【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及免疫分析化学，具体涉及一种检测沙门氏菌的单价与二价单域重链抗体及其试剂盒。
技术介绍
1、沙门氏菌(salmonella)是属于肠杆菌科中的一类无芽孢、需氧或兼性厌氧型的革兰氏阴性杆菌，目前发现，沙门氏菌属有2600多种血清型。其中，一部分血清型能够通过侵入、附着和绕过宿主肠道防御机制(胃酸、肠黏液、肠蠕动、乳铁蛋白和溶菌酶等)在宿主体内定殖，引发沙门氏菌病。由沙门氏菌引起的疾病是全世界最常报告的食源性疾病之一，采取有效措施对其进行快速检测和识别对于预防食源性疾病暴发和维护公共卫生安全具有深远意义。
2、常见的沙门氏菌检测方法主要有传统微生物培养法、分子生物学方法、免疫学检测方法等。其中，免疫学检测方法是基于抗原抗体特异性识别的特点对待测物进行检测分析，具有操作简便、准确可靠、灵敏度高、特异性强且适用于高通量检测等优势，已成为目前食源性致病菌常用的快速检测方法之一，是沙门氏菌快检领域不可或缺的重要手段。
3、目前针对沙门氏菌建立的免疫检测方法主要是以单克隆抗体或多克隆抗体作为识别元件，这两种抗体都是四肽链抗体，即都由四条异源性多肽链组成的对称的“y”型骨架结构，包含两条重链和两条轻链，分子量约为150kda。多克隆抗体制备流程简单，制备周期较短、成本低廉、应用较广，但是它作为免疫检测试剂仍具有缺陷，譬如从血清中收集纯化抗体得到的非特异性抗体比例较高，导致出现背景信号或交叉反应，不同批次抗体易产生批次间差异，供应有限，不适合大批量生产。单克隆抗体特异性较高、亲和力较好且能满足持续供应需求，但抗
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于克服现有技术中沙门氏菌抗体制备困难、抗原亲和力差、稳定性差、批次差异大的问题，而且存在无法识别多种人畜共患血清型的缺陷，提供了一种检测沙门氏菌的单价与二价单域重链抗体(variable domain of heavy chain of heavy-chain antibody，vhh抗体)及其试剂盒，本专利技术通过vhh抗体文库构建淘选，提供了两条能够与沙门氏菌特异性结合的vhh抗体(vhh-i,vhh-ii)，并将二价化vhh-i作为捕获抗体，vhh-ii作为检测抗体，构建了双vhh检测试剂盒。该试剂盒具有操作简单、成本低廉、准确灵敏等优势，可用于食品样品中沙门氏菌多重血清型污染的快速检测。
2、为实现上述目的，本专利技术所设计的技术方案如下：
3、本专利技术提供了一种检测沙门氏菌的单价单域重链抗体，所述单价单域重链抗体(vhh抗体)为单价vhh-i抗体或单价vhh-ii抗体；其中，所述单价vhh-ii抗体的氨基酸序列为三条中任意一个，分别单价vhh-ii-1抗体、单价vhh-ii-2抗体和单价vhh-ii-3抗体，其中，
4、单价vhh-ii-1抗体的氨基酸序列如seq id no.1所示：
5、qlqlvesggglvqpggslrlscvtsgfnmdrytiawfrqragndlegvscisvnaghrvyadsvrgrftisrdntkktvylqmndlkpgdtavyycaapdpsyfqmtcgddlpaaffqvrgqgtqvtvss；
6、或单价vhh-ii-2抗体的氨基酸序列如seq id no.2所示：
7、qlqlvesggglvqpggslrlscvtsgfnmdrytiawfrqragndlegvscisvnaghrvyadsvrgrftisrdntkktvylqmndlkpedtavyycaapdpsyfqmtcgddlpaaffqvrgqgtqvtvsa；
8、或单价vhh-ii-3抗体的氨基酸序列如seq id no.3所示：
9、qvqlvesggglvqpggslrlscvtsgfnmdrytiawfrqragndlegvscisvnaghrvyadsvrgrftisrdntkktvylqmndlkpedtavyycaapdpsyfqmtcgddlpaaffqvrgqgtqvtvss；
10、所述单价vhh-i抗体的氨基酸序列如seq id no.4所示：
11、qvqlvesgggmaqageslrlscavagtsvsnlavswyrqapgkrrefvawilstgskdysnfvkgrftiskdsakntvylemsslkiedtgvyqcntvhlgnnywgqgtqvtvsa。
12、本专利技术还提供了一种检测沙门氏菌的二价单域重链抗体，所述二价单域重链抗体是以上述单价vhh-i抗体的核苷酸序列为基础，借助铰链区序列和柔性连接肽(gly4ser)2将两个单价vhh-i抗体的核苷酸序列串联合成后，表达纯化获得；其中，二价单域重链抗体(抗沙门氏菌二价divhh抗体，简称divhh)的氨基酸序列如seq id no.5所示：
13、qvqlvesgggmaqageslrlscavagtsvsnlavswyrqapgkrrefvawilstgskdysnfvkgrftiskdsakntvylemsslkiedtgvyqcntvhlgnnywgqgtqvtvsaepktpkpqdgqagqggggsggggsqvqlvesgggmaqageslrlscavagtsvsnlavswyrqapgkrrefvawilstgskdysnfvkgrftiskdsakntvylemsslkiedtgvyqcntvhlgnnywgqgtqvtvsaepktpkpqdgqagq。
14、进一步地，所述单价vhh-i抗体的核苷酸序列如seq id no.6所示：
15、caggtgcagctcgtggagtcggggggaggtatggcgcaggctggggaatctctgcgactctcctgtgcagtcgctggaaccagcgtcagtaatttggccgtgagctggtaccgccaggctccaggaaagcggcgcgagttcgtcgcatggattttgagtacggggagtaaagactattcaaacttcgtgaagggccgattcaccatctccaaagacagcgcaaagaacacggtgtatctggaaatgagtagcctgaaaattgaagatacaggcgtctatcaatgtaacacagtacatttgggaaataactattggggccaggggacccaggtcaccgtctccgca。
16、本专利技术还提供了一种检测沙门氏菌的试剂盒，所述试剂盒包括包埋有捕获抗体的酶标板和含有检测抗体的溶液；其中，
17、所述捕获抗体为上述二价单域重链抗体；
18、所述检测抗体为生物素标记的上述单价vhh-ii抗体。
19、进一步地，所述检测抗体是由上述本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种检测沙门氏菌的单价单域重链抗体，其特征在于：所述单价单域重链抗体为单价VHH-I抗体或单价VHH-II抗体；其中，所述单价VHH-II抗体的氨基酸序列为三条中任意一个，分别单价VHH-II-1抗体、单价VHH-II-2抗体和单价VHH-II-3抗体，其中，
2.一种检测沙门氏菌的二价单域重链抗体，其特征在于：所述二价单域重链抗体是以权利要求1所述单价VHH-I抗体的核苷酸序列为基础，借助铰链区序列和柔性连接肽将两个单价VHH-I抗体的核苷酸序列串联合成后，表达纯化获得；其中，二价单域重链抗体的氨基酸序列如SEQ ID No.5所示：
3.根据权利要求2所述二价单域重链抗体，其特征在于：所述单价VHH-I抗体的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示：
4.一种检测沙门氏菌的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括包埋有捕获抗体的酶标板和含有检测抗体的溶液；其中，
5.根据权利要求4所述检测沙门氏菌的试剂盒，其特征在于：所述检测抗体是由权利要求1所述单价VHH-II抗体与生物素偶联而成。
6.根据权利要求4或5所述检测沙门
7.根据权利要求4或5或6所述试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括：
8.根据权利要求7所述试剂盒，其特征在于：所述样品稀释液的配方为：氯化钠8g、磷酸二氢钾0.2g、磷酸氢二钠2.9g、氯化钾0.2g，蒸馏水定容至1L；
9.一种利用权利要求3所述试剂盒检测沙门氏菌的双VHHs抗体夹心免疫分析方法，其特征在于：包括以下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种检测沙门氏菌的单价单域重链抗体，其特征在于：所述单价单域重链抗体为单价vhh-i抗体或单价vhh-ii抗体；其中，所述单价vhh-ii抗体的氨基酸序列为三条中任意一个，分别单价vhh-ii-1抗体、单价vhh-ii-2抗体和单价vhh-ii-3抗体，其中，
2.一种检测沙门氏菌的二价单域重链抗体，其特征在于：所述二价单域重链抗体是以权利要求1所述单价vhh-i抗体的核苷酸序列为基础，借助铰链区序列和柔性连接肽将两个单价vhh-i抗体的核苷酸序列串联合成后，表达纯化获得；其中，二价单域重链抗体的氨基酸序列如seq id no.5所示：
3.根据权利要求2所述二价单域重链抗体，其特征在于：所述单价vhh-i抗体的核苷酸序列如seq id no.6所示：
4.一种检测沙门氏菌的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括包埋有捕获抗体的酶标板和含有检...
【专利技术属性】
技术研发人员：王佳，王小红，陈艳红，黄英杰，鲍悦忻，孔维莹，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：
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