液。
3、在本专利技术的一些实施方案中，所述反应体系还包含卵磷脂；和/或，所述金龟子绿僵菌的保藏号为cgmcc no:3.17278。
4、在本专利技术的一些优选实施方案中，所述坎利酮的投料的质量分数为1.5％-2％，例如1.5％、1.8％或2％；和/或，所述卵磷脂的质量分数为1.5％-2％，例如1.5％或2％。
5、为了解决上述技术问题，本专利技术的第二方面提供了一种生产11α-oh-坎利酮的方法，所述方法为利用如本专利技术第一方面所述的反应体系生产11α-oh-坎利酮。
6、在本专利技术的一些优选实施方案中，所述生产的条件选自以下一种或多种：
7、所述坎利酮的添加形式为干粉；和/或，
8、温度为25-30℃，例如28℃、29℃或30℃；
9、转速为200 -300rpm，例如200rpm或250rpm；
10、2-5l/min通入空气，例如3l/min；
11、转化40-50h，例如42h或48h。
12、在本专利技术的一些实施方案中，所述金龟子绿僵菌发酵液由种子液接种至发酵培养基中经发酵获得。
13、在本专利技术的一些优选实施方案中，所述种子液由孢子悬液接种到种子培养基中经培养获得；所述孢子悬液例如由无菌水和孢子混合获得。
14、在本专利技术的一些更优选实施方案中，所述孢子由金龟子绿僵菌接种至斜面培养获得。
15、在本专利技术的一些实施方案中，所述发酵的条件为25-30℃，200 -300rpm，2-3l/min通入空气，培养15-20h；和/或，
16、所述种子液的培养条件为25-30℃，150-250rpm，培养15-20h；和/或，
17、所述斜面菌种的培养条件为25-30℃，恒温培养5-10天。
18、在本专利技术的一些实施方案中，所述种子培养基和/或发酵培养基的成分包括：葡萄糖10g/l，黄豆粉10g/l，蝉蛹粉5g/l，余量为水。
19、在本专利技术的一些优选实施方案中，所述斜面培养基的成分包括：马铃薯200g/l、葡萄糖20g/l、琼脂15-20g/l，余量为水。
20、在本专利技术的一些实施方案中，所述种子液的接种体积比为5％-10％；和/或，
21、所述孢子悬液的接种体积比为4％-6％；和/或，
22、所述孢子悬液的浓度为8×106-1.5×108个/ml。
23、在本专利技术的一些实施方案中，所述方法还包括纯化的步骤；
24、在本专利技术的一些优选实施方案中，所述纯化选自萃取、浓缩、析晶和过滤中的一种或多种。
25、为了解决上述技术问题，本专利技术的第三方面提供了一种金龟子绿僵菌或如本专利技术的第一方面所述的反应体系在生产11α-oh-坎利酮中的应用。
26、在本专利技术的一些优选实施方案中，其中，所述金龟子绿僵菌的保藏号为cgmcc no:3.17278。
27、在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本专利技术各较佳实例。
28、本专利技术所用试剂和原料均市售可得。
29、本专利技术的积极进步效果在于：
30、本专利技术直接利用金龟子绿僵菌gd-6生产11α-oh-坎利酮，投料量20g/l时，转化48h，产物纯度高达98.7％，更加高效，操作更加简单，对设备要求低。
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1.一种生产11α-OH-坎利酮的反应体系，其特征在于，所述反应体系包含：坎利酮和金龟子绿僵菌发酵液。
2.如权利要求1所述的反应体系，其特征在于，所述反应体系还包含卵磷脂；和/或，所述金龟子绿僵菌的保藏号为CGMCC No:3.17278；
3.一种生产11α-OH-坎利酮的方法，其特征在于，利用如权利要求1或2所述的反应体系生产11α-OH-坎利酮；
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述金龟子绿僵菌发酵液由种子液接种至发酵培养基中经发酵获得；
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述发酵的条件为25-30℃，200-300rpm，2-3L/min通入空气，培养15-20h；和/或，
6.如权利要求4或5所述的方法，其特征在于，所述种子培养基和/或发酵培养基的成分包括：葡萄糖10g/L，黄豆粉10g/L，蝉蛹粉5g/L，余量为水；
7.如权利要求4-6任一项所述的方法，其特征在于，所述种子液的接种体积比为5％-10％；和/或，
8.如权利要求3-7任一项所述的方法，其特征在于，所述方
9.一种金龟子绿僵菌或如权利要求1或2所述的反应体系在生产11α-OH-坎利酮中的应用。
10.如权利要求9所述的应用，其中，所述金龟子绿僵菌的保藏号为CGMCC No:3.17278。
...【技术特征摘要】
1.一种生产11α-oh-坎利酮的反应体系，其特征在于，所述反应体系包含：坎利酮和金龟子绿僵菌发酵液。
2.如权利要求1所述的反应体系，其特征在于，所述反应体系还包含卵磷脂；和/或，所述金龟子绿僵菌的保藏号为cgmcc no:3.17278；
3.一种生产11α-oh-坎利酮的方法，其特征在于，利用如权利要求1或2所述的反应体系生产11α-oh-坎利酮；
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述金龟子绿僵菌发酵液由种子液接种至发酵培养基中经发酵获得；
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述发酵的条件为25-30℃，200-300rpm，2-3l/mi...
【专利技术属性】
技术研发人员：胡甜，陈海林，赵静，刘林，何鑫，汪洋，蔡啸，左权，宋庭宁，
申请(专利权)人：黄冈人福药业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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