【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及化学物质和生物转化领域，具体涉及一种乙基羟化物的制备方法。
技术介绍
1、左炔诺孕酮(lng:d(–)-17α-乙炔基-17β-羟基-18-甲基雌甾-4-烯-3-酮)是目前国际上应用最广泛的一种女性口服避孕药，主要作用于下丘脑和垂体，使月经中期的fsh和lh水平高峰明显降低或消失，促使卵巢不排卵，同时可以使宫颈粘液变稠阻碍精子穿过，从而达到避孕的效果。左炔诺孕酮还可以用于治疗月经不调，异常子宫出血(aub)和子宫内膜异位症等。
2、乙基羟化物是目前化学合成lng的一个十分重要的中间体，它经过氢化环合、birch还原、氧化、乙炔化等反应最终得到lng。而乙基羟化物目前的来源主要有两条：乙基缩合物选择性地化学氢化五元环上一个羰基，或者将乙基缩合物通过微生物全细胞催化制备。前者反应选择性低，难度大，而后者则反应条件温和，立体选择性高，质量稳定，成本低，污染小。
3、1978年，法幼华等(微生物学报,18(3):232-238,1978)筛选得到一株立体选择性高，且转化能力强的菌株saccharomyces cerevisiaeas 2.346。先离心收集培养好的菌株，用自来水重悬，然后分批加入乙醇溶解的乙基缩合物，投料量1％，转化6天，重量收率85-90％，纯度95-97.5％。该方法需要收菌重悬，操作复杂，生产周期长，不利于工业化生产。
4、专利cn 107828828a转化前需要将乙基缩合物加热至45℃-50℃溶于95％乙醇(1g:6ml)，然后直接加入到发酵培养液中进行转化。投料
5、专利cn 107881202a以白地霉zjph1704经发酵培养获得的湿菌体为酶源，以ph5.5-8.0的磷酸缓冲液为反应介质，以乙基缩合物为底物，投料量0.7％，转化3天后转化率为73％。转化过程需要添加7％的37℃预热的95％乙醇或二甲基亚砜作为助溶剂。该方法中霉菌生长缓慢，染菌风险高，而且操作复杂，转化过程需要添加大量助溶剂，成本高且不环保。
技术实现思路
1、本专利技术所要解决的技术问题是克服现有技术中利用微生物生产乙基羟化物收率和纯度低等缺陷，为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种高收率和高纯度的乙基羟化物的制备方法。
2、所述的乙基羟化物的制备方法，包括如下步骤：将乙基缩合物的干粉投入酵母发酵液中进行反应，即得所述乙基羟化物。
3、上述技术方案采用干粉投料，在一定投料浓度条件下，能够克服现有技术中乙基缩合物水溶性差的缺陷。该方法无需额外添加乙醇、dmso等有机溶剂助溶，避免使用有机溶剂对细胞的毒害作用，乙基羟化物的收率达到90％以上，纯度98％以上。
4、在一些实施方案中，所述制备方法还包括如下步骤：将所述乙基羟化物纯化、干燥。
5、在一些实施方案中，所述纯化的方法包括乙醇萃取、减压旋蒸或搅拌析晶中的一种或多种。
6、在一些实施方案中，所述酵母发酵液由种子液接种至发酵培养基中培养获得。
7、在一些实施方案中，所述种子液由斜面菌种接种至种子培养基中培养获得。
8、在一些实施方案中，所述斜面菌种由酵母菌接种至斜面培养基中培养获得。
9、在一些实施方案中，所述反应的条件为29℃，250～300rpm，例如250rpm、300rpm，通气量为1l/min发酵72～90h，例如72h、80h或90h。
10、在一些实施方案中，所述酵母发酵液的培养条件为29℃，250rpm，通气量为1l/min，培养8～10h，例如8h、9h或10h。
11、在一些实施方案中，所述种子液的培养条件为28℃，170rpm，培养13～16h，例如13h、15h或16h。
12、在一些实施方案中，所述斜面菌种的培养条件为28℃培养48h。
13、在一些实施方案中，所述乙醇萃取的条件为95％的乙醇。
14、在一些实施方案中，所述减压旋蒸的条件为50℃，真空度大于0.08mpa。
15、在一些实施方案中，所述搅拌析晶的条件为0℃。
16、在一些实施方案中，所述95％的乙醇的量为所述乙基缩合物干粉投料浓度的10倍。
17、在一些实施方案中，所述斜面培养基的成分包括：葡萄糖1wt％，蛋白胨1wt％，酵母浸粉0.5wt％，琼脂粉适量，例如为1.5-2％，余量为水。
18、在一些实施方案中，所述种子培养基的成分为：葡萄糖1wt％，蛋白胨1wt％，酵母浸粉0.5wt％，余量为水。
19、在一些实施方案中，所述发酵培养基的成分为：葡萄糖5wt％，玉米浆2.5wt％，0.01％消泡剂，例如硅油，ph值为4.8至5.0。
20、在一些实施方案中，所述干粉的投料浓度为3％～5％，例如3％、4％或5％。
21、在一些实施方案中，所述种子液的浓度为od600 0.6-1.0，例如0.8。
22、在一些实施方案中，所述发酵液的浓度为od600 1.5-2.5，例如2.0。
23、在一些实施方案中，所述种子液的接种量为6％～8％的体积比，例如6％、7％或8％。
24、在一些实施方案中，所述酵母菌为酿酒酵母。
25、在一些实施方案中，所述的制备方法包括如下步骤：
26、(1)将酵母菌的种子液接种至发酵培养基中培养，所述种子液的浓度od600为0.8、接种量为6％～8％的体积比，所述培养的条件为29℃，250rpm，通气量为1l/min，培养8～10h，即得发酵液，所述发酵液的浓度为od600为2.0；
27、(2)将干粉投入(1)所得发酵液中反应，所述干粉的投料浓度为3％～5％，所述干粉的直径为120-150微米，含水量≤1％，反应的条件为29℃，250～300rpm，通气量为1l/min，发酵72～90h，纯化、干燥，即得乙基羟化物。
28、在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本专利技术各较佳实例。本专利技术的积极进步效果在于：
29、(1)在转化步骤中采用干粉直接投料的方式，无需额外添加乙醇、dmso等有机溶剂助溶，避免使用有机溶剂对细胞的毒害作用，增加了发酵的效率。最终产品收率高，质量好，收率达到90％以上，纯度达到98％以上；
30、(2)由于没有有机溶剂的限制，因此投料浓度更高，可达3％-5％，产物质量稳定，便于规模化生产；
31、(3)避免了添加有机溶剂带来的额外设备投入和操作复杂性，减少染菌的风险，操作简单，菌株培养周期短，更安全环保。
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1.一种乙基羟化物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将乙基缩合物的干粉投入酵母发酵液中进行反应，即得所述乙基羟化物。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，还包括如下步骤：将所述乙基羟化物纯化、干燥；
3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述乙醇萃取的条件为95％的乙醇；所述减压旋蒸的条件为50℃，真空度大于0.08MPa；和/或，所述搅拌析晶的条件为0℃；
4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述酵母发酵液由酵母菌的种子液接种至发酵培养基中培养获得；
5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述斜面培养基的成分包括：葡萄糖1wt％，蛋白胨1wt％，酵母浸粉0.5wt％，琼脂粉适量，余量为水；和/或，
6.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述反应的条件为29℃，250～300rpm，例如250rpm、300rpm，通气量为1L/min发酵72～90h，例如72h、80h或90h；和/或，
7.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述干粉的投料浓度为3％～5％，例如3％
8.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述种子液的浓度为OD600 0.6-1.0，例如0.8；
9.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述种子液的接种量为6％～8％的体积比，例如6％、7％或8％；和/或，所述酵母菌为酿酒酵母。
10.如权利要求1～9任一项所述的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种乙基羟化物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将乙基缩合物的干粉投入酵母发酵液中进行反应，即得所述乙基羟化物。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，还包括如下步骤：将所述乙基羟化物纯化、干燥；
3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述乙醇萃取的条件为95％的乙醇；所述减压旋蒸的条件为50℃，真空度大于0.08mpa；和/或，所述搅拌析晶的条件为0℃；
4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述酵母发酵液由酵母菌的种子液接种至发酵培养基中培养获得；
5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述斜面培养基的成分包括：葡萄糖1wt％，蛋白胨1wt％，酵母浸粉0.5wt％，琼脂粉适量，余量为水；和...
【专利技术属性】
技术研发人员：胡甜，陈海林，刘林，汪洋，赵静，何鑫，左权，马璐璐，姚玲，
申请(专利权)人：黄冈人福药业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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