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【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物,尤其是涉及一种pcr试剂的冻干保护剂及其应用、混合试剂及其冷冻干燥方法和产品。
技术介绍
1、聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,pcr)是由美国gentus 公司的mullis于1983年专利技术,后来pcr技术很快便成为科研和临床诊断的技术手段。但是传统的pcr技术在实际应用当中并不能准确定量,而且经常出现假阳性结果。直到1996年,美国abi公司专利技术了一种新型的定量技术,即在pcr扩增的过程中加入一条特异性的由一个荧光基团和报告基团标记的寡核苷酸探针,pcr扩增时,随着taq酶5’端-3’端外切酶活性对探针的降解,荧光基团和报告基团分离,释放荧光信号。每扩增一条dna 链,就会检测到一个荧光分子,从而实现了荧光信号的积累与pcr产物形成完全同步。
2、虽然pcr技术具有广泛的用途,但是由于体外诊断试剂中反应酶类的试剂对温度较为敏感,高温会使酶或蛋白质失去活性,因此要求低温运输及保存,这就增加了试剂运输过程中的成本。为了解决生物类试剂运输及保存条件对试剂性能的影响,需要开发冻干类试剂来提高体外诊断试剂的稳定性。
3、随着体外诊断试剂对冻干原料的需求增多,各种冻干类的试剂都纷纷上市,市场对冻干类试剂的报道逐渐增多。但是有些冻干保护剂的成分比较多,对pcr扩增体系性能可能存在一定的影响。如cn113025757a公开一种用于2019-ncov多重扩增反应试剂的冻干保护剂及其应用,该专利所述冻干保护剂包括海藻糖、甘露醇、普鲁兰多糖、牛血清白蛋白、表面活
4、也有一些冻干试剂开发者的冻干保护剂的成分比较简单,但是其冻干周期较长。如cn111560417a,放入样品后,隔板温度下降到-45~-55℃,冷阱下降到-65~-70℃,保持0.5~1.5h;开启真空,真空度为10~15pa,保持 1~3h;第一次升华阶段保持真空度为10~15pa,冷静温度为-65℃~-75℃,同时升温至-10℃~-12℃,保持15~16h;第二次升华阶段继续保持真空度为 10~15pa,冷阱温度为-65℃~-75℃,同时升温至15℃~20℃,保持7~8h。冻干程序繁琐,而且一次冻干周期结束最短也要24h以上,严重造成能源的浪费。又如cn114317700a,同样是冻干周期达到了26个小时。
5、针对以上问题,有需要寻找一种冻干效果好,冻干周期短且适用范围广的pcr试剂的保护剂。
6、有鉴于此,特提出本专利技术。
技术实现思路
1、本专利技术的第一目的在于提供一种pcr试剂的冻干保护剂,以解决上述问题中的至少一种。
2、本专利技术的第二目的在于提供上述冻干保护剂在pcr试剂保存中的应用。
3、本专利技术的第三目的在于提供混合试剂。
4、本专利技术的第四目的在于提供一种上述混合试剂的冷冻干燥方法。
5、本专利技术的第五目的在于提供一种冷冻干燥产品。
6、第一方面,本专利技术提供了一种pcr试剂的冻干保护剂,包括:
7、使用浓度为62.5~87.5mg/ml的海藻糖、使用浓度为25~37.5mg/ml的 peg8000、使用浓度为15~22.5mg/ml的d-甘露醇、使用浓度为1~1.5mg/ml 的l-组氨酸和使用浓度为1~1.5mg/ml的羟乙基淀粉;
8、所述使用浓度为将冻干保护剂与pcr试剂混合后的浓度。
9、作为进一步技术方案,包括:使用浓度为75mg/ml的海藻糖、使用浓度为31.25mg/ml的peg8000、使用浓度为22.5mg/ml的d-甘露醇、使用浓度为1.25mg/ml的l-组氨酸和使用浓度为1mg/ml的羟乙基淀粉。
10、第二方面,本专利技术提供了上述冻干保护剂在pcr试剂保存中的应用。
11、第三方面,本专利技术提供了一种混合试剂,包括上述冻干保护剂和pcr 试剂。
12、作为进一步技术方案,所述pcr试剂中使用甘油质量占比在0.08%以内的酶。
13、第四方面,本专利技术提供了一种混合试剂的冷冻干燥方法,包括如下步骤:
14、将所述混合试剂置于冷冻干燥机内,然后将冷冻干燥机的板层温度降低至-8~0℃,保持0.5~1.5h,再依次进行预冻、升华干燥和解析干燥,完成对混合试剂的冷冻干燥。
15、作为进一步技术方案,所述预冻为:将冷冻干燥机的板层温度降低至 -45~-38℃,保持2~3h。
16、作为进一步技术方案,所述升华干燥为:抽真空至压强小于20pa,同时将冷冻干燥机的板层温度在3~4h内升高至-37~-33℃,保持6~8h;
17、作为进一步技术方案,所述解析干燥为:抽真空至压强小于5pa,将冷冻干燥机的板层温度在2~3h内升高至28~35℃,保持5~7h。
18、第五方面,本专利技术提供了一种冷冻干燥产品,采用上述冷冻干燥方法制备得到。
19、与现有技术相比,本专利技术具有如下有益效果:
20、本专利技术提供的pcr试剂的冻干保护剂成分简单,冻干前后性能变化小,试剂稳定性好,对pcr扩增体系无影响,能够在冷冻干燥过程中起到很高的保护作用,可适用于无甘油或低甘油含量的酶反应体系的冻干保护。
21、本专利技术提供的冷冻干燥方法,通过将混合试剂在板层温度为-8~0℃的条件下保持0.5~1.5h,再依次进行预冻、升华干燥和解析干燥,能够进一步提高冻干产品的均一性,且制备得到的冷冻干燥产品外观完好、无萎缩、无塌陷、性能稳定。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种PCR试剂的冻干保护剂,其特征在于,包括:使用浓度为62.5~87.5mg/mL的海藻糖、使用浓度为25~37.5mg/mL的PEG8000、使用浓度为15~22.5mg/mL的D-甘露醇、使用浓度为1~1.5mg/mL的L-组氨酸和使用浓度为1~1.5mg/mL的羟乙基淀粉;
2.根据权利要求1所述的冻干保护剂,其特征在于,包括:使用浓度为75mg/mL的海藻糖、使用浓度为31.25mg/mL的PEG8000、使用浓度为22.5mg/mL的D-甘露醇、使用浓度为1.25mg/mL的L-组氨酸和使用浓度为1mg/mL的羟乙基淀粉。
3.权利要求1或2所述的冻干保护剂在PCR试剂保存中的应用。
4.一种混合试剂,其特征在于,包括权利要求1或2所述的冻干保护剂和PCR试剂。
5.根据权利要求4所述的混合试剂,其特征在于,所述PCR试剂中使用甘油质量占比在0.08%以内的酶。
6.权利要求4或5所述混合试剂的冷冻干燥方法,其特征在于,包括如下步骤:
7.根据权利要求6所述的冷冻干燥方法,其特征在于,所述预冻
8.根据权利要求6所述的冷冻干燥方法,其特征在于,所述升华干燥为:抽真空至压强小于20pa,将冷冻干燥机的板层温度在3~4h内升高至-37~-33℃,保持6-8h。
9.根据权利要求6所述的冷冻干燥方法,其特征在于,所述解析干燥为:抽真空至压强小于5pa,将冷冻干燥机的板层温度在2~3h内升高至28~35℃,保持5-7h。
10.一种冷冻干燥产品,其特征在于,采用权利要求6-9任一项所述冷冻干燥方法制备得到。
...【技术特征摘要】
1.一种pcr试剂的冻干保护剂,其特征在于,包括:使用浓度为62.5~87.5mg/ml的海藻糖、使用浓度为25~37.5mg/ml的peg8000、使用浓度为15~22.5mg/ml的d-甘露醇、使用浓度为1~1.5mg/ml的l-组氨酸和使用浓度为1~1.5mg/ml的羟乙基淀粉;
2.根据权利要求1所述的冻干保护剂,其特征在于,包括:使用浓度为75mg/ml的海藻糖、使用浓度为31.25mg/ml的peg8000、使用浓度为22.5mg/ml的d-甘露醇、使用浓度为1.25mg/ml的l-组氨酸和使用浓度为1mg/ml的羟乙基淀粉。
3.权利要求1或2所述的冻干保护剂在pcr试剂保存中的应用。
4.一种混合试剂,其特征在于,包括权利要求1或2所述的冻干保护剂和pcr试剂。
5.根据权利要求4...
【专利技术属性】
技术研发人员:陈亮,田星,王虹军,陈芝娟,贺贤汉,
申请(专利权)人:杭州博日科技股份有限公司,
类型:发明
国别省市:
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