【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及体外检测，具体涉及一种用于体外诊断脑动静脉畸形的碱基序列检测产品。
技术介绍
0、技术背景
1、脑动静脉畸形(bavm)为脑动静脉异常连接形成的畸形团块，是青少年蛛网膜下腔出血的主要病因之一。由于bavm位于颅内，手术难度高，风险大。bavm常由kras基因的体细胞突变导致。目前唯一鉴定bavm病灶基因突变的方式是开颅取畸形组织进行基因检测，风险极高，目前尚无bavm病灶的体外诊断方法。因此，开发bavm体细胞突变的体外诊断技术对于bavm未来的药物治疗至关重要。
2、ctdna为循环肿瘤细胞dna，是指在血液中可能存在少部分肿瘤细胞坏死分泌的dna片段，常用于一些癌症的早期诊断。前期研究发现，bavm病灶也会有ctdna的分泌，但其血浆浓度大大低于其他恶性肿瘤。故而亟需一种能够通过体外检测ctdna从而实现脑动静脉畸形早期预警的高灵敏度产品。
技术实现思路
1、针对上述存在的拘束局限性，本专利技术提出了一种用于体外诊断脑动静脉畸形的碱基序列检测产品，克服了
技术介绍
中提到的不足和缺陷。
2、为实现上述目的，本专利技术采用了以下技术方案：
3、本专利技术的专利技术点是提供了一种用于体外诊断脑动静脉畸形的碱基序列检测产品，所述产品中，包括有检测脑动静脉畸形相关碱基序列的引物探针组合物，所述引物的核苷酸序列包括如seq id no：1所示的上游引物序列和seq id no：2所示的下游引物序列；所述探针的核苷酸序列包括与野生型
4、引物核苷酸序列具体为：
5、seq id no：1：
6、f primer：5′-gactgaatataaacttgtggta-3′；
7、seq id no：2：
8、r primer：5′-gtccacaaaatgattctga-3′。
9、探针核苷酸序列具体为：
10、seq id no：3：
11、wt hex-5′-actcttgcctacgccaccag-3′-bhq1。
12、seq id no：4：
13、g12a fam-5′-actcttgcctacgccagcag-3′-bhq1。
14、seq id no：5：
15、g12v fam-5′-actcttgcctacgccaacag-3′-bhq1。
16、seq id no：6：
17、g12d fam-5′-actcttgcctacgccatcag-3′-bhq1。
18、其中探针序列seq id no：3与野生型kras特异性结合，seq id no：4与g12a变异的kras特异性结合，seq id no：5与g12v变异的kras特异性结合，seq id no：6与g12d变异的kras特异性结合。
19、可选地，上述用于体外诊断脑动静脉畸形的碱基序列检测产品，所述引物探针组合物的序列为：引物序列seq id no：1、seq id no：2和探针序列seq id no：3、seq id no：4的组合；引物序列seq id no：1、seq id no：2和探针序列seq id no：3、seq id no：5的组合；引物序列seq id no：1、seq id no：2和探针序列seq id no：3、seq id no：6的组合。
20、可选地，上述用于体外诊断脑动静脉畸形的碱基序列检测产品，所述脑动静脉畸形相关碱基序列中，野生型kras序列为如seq id no：7所示的核苷酸序列；三种突变型kras序列为如seq id no：8-seq id no：10所示的核苷酸序列。
21、其中，野生型kras序列seq id no：7：
22、atgactgaatataaacttgtggtagttggagctggtggcgtaggcaagagtgccttgacgatacagctaattcagaatcattttgtggacgaatatgatccaacaatagaggattcctacaggaagcaagtagtaattgatggagaaacct。
23、kras突变型序列：
24、seq id no：8：(35位g突变为c，即g12a)
25、atgactgaatataaacttgtggtagttggagctgctggcgtaggcaagagtgccttgacgatacagctaattcagaatcattttgtggacgaatatgatccaacaatagaggattcctacaggaagcaagtagtaattgatggagaaacct；
26、seq id no：9：(35位g突变为t，即g12v)
27、atgactgaatataaacttgtggtagttggagctgttggcgtaggcaagagtgccttgacgatacagctaattcagaatcattttgtggacgaatatgatccaacaatagaggattcctacaggaagcaagtagtaattgatggagaaacct；
28、seq id no：10：(35位g突变为a，即g12d)
29、atgactgaatataaacttgtggtagttggagctgatggcgtaggcaagagtgccttgacgatacagctaattcagaatcattttgtggacgaatatgatccaacaatagaggattcctacaggaagcaagtagtaattgatggagaaacct。
30、可选地，上述用于体外诊断脑动静脉畸形的碱基序列检测产品，所述野生型kras序列seq id no：7被探针序列seq id no：3特异性识别；所述突变型kras序列seq id no：8被探针序列seq id no：4特异性识别；所述突变型kras序列seq id no：9被探针序列seq idno：5特异性识别；所述突变型kras序列seq id no：10被探针序列seq id no：6特异性识别。
31、可选地，上述用于体外诊断脑动静脉畸形的碱基序列检测产品，所述碱基序列检测产品为试剂盒。
32、可选地，上述用于体外诊断脑动静脉畸形的碱基序列检测产品，所述试剂盒中，还包括有pcr反应液、阳性质控品、阴性质控品和空白对照。
33、可选地，上述用于体外诊断脑动静脉畸形的碱基序列检测产品，所述pcr反应液中包括有accustart ii taq dna聚合酶、mgcl2、datp、dctp、dgtp和dttp组分。
34、其中datp为脱氧腺苷三磷酸，dctp为脱氧胞苷三本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于体外诊断脑动静脉畸形的碱基序列检测产品，其特征在于，所述产品中，包括有检测脑动静脉畸形相关碱基序列的引物探针组合物，所述引物的核苷酸序列包括如SEQ ID NO：1所示的上游引物序列和SEQ ID NO：2所示的下游引物序列；所述探针的核苷酸序列包括与野生型KRAS特异性结合的如SEQ ID NO：3所示的序列及与突变型KRAS特异性结合的如SEQ ID NO：4-SEQ ID NO：6任一所示的序列。
2.根据权利要求1所述的一种用于体外诊断脑动静脉畸形的碱基序列检测产品，其特征在于，所述引物探针组合物的序列为：引物序列SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2和探针序列SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4的组合；引物序列SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2和探针序列SEQ IDNO：3、SEQ ID NO：5的组合；引物序列SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2和探针序列SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：6的组合。
3.根据权利要求1或2所述的一种用于体外诊断脑动静脉畸形的碱基序列检测产品，其特征在
4.根据权利要求3所述的一种用于体外诊断脑动静脉畸形的碱基序列检测产品，其特征在于，所述野生型KRAS序列SEQ ID NO：7被探针序列SEQ ID NO：3特异性识别；所述突变型KRAS序列SEQ ID NO：8被探针序列SEQ ID NO：4特异性识别；所述突变型KRAS序列SEQ IDNO：9被探针序列SEQ ID NO：5特异性识别；所述突变型KRAS序列SEQ ID NO：10被探针序列SEQ ID NO：6特异性识别。
5.根据权利要求4所述的一种用于体外诊断脑动静脉畸形的碱基序列检测产品，其特征在于，所述碱基序列检测产品为试剂盒。
6.根据权利要求5所述的一种用于体外诊断脑动静脉畸形的碱基序列检测产品，其特征在于，所述试剂盒中，还包括有PCR反应液、阳性质控品、阴性质控品和空白对照。
7.根据权利要求6所述的一种用于体外诊断脑动静脉畸形的碱基序列检测产品，其特征在于，所述PCR反应液中包括有AccuStart II Taq DNA聚合酶、MgCl2、dATP、dCTP、dGTP和dTTP组分。
8.根据权利要求7所述的一种用于体外诊断脑动静脉畸形的碱基序列检测产品，其特征在于，所述试剂盒中，PCR扩增的反应体系为：5×PerfeCTa Multiplex qPCR ToughMix 5μl、荧光素钠盐Fluorescein sodium salt 2.5μl、20×KRAS探针1μl、待测样本DNA 2μl以及补充ddH2O至25μl。
9.根据权利要求8所述的一种用于体外诊断脑动静脉畸形的碱基序列检测产品，其特征在于，所述试剂盒中，PCR扩增的反应程序为：95℃、3min，循环1次；95℃、15sec，60℃、30sec，循环45次。
...【技术特征摘要】
1.一种用于体外诊断脑动静脉畸形的碱基序列检测产品，其特征在于，所述产品中，包括有检测脑动静脉畸形相关碱基序列的引物探针组合物，所述引物的核苷酸序列包括如seq id no：1所示的上游引物序列和seq id no：2所示的下游引物序列；所述探针的核苷酸序列包括与野生型kras特异性结合的如seq id no：3所示的序列及与突变型kras特异性结合的如seq id no：4-seq id no：6任一所示的序列。
2.根据权利要求1所述的一种用于体外诊断脑动静脉畸形的碱基序列检测产品，其特征在于，所述引物探针组合物的序列为：引物序列seq id no：1、seq id no：2和探针序列seq id no：3、seq id no：4的组合；引物序列seq id no：1、seq id no：2和探针序列seq idno：3、seq id no：5的组合；引物序列seq id no：1、seq id no：2和探针序列seq id no：3、seq id no：6的组合。
3.根据权利要求1或2所述的一种用于体外诊断脑动静脉畸形的碱基序列检测产品，其特征在于，所述脑动静脉畸形相关碱基序列中，野生型kras序列为如seq id no：7所示的核苷酸序列；三种突变型kras序列为如seq id no：8-seq id no：10所示的核苷酸序列。
4.根据权利要求3所述的一种用于体外诊断脑动静脉畸形的碱基序列检测产品，其特征在于，所述野生型kras序列seq id no：7被探针序列seq id no：3特异性识别...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵森，王坤，李翛然，
申请(专利权)人：苏州医图合协医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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