以5-羟色氨酸为底物合成N-乙酰基-5甲氧基色胺的解脂耶氏酵母工程菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种以5‑羟色氨酸为底物合成N‑乙酰基‑5甲氧基色胺的解脂耶氏酵母工程菌及其应用，属于生物技术领域。本发明专利技术将L‑芳香族氨基酸脱羧酶、芳烷胺N‑乙酰转移酶，咖啡酸氧甲基转移酶3个基因在解脂耶氏酵母菌株中进行异源整合，构建一条完整的以5‑羟色氨酸为底物生物合成N‑乙酰基‑5‑甲氧基色胺异源合成途径，N‑乙酰基‑5甲氧基色胺的产量为1.62g/L。最后敲除解脂耶氏酵母菌株中的底物、产物降解基因，进一步将产量提高到1.93g/L。5‑L发酵罐发酵产量17.6g/L。本发明专利技术生产工艺产N‑乙酰基‑5‑甲氧基色胺不污染环境，且产量高、成本低，为工业化生物合成N‑乙酰基‑5‑甲氧基色胺提供了依据。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物，尤其涉及一种以5-羟色氨酸为底物生物合成n-乙酰基-5甲氧基色胺的解脂耶氏酵母工程菌、构建及其应用。

技术介绍

1、解脂耶氏酵母是一种典型的非常规酵母，该酵母是严格好氧菌，同时也被认定为gras菌株(generally regard as safe)，由于其具有底物的广谱性、高效分泌蛋白质和生长条件要求低等多种功能，该酵母已经成为目前代谢工程及合成生物学研究中备受关注且极具潜力的非模式微生物底盘细胞之一。

2、n-乙酰基-5甲氧基色胺又名褪黑素(melatonin，mt)，松果体素，存在于细菌、真菌、藻类、植物、昆虫、脊椎动物等多种生物体中，被广泛用于治疗失眠、同时也表现出良好的抗氧化、抗炎、清除自由基等生理活性。mt的生物合成以5-羟基色氨酸作为前体，经3步酶促反应合成：首先5-羟基色氨酸(5-hydroxytryptophan，5-htp)经l-芳香族氨基酸脱羧酶(aromatic-l-amino-acid decarboxylase)作用生成5-羟基色胺(serotonin，5-ht)，随后血清素n-乙酰基转移酶(se本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.以5-羟色氨酸为底物生物合成N-乙酰基-5甲氧基色胺的解脂耶氏酵母工程菌，其特征在于：该工程菌中敲除了解脂耶氏酵母的编码吲哚胺2，3-双加氧酶的基因和编码芳香族氨基酸氨基转移酶I的基因，和整合了编码芳香族氨基酸脱羧酶的基因ddc、编码血清素N-乙酰基转移酶的基因SNAT和编码N-乙酰血清素氧甲基转移酶的基因ASMT。

2.权利要求1所述的以5-羟色氨酸为底物生物合成N-乙酰基-5甲氧基色胺的解脂耶氏酵母工程菌的构建方法，其特征在于：将解脂耶氏酵母的编码吲哚胺2，3-双加氧酶的基因和编码芳香族氨基酸氨基转移酶I的基因敲除，构建含有编码芳香族氨基酸脱羧酶的基因ddc的重组载体...

【技术特征摘要】

1.以5-羟色氨酸为底物生物合成n-乙酰基-5甲氧基色胺的解脂耶氏酵母工程菌，其特征在于：该工程菌中敲除了解脂耶氏酵母的编码吲哚胺2，3-双加氧酶的基因和编码芳香族氨基酸氨基转移酶i的基因，和整合了编码芳香族氨基酸脱羧酶的基因ddc、编码血清素n-乙酰基转移酶的基因snat和编码n-乙酰血清素氧甲基转移酶的基因asmt。

2.权利要求1所述的以5-羟色氨酸为底物生物合成n-乙酰基-5甲氧基色胺的解脂耶氏酵母工程菌的构建方法，其特征在于：将解脂耶氏酵母的编码吲哚胺2，3-双加氧酶的基因和编码芳香族...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴元庆，杨志斌，李迪，张倚霞，胡江林，
申请(专利权)人：河北维达康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：