【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医学和医药领域，涉及疾病的分型和筛选敏感药物的方法，尤其涉及癌症的分型和筛选其有效治疗药物的方法，具体涉及肝内胆管细胞癌的激酶分型方法和肝内胆管细胞癌敏感药物的筛选方法。
技术介绍
1、肝内胆管细胞癌(intrahepatic cholangiocarcinoma icca)是起源于肝内胆管上皮的恶性肿瘤，是发病率仅次于肝细胞肝癌的第二大肝脏原发恶性肿瘤，约占肝脏原发恶性肿瘤的10％-15％，近年来发病率呈上升趋势。由于其发病隐匿，细胞学及病理学诊断敏感性不高等特点，大多数病人被确诊时已是疾病进展期。目前，icca 的诊断主要依赖于病人症状体征，ct/mri等影像学检查，ca-19-9等血清学指标，缺乏敏感特异的诊断标记物，大多数病人被发现时已处于疾病进展期，失去根治性切除机会，icca病人预后极差，手术切除肿瘤被认为是主要治疗手段，但只有约35％的早期病人具有根治性切除的指证。单纯的化学药物治疗应用于肝内胆管细胞癌的效果不佳，目前仍缺乏根治icca的药物治疗手段。
技术实现思路
1、本专利技术的任务是提供一种肝内胆管细胞癌激酶分型及其敏感药物的筛选方法，以克服目前药物治疗肝内胆管细胞癌(icca)效果不佳、缺乏筛选有效治疗药物手段的不足，有针对性地提高药物治疗肝内胆管细胞癌(icca)的效果，在肝内胆管细胞癌(icca)的治疗上实现精准用药。
2、本专利技术的技术方案包括肝内胆管细胞癌激酶分型方法和根据肝内胆管细胞癌的激酶分型筛选肝内胆管细胞癌敏感或有效
3、本专利技术提供的肝内胆管细胞癌激酶分型方法包括以下步骤：
4、a.检测肝内胆管细胞癌组织样本中激酶的表达水平,所述的激酶包括：属于细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinases,cdk)家族的激酶cdk1、cdk4和cdk17、属于polo样激酶(polo-like kinase,plk)家族的激酶plk1、属于蛋白激酶c(protein kinasec,pkc)家族的激酶prkcd和prkce；
5、b.按表达增高的激酶类型确定肝内胆管细胞癌的激酶分型：
6、当属于蛋白激酶c家族(pkc家族)的prkcd激酶和prkce激酶同时增高，或仅prkce激酶增高，分型为pkc增高型；
7、当仅属于蛋白激酶c家族(pkc家族)的prkcd激酶增高，分型为pkc增高ii型；
8、当属于细胞周期蛋白依赖性激酶家族(cdk家族)的cdk1、cdk4和cdk17同时增高，或其中一种单独增高，分型为cdk增高型；
9、当plk、cdk和pkc三个激酶家族中各自至少有一种激酶增高，分型为plk、cdk和pkc联合增高型；
10、当属于pkc激酶家族的prkcd激酶增高，同时属于cdk激酶家族的cdk1、cdk4和cdk17激酶中至少有一种增高，分型为cdk和pkc联合增高型。
11、本专利技术提供的根据肝内胆管细胞癌的激酶分型筛选肝内胆管细胞癌敏感或有效治疗药物的方法，包括以下步骤：
12、步骤一：检测肝内胆管细胞癌组织样本中激酶的表达水平,所述的激酶包括：
13、属于细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinases,cdk)家族的激酶、
14、属于polo样激酶(polo-like kinase,plk)家族的激酶、和/或
15、属于蛋白激酶c(protein kinase c,pkc)家族的激酶；
16、步骤二：按表达增高的激酶类型确定肝内胆管细胞癌的激酶分型；
17、步骤三：根据肝内胆管细胞癌组织样本的激酶类型选择敏感或有效药物。
18、当所述的属于细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinases,cdk)家族的激酶是cdk1、cdk4和cdk17；所述的属于polo样激酶(polo-like kinase,plk)家族的激酶是plk1；所述的属于蛋白激酶c(protein kinase c,pkc)家族的激酶是prkcd和prkce 时，按表达增高的激酶类型对肝内胆管细胞癌进行激酶分型的具体方法是：
19、当属于蛋白激酶c家族(pkc家族)的prkcd激酶和prkce激酶同时增高，或仅prkce激酶增高，分型为pkc增高型；
20、当仅属于蛋白激酶c家族(pkc家族)的prkcd激酶增高，分型为pkc增高ii型；
21、当属于细胞周期蛋白依赖性激酶家族(cdk家族)的cdk1、cdk4和cdk17同时增高，或其中一种单独增高，分型为cdk增高型；
22、当plk、cdk和pkc三个激酶家族中各自至少有一种激酶增高，分型为plk、cdk和pkc联合增高型；
23、当属于pkc激酶家族的prkcd激酶增高，同时属于cdk激酶家族的cdk1、cdk4和cdk17激酶中至少有一种增高，分型为cdk和pkc联合增高型。
24、上述方法步骤三所述的根据肝内胆管细胞癌组织样本的激酶类型选择治疗肝内胆管细胞癌的敏感药物或有效药物的具体方法是：
25、当肝内胆管细胞癌组织样本的激酶类型为pkc增高型时，选择的敏感药物或有效药物为揪毒素rottlerin；
26、当肝内胆管细胞癌组织样本的激酶类型为pkc增高ii型时，选择的敏感药物或有效药物为gf109203x；
27、当肝内胆管细胞癌组织样本的激酶类型为cdk增高型时，选择的敏感药物或有效药物为 roniciclib；
28、当肝内胆管细胞癌组织样本的激酶类型为plk、cdk和pkc联合增高型时，选择的敏感药物或有效药物为福坦替尼fostamatinib；
29、当肝内胆管细胞癌组织样本的激酶类型为cdk和pkc联合增高型时，选择的敏感药物或有效药物为夫拉平度alvocidib。
30、当肝内胆管细胞癌组织样本的激酶类型为混合型时，选择联合用药。
31、上述方法步骤一中所述的检测肝内胆管细胞癌组织样本中激酶的表达水平的方法是：用 qrt-pcr检测肝内胆管细胞癌组织样本、癌旁组织样本中待测激酶的表达水平，用内参进行标准化处理后比较癌组织样本与癌旁组织样本中所测激酶的差异倍数，大于两倍的认定为该激酶表达增高，具体步骤包括：
32、(1)分别提取肝内胆管细胞癌组织样本、癌旁组织样本的总rna，采用逆转录得到癌组织样本第一链cdna和癌旁组织样本第一链cdna,用于后续实时定量pcr检测；
33、(2)分别在单独qpcr管中配制用于检测癌组织样本中待测激酶ct值的混合液(混合液 e)、用于检测癌组织样本中内参的ct值的混合液(混合液f)、用于检测癌旁组织样本中待测激酶ct值的混合液(混合液g)、用于检测癌旁组织样本中内参的ct值的混合液(混合液 h)，进行实时定量pcr反应，本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种肝内胆管细胞癌敏感药物的筛选方法，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤一中所述的相关激酶包括：
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤二所述的按表达增高的激酶类确定肝内胆管细胞癌的激酶分型的具体方法是：
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的根据肝内胆管细胞癌的激酶类型选择敏感药物的具体方法是：
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，检测肝内胆管细胞癌组织样本中激酶的表达水平的方法是：用qRT-PCR检测肝内胆管细胞癌组织样本、癌旁组织样本中待测激酶的表达水平，用内参进行标准化处理后比较癌组织样本与癌旁组织样本中所测激酶的差异倍数，大于两倍的认定为该激酶表达增高。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述的用qRT-PCR检测肝内胆管细胞癌组织样本、癌旁组织样本中待测激酶的表达水平，用内参进行标准化处理后比较癌组织样本与癌旁组织样本中激酶的差异倍数的具体方法包括以下步骤：
8.根据权利要求7所
9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，当所述的待测激酶为权利要求3中所述的PRKCD、PRKCE、CDK1、CDK4、CDK17和/或PLK1时，用于qPCR检测的相关激酶的上、下游引物分别是：
11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于：
12.一种肝内胆管细胞癌的激酶分型方法，包括以下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种肝内胆管细胞癌敏感药物的筛选方法，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤一中所述的相关激酶包括：
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤二所述的按表达增高的激酶类确定肝内胆管细胞癌的激酶分型的具体方法是：
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的根据肝内胆管细胞癌的激酶类型选择敏感药物的具体方法是：
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，检测肝内胆管细胞癌组织样本中激酶的表达水平的方法是：用qrt-pcr检测肝内胆管细胞癌组织样本、癌旁组织样本中待测激酶的表达水平，用内参进行标准化处理后比较癌组织样本与癌旁组织样本中所测激酶的差异倍数，大于两倍的认定为该激酶表达增高。
7.根...
【专利技术属性】
技术研发人员：褚亮，张必翔，陈孝平，薛宇，
申请(专利权)人：华中科技大学同济医学院附属同济医院，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。