【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，尤其是涉及一种全氟硅烷化二氧化硅纳米颗粒在微滴数字pcr油相表面活性剂中的应用。
技术介绍
1、数字pcr(digital pcr，dpcr)是一种基于单分子pcr方法来进行计数的核酸定量方法，是一种绝对定量的方法。主要采用当前分析化学热门研究领域的微流控或微滴化方法，将大量稀释后的核酸溶液分散至芯片的微反应器或微滴中，每个反应器的核酸模板数少于或者等于1个。这样经过pcr循环之后，有一个核酸分子模板的反应器就会给出荧光信号，没有模板的反应器就没有荧光信号。根据相对比例和反应器的体积，就可以推算出原始溶液的核酸浓度。与传统定量pcr不同，数字pcr通过直接计数的方法，可以实现起始dna模板的绝对定量。
2、微滴式数字pcr(droplet digital pcr，ddpcr)将样品进行微滴化处理，形成几万个纳升级液滴，每个液滴或不含待检核酸靶分子，或含有一个至数个待检核酸靶分子。经pcr扩增后，逐个对微滴进行检测，根据泊松分布原理及阳性微滴的个数与比例即可得出靶分子的起始拷贝数或浓度。目前比较常用的油相为氟化油，如fc-40、fc-7500，配用的表面活性剂有：pfpe-peg-pfpe、1,1,2,2-四氢全氟癸醇等。然而上述油相和表面活性剂与pcr试剂适配的通用性不够高，还有待提升。
3、有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
1、本专利技术的第一目的在于提供一种全氟硅烷化二氧化硅纳米颗粒在微滴数字pcr油相表面活性剂中的应用，以
2、本专利技术的第二目的在于提供一种微滴数字pcr油相组合物。
3、本专利技术的第三目的在于提供上述微滴数字pcr油相组合物在微滴数字pcr中的应用。
4、本专利技术的第四目的在于提供一种微滴数字pcr方法。
5、本专利技术的第五目的在于提供一种微滴数字pcr试剂盒。
6、第一方面，本专利技术提供了一种全氟硅烷化二氧化硅纳米颗粒在微滴数字pcr油相表面活性剂中的应用；
7、所述全氟硅烷化二氧化硅纳米颗粒为表面硅烷化修饰有全氟烃基硅烷的二氧化硅纳米颗粒。
8、作为进一步技术方案，所述全氟烃基硅烷包括：1h，1h，2h，2h-全氟烃基三取代基硅烷，其中烃基的碳链长度为c8-c12，取代基包括乙氧基、甲氧基或氯原子中的至少一种。
9、作为进一步技术方案，所述二氧化硅纳米颗粒的粒径为20-200nm。
10、作为进一步技术方案，所述全氟硅烷化二氧化硅纳米颗粒的制备方法包括：将全氟烃基硅烷与二氧化硅纳米颗粒进行硅烷化反应，制备得到全氟硅烷化二氧化硅纳米颗粒。
11、作为进一步技术方案，所述全氟硅烷化二氧化硅纳米颗粒的制备方法包括：将二氧化硅纳米颗粒和全氟烃基硅烷于有机溶剂中溶解混合，经催化反应，制备得到全氟硅烷化二氧化硅纳米颗粒；
12、优选地，混合后，有机溶剂中二氧化硅纳米颗粒的浓度为20mg/ml-30mg/ml；
13、优选地，混合后，有机溶剂中全氟烃基硅烷的浓度为5μl/ml-160μl/ml。
14、作为进一步技术方案，所述溶剂包括甲醇、乙醇或丙醇中的至少一种；
15、所述催化反应的催化剂包括氨分子和水分子；
16、所述催化反应的时间为6-12h。
17、第二方面，本专利技术提供了一种微滴数字pcr油相组合物，主要由所述的全氟硅烷化二氧化硅纳米颗粒和氢氟醚组成；
18、所述微滴数字pcr油相组合物中全氟硅烷化二氧化硅纳米颗粒的含量为15-50mg/ml。
19、第三方面，本专利技术提供了一种微滴数字pcr油相组合物在微滴数字pcr中的应用。
20、第四方面，本专利技术提供了一种微滴数字pcr方法，以所述的微滴数字pcr油相组合物作为油相。
21、第五方面，本专利技术提供了一种微滴数字pcr试剂盒，包括所述的微滴数字pcr油相组合物。
22、与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
23、经专利技术人研究发现，二氧化硅纳米颗粒经过全氟烃基硅烷化试剂硅烷化后，在纳米颗粒表面形成一定程度的硅烷化修饰，使得纳米颗粒表面带有部分的全氟烃基因而具有油水两亲的特性。在使用含全氟硅烷化二氧化硅纳米颗粒的氢氟醚(hfe)生成油包水微液滴的过程中，二氧化硅纳米颗粒能迅速自主装到液滴的油水界面，形成保护层。该颗粒保护层相比高分子两亲性表面活性剂来说更难以从界面发生逃逸，并且此类表面活性剂不会在连续相中形成胶束，因此液滴的稳定性更好，而得益于液滴良好的稳定性，该表面活性剂通用性更高，可适用于更多种类的核酸扩增mix。
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1.全氟硅烷化二氧化硅纳米颗粒在微滴数字PCR油相表面活性剂中的应用；
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述全氟烃基硅烷包括：1H，1H，2H，2H-全氟烃基三取代基硅烷，其中烃基的碳链长度为C8-C12，取代基包括乙氧基、甲氧基或氯原子中的至少一种。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述二氧化硅纳米颗粒的粒径为20-200nm。
4.根据权利要求1-3任一项所述的应用，其特征在于，所述全氟硅烷化二氧化硅纳米颗粒的制备方法包括：将全氟烃基硅烷与二氧化硅纳米颗粒进行硅烷化反应，制备得到全氟硅烷化二氧化硅纳米颗粒。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述全氟硅烷化二氧化硅纳米颗粒的制备方法包括：将二氧化硅纳米颗粒和全氟烃基硅烷于有机溶剂中溶解混合，经催化反应，制备得到全氟硅烷化二氧化硅纳米颗粒；
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述溶剂包括甲醇、乙醇或丙醇中的至少一种；
7.一种微滴数字PCR油相组合物，其特征在于，主要由权利要求1-6任一项中所述的全氟硅烷化二氧化硅纳米颗粒
8.权利要求7所述的微滴数字PCR油相组合物在微滴数字PCR中的应用。
9.一种微滴数字PCR方法，其特征在于，以权利要求7所述的微滴数字PCR油相组合物作为油相。
10.一种微滴数字PCR试剂盒，其特征在于，包括权利要求7所述的微滴数字PCR油相组合物。
...【技术特征摘要】
1.全氟硅烷化二氧化硅纳米颗粒在微滴数字pcr油相表面活性剂中的应用；
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述全氟烃基硅烷包括：1h，1h，2h，2h-全氟烃基三取代基硅烷，其中烃基的碳链长度为c8-c12，取代基包括乙氧基、甲氧基或氯原子中的至少一种。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述二氧化硅纳米颗粒的粒径为20-200nm。
4.根据权利要求1-3任一项所述的应用，其特征在于，所述全氟硅烷化二氧化硅纳米颗粒的制备方法包括：将全氟烃基硅烷与二氧化硅纳米颗粒进行硅烷化反应，制备得到全氟硅烷化二氧化硅纳米颗粒。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述全氟硅烷化二氧化硅纳...
【专利技术属性】
技术研发人员：沈敏杰，周鑫鑫，王虹军，陈芝娟，贺贤汉，
申请(专利权)人：杭州博日科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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