【技术实现步骤摘要】
一种从桔梗中分离纯化桔梗皂苷的方法，属于。
技术介绍
1、桔梗皂苷（platycodin）是桔梗的主要活性成分。上个世纪六十年代，先后有桔梗皂苷元、桔梗酸 a，桔梗酸 b，桔梗酸 c、远志酸等的报道，研究发现，从桔梗的种子中能分离出 10 种黄酮类化合物，从桔梗的花中提到3种黄酮类化合物；从桔梗的根中分离出的酚类化合物，共有 15 种，从桔梗地上部分分离出12种；从桔梗中分离得到的挥发油类化合物主要有酸类、酯类、烃类、醇类、酚类、醚类、醛类和酮类化合物等，有75种之多；桔梗中含有丰富的菊糖、桔梗聚糖等，有的具有特殊的营养保健功效；桔梗中还发现有五种甾醇类化合物；桔梗的根部还含有十多种的氨基酸，且含8种必需氨基酸，十多种矿物质，特别是多种的必需微量元素等，营养价值较高。
2、随着对桔梗研究的深入，其生物学活性或药理活性不断被发现，如镇咳、祛痰、抗炎、镇静、镇痛、解热、酶抑制、抗肿瘤、抗肥胖、护肝、抗敏、改善胰岛素抵抗、调节no合成、降脂作用、促胰外分泌腺分泌、抗胃溃疡活性、抗氧化作用、心血管系统、促进胆汁分泌、抗丝裂霉素c诱变、免疫佐剂、改善由酒精诱导的鼠认知损伤、抗水肿及利尿等等作用。
技术实现思路
1、本专利技术提供的一种从桔梗中分离纯化桔梗皂苷的方法，包括以下步骤：
2、桔梗总皂苷粗品的制备，桔梗总皂苷粗品的初步分离、桔梗总皂苷的纯化。
3、作为优选，取桔梗粉5~10g，置具塞瓶，加入50~100ml水，浸泡，于30~40℃超声处理30~40
4、 作为优选，桔梗总皂苷100~120g，用20~30ml甲醇溶解后，加入 50g 硅胶，拌匀，再旋去溶剂得到粉末，将其加到柱子顶层，将一团脱脂棉塞至接近硅胶表面；以chci3-meoh梯度洗脱（8:5~100:15），其中meoh含10~15% h2o，每个比例冲洗6~10体积柱，每300~500ml为一个流份收集，流速25~40ml/min；点样于硅胶g薄层板，15~20% h2so4-乙醇溶液显色，100~105℃，10~15min，合并含有桔梗皂苷的部分，浓缩、干燥得桔梗皂苷d粗品。
5、作为优选，从已获得的桔梗皂苷d粗品中取2~4g，用反相c-18硅胶柱色谱进行反复精制，以获得纯度在90%以上的桔梗皂昔d。
6、其中，树脂的上样量过大，会造成有效成分的损失上样量太小又会增加工作量和生产成本，因此必须确定合理的上样量。
7、作为优选，第一次反相硅胶柱精制
8、采用中压柱色谱（buchi中压柱），以ch3cn-h2o进行梯度洗脱（10:90~20:80），每个比例冲洗4~6l，每200~400ml为一流份，流速为20~30ml/min；合并桔梗皂苷d为主斑点的流份，回收溶剂。
9、作为优选，第二次反相c-18硅胶柱精制
10、第一次反相c-18硅胶柱精制得到的产物，用反相c-18硅胶柱进行第二次精制；精制采用中压柱色谱（buchi中压柱），以ch3cn-h2o梯度洗脱（20:80~30:70），每个比例冲洗4~6l，每200~400ml为一流份，流速为20~30ml/min；对于纯度达到90%左右的流份，回收溶剂至干，以备进一步通过高效制备液相纯化；合并其他含有桔梗皂昔但是纯度远小于90%的流份，回收溶剂至干进行第三次反相c-18硅胶柱精制。
11、作为优选，桔梗皂苷的纯化：取6~8根直径相同的玻璃柱，分别装入ab-8树脂30~40g，精密移取药液，分别以30~90%饱和吸附量上样，吸附30~40min后，依次用去离子水200~300ml，30~90%乙醇200~300ml洗脱；各流份浓缩、干燥、称重。
12、其中，乙醇的浓度越大，洗脱物的总重量越大。
13、采用本专利技术，利用硅胶柱，进一步对桔梗总皂苷进行分离，充分利用不同部位极性的差别，获得pd（桔梗皂苷d）。
14、其中，桔梗中的主要活性成分为桔梗皂苷，而其中桔梗皂苷d含量较高，桔梗皂苷d对mcf-7和hl-60癌细胞株具有良好的抑制效果，桔梗皂苷d具有抗氧化特性，有助于中和自由基并减轻氧化应激引起的细胞损伤。
15、采用本专利技术，大孔树脂法不仅产率高，并且本方法的试剂污染较小、成本低，大孔树脂的表面积较大、交换速度较快、机械强度高、抗污染能力强、热稳定好，在水溶液和非水溶液中都能使用。
16、作为优选，浓缩干燥工艺：将乙醇部分的洗脱液减压浓缩70~80℃、真空度-0.08~-0.1，至相对密度为1.1~1.2，然后于70~80℃干燥，得桔梗皂苷d。
17、采用本专利技术，优点在于pgts（桔梗总皂苷）和pd（桔梗皂苷d）具有较强地体外清除自由基的能力，具有较强的还原力，可作为抗氧化剂使用。
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1.一种从桔梗中分离纯化桔梗皂苷的方法，其特征在于包括：桔梗总皂苷粗品的制备，桔梗总皂苷粗品的初步分离和桔梗总皂苷的纯化；其中，桔梗总皂苷粗品的初步分离包括第一次反相硅胶柱精制和第二次反相C-18硅胶柱精制。
2.根据权利要求1所述的一种从桔梗中分离纯化桔梗皂苷的方法，其特征在于：取桔梗粉5~10g，置具塞瓶，加入50~100mL水，浸泡，于30~40℃超声处理30~40min，离心，收集滤液；沉淀再次加水50~60mL，同上处理，再提取一次，合并二次提取液；提取液旋转蒸发，浓缩至干，加入20~30mL甲醇，加热溶解，放冷，弃沉淀，加入50~60mL乙醚，离心，弃上清液，沉淀中分别加入甲醇20~30mL，加热溶解，放冷，离心，收集上清液，沉淀再分别加入5~10mL甲醇，同上处理，合并三次所得上清液；将上清液浓缩至原体积的1/3~1/2，加入50~60mL乙醚；同上操作，合并上清液，浓缩至少许，移至恒重蒸发皿，置60~80℃烘箱5~6小时至恒重，得浅淡黄色粉末。
3.根据权利要求2所述的一种从桔梗中分离纯化桔梗皂苷的方法，其特征在于：桔梗总皂苷100~120
4.根据权利要求3所述的一种从桔梗中分离纯化桔梗皂苷的方法，其特征在于：从已获得的桔梗皂苷D粗品中取2~4g，用反相C-18硅胶柱色谱进行反复精制，以获得纯度在90%以上的桔梗皂昔D。
5.根据权利要求4所述的一种从桔梗中分离纯化桔梗皂苷的方法，其特征在于：第一次反相硅胶柱精制：
6.根据权利要求5所述的一种从桔梗中分离纯化桔梗皂苷的方法，其特征在于：第二次反相C-18硅胶柱精制：
7.根据权利要求6所述的一种从桔梗中分离纯化桔梗皂苷的方法，其特征在于：桔梗皂苷的纯化：
8.根据权利要求7所述的一种从桔梗中分离纯化桔梗皂苷的方法，其特征在于：浓缩干燥工艺包括将乙醇部分的洗脱液减压浓缩70~80℃、真空度-0.08~-0.1，至相对密度为1.1~1.2，然后于70~80℃干燥，得桔梗皂苷D。
...【技术特征摘要】
1.一种从桔梗中分离纯化桔梗皂苷的方法，其特征在于包括：桔梗总皂苷粗品的制备，桔梗总皂苷粗品的初步分离和桔梗总皂苷的纯化；其中，桔梗总皂苷粗品的初步分离包括第一次反相硅胶柱精制和第二次反相c-18硅胶柱精制。
2.根据权利要求1所述的一种从桔梗中分离纯化桔梗皂苷的方法，其特征在于：取桔梗粉5~10g，置具塞瓶，加入50~100ml水，浸泡，于30~40℃超声处理30~40min，离心，收集滤液；沉淀再次加水50~60ml，同上处理，再提取一次，合并二次提取液；提取液旋转蒸发，浓缩至干，加入20~30ml甲醇，加热溶解，放冷，弃沉淀，加入50~60ml乙醚，离心，弃上清液，沉淀中分别加入甲醇20~30ml，加热溶解，放冷，离心，收集上清液，沉淀再分别加入5~10ml甲醇，同上处理，合并三次所得上清液；将上清液浓缩至原体积的1/3~1/2，加入50~60ml乙醚；同上操作，合并上清液，浓缩至少许，移至恒重蒸发皿，置60~80℃烘箱5~6小时至恒重，得浅淡黄色粉末。
3.根据权利要求2所述的一种从桔梗中分离纯化桔梗皂苷的方法，其特征在于：桔梗总皂苷100~120g，用20~30ml甲醇溶解后，加入 50g 硅胶，拌匀，再旋去溶剂得到粉末，将其加到柱子顶层，将一团脱脂棉塞至...
【专利技术属性】
技术研发人员：程勇，邵云东，
申请(专利权)人：杭州天草科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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