【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药领域，具体涉及增强adcc作用的nk细胞。
技术介绍
1、单克隆抗体药物在肿瘤治疗领域发挥着极其重要的作用，其中很大一部分单抗药物在体内的作用机制是通过其fab端结合肿瘤表面抗原，而其fc端被免疫细胞表面的fc受体(fcr)识别，激活抗体依赖的细胞毒作用(adcc)或抗体依赖的吞噬作用(adcp)等。其中nk细胞的adcc作用发挥着最重要的作用。但是只靠人体内的nk细胞所能产生的adcc作用对肿瘤细胞清除效果有限，这是因为nk表面的fc受体主要为cd16a，是一个fc低亲和受体；并且当nk细胞激活adcc作用后会引起cd16a的表达下降以及受体本身被解离酶adam17剪切，从而抑制adcc作用，使得单抗药物对肿瘤的杀伤作用受到限制。
2、目前为了解决这一问题，现有技术主要将关注点集中在改造抗体fc端使其与fcr受体有更强的亲和性来试图增强adcc作用从而增强抗肿瘤效果。但是这种方法的缺点是每个单抗都要进行修饰，较为费时费力，而且体内的nk由于cd16a本身会被解离酶剪切，adcc作用会受到限制。目前fate公司有一款通过表达带有点突变的cd16a以增强adcc作用的nk细胞产品，可以防止cd16a被解离酶剪切。
3、嵌合抗原受体(car)在t细胞和nk细胞上的应用，增强了免疫细胞对肿瘤表面抗原的识别以及对肿瘤细胞的高效杀伤。car的结构分为胞外识别区域、hinge区域、跨膜区域以及胞内激活域和共激活域。嵌合受体的成功应用表明可以根据需要将已有的受体进行改造，克服原有受体的缺点，增强其
4、nk本身的fc受体cd16a与抗体fc的亲和性较低，并且本身受到解离酶的切割，使得nk细胞的adcc作用受到严格调控和限制。因此目前已有的技术对nk细胞的改造是将cd16a进行两个氨基酸的突变，增强其与fc的亲和性以及防止被剪切。fc受体cd64，在nk细胞中不表达在单核细胞中表达，是fc的高亲和受体，而且其本身不受解离酶的剪切而更加稳定。
技术实现思路
1、本专利技术则是通过基因改造nk细胞表面fcr受体，使其人为表达嵌合fcr受体，一方面改造后的fc嵌合受体与抗体fc端的亲和性大大增强，另一方面使得fcr不被解离酶剪切，从而持续激活adcc效应。改造之后的nk细胞可以与多种单抗药物联用，比单纯体内的nk细胞具有更强更持续的adcc杀伤作用，从而具有更好地发挥杀伤肿瘤细胞和清除肿瘤效果。
2、为进一步提高nk细胞的杀伤作用，本专利提供了一种基因修饰的nk细胞，所述基因修饰的nk细胞相较于普通的nk细胞有更强的杀伤作用；进一步地，与抗体联合使用时，本专利技术所述的基因修饰的nk细胞识别抗体的fc端，通过抗体识别特异性靶点，表达对肿瘤细胞的强杀伤效果。
3、为解决现有技术问题，本专利技术提供以下技术方法：
4、嵌合受体
5、第一方面，本专利技术提供了一种嵌合受体，所述嵌合受体选自以下一种，
6、1)cd64基因的胞外部分、cd16a基因的胞外部分、cd16a基因的跨膜结构及胞内信号转导序列依次连接；
7、2)cd64基因的胞外部分、cd16a基因的胞外部分、cd16a基因的跨膜结构及胞内信号转导序列、cd244基因的胞内激活部分依次连接；
8、3)cd16a基因的胞外部分、cd16a基因的跨膜结构及胞内信号转导序列、cd244基因的胞内激活部分依次连接。
9、优选地，所述cd64基因的胞外部分的氨基酸序列如seq id no.:1所示。
10、优选地，所述cd16a基因的胞外部分的氨基酸序列如seq id no.:2所示。
11、优选地，所述cd16a基因的跨膜结构及胞内信号转导序列的氨基酸序列如seq idno.:3所示。
12、优选地，所述cd244基因的胞内激活部分的氨基酸序列如seq id no.:4所示。
13、也即，最优选地，本专利技术所提供了seq id no.:1、2、3依次连接、seq id no.:1、2、3、4依次连接、或、seq id no.:2、3、4依次连接所构成的嵌合受体。
14、优选地，所述cd16a基因的胞外部分带有f176v和/或s197p突变。
15、如本领域所熟知的，所述f176v代表第176位氨基酸由f(phe，phenylalanine，苯丙氨酸)变为v(val，valine，缬氨酸)；所述s197p代表第197位氨基酸由s(ser，serine，丝氨酸)变为p(pro，proline，脯氨酸)。以上是本领域所熟知的不影响cd16a功能表达的突变位点，带有以上突变后cd16a的功能正常。
16、编码核酸
17、另一方面，本专利技术还提供了前述嵌合受体的编码核酸。
18、优选地，所述cd64基因的胞外部分的核苷酸序列与seq id no.:5所示序列有85％及以上同源性或与seq id no:5所示序列部分互补或完全互补。
19、优选地，所述cd16a基因的胞外部分的核苷酸序列如seq id no.:6所示序列有85％及以上同源性或与seq id no:6所示序列部分互补或完全互补。
20、优选地，所述cd16a基因的跨膜结构及胞内信号转导序列的核苷酸序列如seq idno.:7所示序列有85％及以上同源性或与seq id no:7所示序列部分互补或完全互补。
21、优选地，所述cd244基因的胞内激活部分的核苷酸序列如seq id no.:8所示序列有85％及以上同源性或与seq id no:8所示序列部分互补或完全互补。
22、优选地，所述85％及以上代表85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％。
23、优选地，所述cd64基因的胞外部分的核苷酸序列如seq id no.:5所示。
24、优选地，所述cd16a基因的胞外部分的核苷酸序列如seq id no.:6所示。
25、优选地，所述cd16a基因的跨膜结构及胞内信号转导序列的核苷酸序列如seq idno.:7所示。
26、优选地，所述cd244基因的胞内激活部分的核苷酸序列如seq id no.:8所示。
27、最优选地，所述编码核酸包括以下3种：
28、1)seq id no.:5、6、7依次连接所构成，
29、2)seq id no.:5、6、7、8依次连接所构成，
30、3)seq id no.:6、7、8依次连接所构成。
31、优选地，所述编码核酸还连接任意其他序列，具体地例如，可操作连接的启动子和/或转录终止序列。
32、载体
33、另一方，本专利技术提供了一种载体，所述载体上含有前述编码核酸或者表达前述本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种嵌合受体，所述嵌合受体选自以下一种，
2.一种核酸分子，所述核酸分子编码权利要求1所述嵌合受体；
3.一种载体，所述载体上含有权利要求2所述核酸分子或者表达权利要求1所述嵌合受体；
4.一种宿主细胞，所述细胞中含有或表达权利要求1所述嵌合受体、权利要求2所述核酸分子和权利要求3所述载体中的一种或多种；
5.一种组合物，所述组合物中含有权利要求1所述嵌合受体、权利要求2所述核酸分子、权利要求3所述载体和权利要求4所述宿主细胞中的一种或多种；
6.一种制备高杀伤活性的宿主细胞的方法，所述方法包括将权利要求1所述嵌合受体、权利要求2所述编码核酸和权利要求3所述载体中的一种或多种引入宿主细胞，
7.权利要求1所述嵌合受体、权利要求2所述核酸分子、权利要求3所述载体、权利要求4所述宿主细胞或权利要求5所述组合物在制备治疗癌症的药物中的用途。
8.权利要求1所述嵌合受体、权利要求2所述核酸分子、权利要求3所述载体、权利要求4所述宿主细胞或权利要求5所述组合物在制备提高单抗疗效的药物中的用途。
<...【技术特征摘要】
1.一种嵌合受体，所述嵌合受体选自以下一种，
2.一种核酸分子，所述核酸分子编码权利要求1所述嵌合受体；
3.一种载体，所述载体上含有权利要求2所述核酸分子或者表达权利要求1所述嵌合受体；
4.一种宿主细胞，所述细胞中含有或表达权利要求1所述嵌合受体、权利要求2所述核酸分子和权利要求3所述载体中的一种或多种；
5.一种组合物，所述组合物中含有权利要求1所述嵌合受体、权利要求2所述核酸分子、权利要求3所述载体和权利要求4所述宿主细胞中的一种或多种；
6.一种制备高杀伤活性的宿主细胞的方法，所述方法包括将权利要求1所述嵌合受体、权利要求2所述编码核酸和权利要求3所述载体中的一种或多种引入宿主细胞，
7.权利要求1所述嵌合受体、权利要求2所述核酸分子、权利要求3所述载体、权利要求4所述宿主细胞或权利要求5所述组合物在制备治疗癌症的药物中的用途。
8.权利要求1所述嵌合受体、权利要求2所述核酸分子、权利要求3所述载体、权利要求4所述宿主细胞或权利要求5所述组合物在制备提高单抗...
【专利技术属性】
技术研发人员：宋灿，吴理达，冉杰，田甜，于杨，顾雨春，
申请(专利权)人：呈诺再生医学科技北京有限公司，
类型：发明
国别省市：
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