【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
1.本公开涉及抗sars-cov-2的单结构域抗体。所述单结构域抗体阻断sars-cov-2感染，并且可用于患者的治疗、预防和/或诊断。
技术介绍
0、2.
技术介绍
1、病毒感染是公共卫生的持续问题。在20世纪和21世纪，已经由新颖病毒引起了流行病。
2、冠状病毒病(covid-19)是由新发现的冠状病毒严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2(sars-cov-2)引起的传染病。sars-cov-2于2020年1月12日被世界卫生组织命名。其与2003年鉴定的sars冠状病毒(sars cov)和2012年鉴定的mers冠状病毒(mers cov)一起，属于2003年鉴定的冠状病毒科(coronaviridae)的β属。sars-cov-2基因组与sars cov病毒共享约70％的序列同一性，并且与mers cov病毒共享约40％的序列相似性。who网站(2020)。
3、大多数感染sars-cov-2病毒的人会体验到轻度至中度呼吸道疾病，并且无需特殊治疗即可康复。年龄较大的患者，例如大于60岁的患者，以及患有例如心血管疾病、糖尿病、慢性呼吸道疾病和癌症的潜在医学问题的患者，更有可能发展成严重的疾病。疾病控制中心网站(2020)。在易感群体中，严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2(sars-cov-2)可能导致致命的人类呼吸系统疾病。covid-19患者往往表现出急性肺损伤(acute lung injury,ali)的特性，包括弥漫性肺泡损伤(diffuse alveolar damage,dad)、
4、与其他冠状病毒类似，sars-cov-2上的刺突糖蛋白(s)同源三聚体在受体结合和病毒进入中发挥着关键作用。刺突糖蛋白分为两个功能亚基，称为s1和s2。所述s1亚基负责经由其c末端受体结合结构域(rbd)与人血管紧张素转换酶2(ace2)之间的相互作用进行宿主细胞受体的结合。s2亚基在病毒和细胞膜的融合中发挥重要作用。
5、若干用于预防和治疗covid-19的药物和疫苗正在开发中。中和sars-cov-2-rbd/ace2相互作用的生物药物尤其令人感兴趣。有至少9种sars-cov-2-rbd抗体或抗体组合正在临床试验中进行评估，其中regn-cov2是最先进的(nct04452318，第3期)。
6、本领域存在对抗covid-19疗法的需求。
技术实现思路
1、本公开提供了免疫特异性结合sars-cov-2的单结构域抗体(包括但不限于包含或者替代地由抗体片段或其变体组成的抗原结合分子)、其组合物及其使用方法。例如，本公开提供了免疫特异性结合sars-cov-2的受体结合结构域(rbd)的单结构域抗体(包括包含或者替代地由抗体片段或其变体组成的抗原结合分子)。本专利技术还提供了用于在动物，优选地哺乳动物，最优选地人中检测、诊断或预测与sars-cov-2相关联的疾病或疾患的方法和组合物，所述方法和组合物包括或替代地由以下组成：使用免疫特异性结合sars-cov-2的单结构域抗体(包括但不限于包含或者替代地由抗体片段或其变体组成的抗原结合分子)。可用所公开的单链抗体(包括但不限于包含或者替代地由抗体片段或其变体组成的抗原结合分子)检测、诊断或预测的疾病和疾患包括但不限于covid-19。本公开还提供了用于在动物，优选地哺乳动物，最优选地人中预防、治疗或改善与sars-cov-2相关联的疾病或疾患的方法和组合物，所述方法和组合物包括或替代地由以下组成：向所述动物施用有效量的一种或多种免疫特异性结合sars-cov-2的单结构域抗体(包括包含或者替代地由抗体片段或其变体组成的抗原结合分子)。可以通过施用有效量的本文所述的抗体来预防、治疗或改善的疾病和疾患包括但不限于covid-19。
2、在实施方式中，本文所述的单结构域抗体免疫特异性地结合sars-cov-2，特别是sars-cov-2的rbd。本文所述的单结构域抗体可以是包含免疫球蛋白折叠的氨基酸序列，或者可以是在合适的条件(例如，生理条件)下能够形成免疫球蛋白折叠(例如，通过折叠)的氨基酸序列。优选地，当正确折叠以形成免疫球蛋白折叠时，此类氨基酸序列能够免疫特异性地结合sars-cov-2；并且更优选地能够免疫特异性地结合sars-cov-2的rbd。
3、在实施方式中，本文所述的抗原结合分子包含或替代地由以下组成：这些单结构域抗体的片段或变体(例如，包括本文所述的那些中任一者的氨基酸序列)，所述片段或变体免疫特异性地结合sars-cov-2，优选地sars-cov-2的rbd。在实施方式中，还提供了编码本文所述的单结构域抗体的核酸分子、包含所述核酸分子的载体和宿主细胞、和/或抗原结合分子。
4、在实施方式中，本文所述的单结构域抗体包含基本上由四个构架区域(fr1、fr2、fr3、fr4)和三个互补决定区(cdr1、cdr2、cdr3)组成的氨基酸序列；或此类氨基酸序列的任何合适片段(其通常将包含形成cdr中的至少一个cdr的氨基酸残基中的至少一些氨基酸残基，如本文进一步所述)。
5、在实施方式中，本文所述的单结构域抗体可以是免疫球蛋白序列或其合适的片段，并且特别地可以是免疫球蛋白可变结构域序列、免疫球蛋白单可变结构域序列或其合适的片段，例如轻链可变结构域序列(例如，vl结构域序列)或其合适的片段；或重链可变结构域序列(例如，vh结构域序列)或其合适的片段。当本文所述的单结构域抗体是重链可变结构域序列时，其可以是来源于常规四链抗体的重链可变结构域序列(例如，来源于人抗体的vh结构域序列)或者是来源于重链抗体(如本文所述)的vhh序列(如本文所述)。
6、然而，应当注意的是，本文所述的单结构域抗体不限于本文所述的氨基酸序列(或本文所述的用于表达所述氨基酸序列的核苷酸序列)的来源，也不限于生成或获得(或已经生成或获得)本文所述的氨基酸序列或核苷酸序列的方式。因此，本文所述的氨基酸序列可以是天然存在的氨基酸序列(来自任何合适的物种)或合成或半合成的氨基酸序列。在具体但非限制性的实施方式中，本文所述的氨基酸序列是天然存在的免疫球蛋白序列(来自任何合适的物种)或合成或半合成的免疫球蛋白序列，包括但不限于“人源化的”免疫球蛋白序列(包括但不限于部分或完全人源化的小鼠或兔免疫球蛋白序列，特别是部分或完全人源化的vhh序列)、“骆驼化的”免疫球蛋白序列以及已经通过包括但不限于以下的技术获得的免疫球蛋白序列：亲和力成熟(例本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种分离的单结构域抗体或其抗原结合片段，所述分离的单结构域抗体或其抗原结合片段可特异性结合SARS-CoV-2。
2.根据权利要求1所述的单结构域抗体或其抗原结合片段，其中所述单结构域抗体或其抗原结合片段特异性结合SARS-CoV-2的受体结合结构域(SARS-CoV-2RBD)。
3.根据权利要求1或2所述的单结构域抗体或其抗原结合片段，其中所述SARS-CoV-2RBD是包含氨基酸序列SEQ ID NO:124或SEQ ID NO:127的多肽。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的单结构域抗体或其抗原结合片段，其中所述单结构域抗体或其抗原结合片段包含互补决定区3(CDR3)，其中所述CDR3选自由以下组成的组：
5.根据权利要求1至4中任一项所述的单结构域抗体或其抗原结合片段，CDR1、CDR2和CDR3中的至少一者，其中：
6.根据权利要求1至5中任一项所述的单结构域抗体或其抗原结合片段，其中所述CDR序列与SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列中的至少一个氨基酸序列的CDR序列具有
7.根据权利要求1至6中任一项所述的单结构域抗体或其抗原结合片段，其中所述单结构域抗体或其抗原结合片段包含构架区域1(FR1)、FR2、FR3或FR4中的至少一者，其中：
8.根据权利要求1至7中任一项所述的单结构域抗体或其抗原结合片段，其中所述单结构域抗体包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：与SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列中的至少一个氨基酸序列具有至少70％同一性、至少80％同一性、至少90％同一性、至少91％同一性、至少92％同一性、至少93％同一性、至少94％同一性、至少95％同一性、至少96％同一性、至少97％同一性、至少98％同一性、至少99％同一性或约100％同一性的氨基酸序列。
9.根据权利要求1至7中任一项所述的单结构域抗体或其抗原结合片段，其中所述单结构域抗体选自由SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:15组成的组。
10.一种单结构域抗体或其抗原结合片段，所述单结构域抗体或其抗原结合片段由包含选自由以下组成的组的核苷酸序列的核酸编码：与SEQ ID NO:97至SEQ ID NO:111具有至少70％同一性、至少80％同一性、至少90％同一性、至少91％同一性、至少92％同一性、至少93％同一性、至少94％同一性、至少95％同一性、至少96％同一性、至少97％同一性、至少98％同一性、至少99％同一性、或约100％同一性的核苷酸序列。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的单结构域抗体或其抗原结合片段，其中所述单结构域抗体或其抗原结合片段中和SARS-CoV-2。
12.一种单结构域抗体，所述单结构域抗体与根据权利要求1至11中任一项所述的单结构域抗体竞争结合SARS-CoV-2。
13.一种多肽，所述多肽包含至少一种根据权利要求1至12中任一项所述的单结构域抗体或其抗原结合片段，所述多肽包含另外的氨基酸序列。
14.根据权利要求13所述的多肽，所述多肽包含两个或更多个根据权利要求1至12中任一项所述的单结构域抗体或其抗原结合片段。
15.根据权利要求13或14所述的多肽，其中所述另外的氨基酸序列是免疫球蛋白序列。
16.根据权利要求15所述的多肽，其中所述免疫球蛋白序列是Fc区。
17.根据权利要求16所述的多肽，其中所述Fc区来自IgG。
18.根据权利要求13至17中任一项所述的多肽，其中所述至少一种单结构域抗体和另外的氨基酸序列经由一个或多个接头连接。
19.根据权利要求13至18中任一项所述的多肽，其中所述多肽包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQ ID NO:112至SEQ ID NO:123。
20.一种核酸或核苷酸序列，所述核酸或核苷酸序列编码根据权利要求1至12中任一项所述的单结构域抗体或其抗原结合片段或根据权利要求13至19中任一项所述的多肽。
21.一种载体，所述载体包含权利要求20所述的核酸或核苷酸序列。
22.一种宿主或宿主细胞，所述宿主或宿主细胞包含根据权利要求20所述的核酸或核苷酸序列或根据权利要求21所述的载体。
23....
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种分离的单结构域抗体或其抗原结合片段，所述分离的单结构域抗体或其抗原结合片段可特异性结合sars-cov-2。
2.根据权利要求1所述的单结构域抗体或其抗原结合片段，其中所述单结构域抗体或其抗原结合片段特异性结合sars-cov-2的受体结合结构域(sars-cov-2rbd)。
3.根据权利要求1或2所述的单结构域抗体或其抗原结合片段，其中所述sars-cov-2rbd是包含氨基酸序列seq id no:124或seq id no:127的多肽。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的单结构域抗体或其抗原结合片段，其中所述单结构域抗体或其抗原结合片段包含互补决定区3(cdr3)，其中所述cdr3选自由以下组成的组：
5.根据权利要求1至4中任一项所述的单结构域抗体或其抗原结合片段，cdr1、cdr2和cdr3中的至少一者，其中：
6.根据权利要求1至5中任一项所述的单结构域抗体或其抗原结合片段，其中所述cdr序列与seq id no:1至seq id no:15所示的氨基酸序列中的至少一个氨基酸序列的cdr序列具有至少70％同一性、至少80％同一性、至少90％同一性、至少91％同一性、至少92％同一性、至少93％同一性、至少94％同一性、至少95％同一性、至少96％同一性、至少97％同一性、至少98％同一性、至少99％同一性或100％同一性。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的单结构域抗体或其抗原结合片段，其中所述单结构域抗体或其抗原结合片段包含构架区域1(fr1)、fr2、fr3或fr4中的至少一者，其中：
8.根据权利要求1至7中任一项所述的单结构域抗体或其抗原结合片段，其中所述单结构域抗体包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：与seq id no:1至seq id no:15所示的氨基酸序列中的至少一个氨基酸序列具有至少70％同一性、至少80％同一性、至少90％同一性、至少91％同一性、至少92％同一性、至少93％同一性、至少94％同一性、至少95％同一性、至少96％同一性、至少97％同一性、至少98％同一性、至少99％同一性或约100％同一性的氨基酸序列。
9.根据权利要求1至7中任一项所述的单结构域抗体或其抗原结合片段，其中所述单结构域抗体选自由seq id no:1至seq id no:15组成的组。
10.一种单结构域抗体或其抗原结合片段，所述单结构域抗体或其抗原结合片段由包含选自由以下组成的组的核苷酸序列的核酸编码：与seq id no:97至seq id no:111具有至少70％同一性、至少80％同一性、至少90％同一性、至少91％同一性、至少92％同一性、至少93％同一性、至少94％同一性、至少95％同一性、至少96％同一性、至少97％同一性、至少98％同一性、至少99％同一性、或约100％同一性的核苷酸序列。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的单结构域抗体或其抗原结合片段，其中所述单结构域抗体或其抗原结合片段中和sars-cov-2。
12.一种单结构域抗体，所述单结构域抗体与根据权利要求1至11中任一项所述的单结构域抗体竞争结合sars-cov-2。
13.一种多肽，所述多肽包含至少一种根据权利要求1至12中任一项所述的单结构域抗体或其抗原结合片段，所述多肽包含另外的氨基酸序列。
14.根据权利要求13所述的多肽，所述多肽包含两个或更多个根据权利要求1至12中任一项所述的单结构域抗体或其抗原结合片段。
15.根据权利要求13或14所述的多肽，其中所述另外的氨基酸序列是免疫球蛋白序列。
16.根据权利要求15所述的多肽，其中所述免疫球蛋白序列是fc区。
17.根据权利要求16所述的多肽，其中所述fc区来自igg。
18.根据权利要求13至17中任一项所述的多肽，其中所述至少一种单结构域抗体和另外的氨基酸序列经由一个或多个接头连接。
19.根据权利要求13至18中任一项所述的多肽，其中所述多肽包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：seq id no:112至seq id no:123。
20.一种核酸或核苷酸序列，所述核酸或核苷酸序列编码根据权利要求1至12中任一项所述的单结构域抗体或其抗原结合片段或根据权利要求13至19中任一项所述的多肽。
21.一种载体，所述载体包含权利要求20所述的核酸或核苷酸序列。
22.一种宿主或宿主细胞，所述宿主或宿主细胞包含根据权利要求20所述的核酸或核苷酸序列或根据权利要求21所述的载体。
23.一种组合物，所述组合物包含至少一种根据权利要求1至12中任一项所述的单结构域抗体或其抗原结合片段和/或至少一种根据权利要求13至19中任一项所述的多肽，和/或至少一种根据权利要求20所述的核酸或核苷酸序列，和/或至少一种根据权利要求21所述的载体，和/或至少一种根据权利要求22所述的宿主或宿主细胞。
24.根据权利要求23所述的组合物，其中所述组合物是进一步包含药物赋形剂、载体、稀释剂、佐剂或它们的组合的药物组合物。
25.根据权利要求23或24所述的组合物，其中所述组合物被配制用于鼻内或肺内施用。
26.根据权利要求1至12中任一项所述的单结构域抗体、根据权利要求13至19中任一项所述的多肽、根据权利要求20所述的核酸或核苷酸序列、根据权利要求21所述的载体、根据权利要求22所述的宿主或宿主细胞或根据权利要求23至25中任一项所述的组合物，所述单结构域抗体、所述多肽、所述核酸或核苷酸序列、所述载体、所述宿主或宿主细胞或所述组合物用作药物。
27.根据权利要求1至12中任一项所述的单结构域抗体、根据权利要求13至19中任一项所述的多肽、根据权利要求20所述的核酸或核苷酸序列、根据权利要求21所述的载体、根据权利要求22所述的宿主或宿主细胞或根据权利要求23至25中任一项所述的组合物，所述单结构域抗体、所述多肽、所述核酸或核苷酸序列、所述载体、所述宿主或宿主细胞或所述组合物用于检测、预防和/或治疗冠状病毒感染。
28.一种用于检测冠状病毒多肽的方法，所述方法包括使样品与根据权利要求1至12中任一项所述的单结构域抗体或其抗原结合片段或根据权利要求13至19中任一项所述的多肽接触。
29.根据权利要求28所述的方法，其中所述单结构域抗体或其抗原结合片段或所述多肽附接至固相载体。
30.根据权利要求29所述的方法，其中所述固相载体是珠粒、板、基质、聚合物、试管、片材、培养皿或测试条。
31.根据权利要求28至30中任一项所述的方法，其中所述冠状病毒多肽是冠状病毒受体结合结构域多肽。
32.根据权利要求28至31中任一项所述的方法，其中所述冠状病毒多肽是sars-cov-2受体结合结构域多肽。
33.一种治疗和/或预防冠状病毒感染的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的根据权利要求1至12中任一项所述的单结构域抗体或其抗原结合片段...
【专利技术属性】
技术研发人员：拉斐尔·克里斯蒂安·卡塞利亚斯，徐建梁，
申请(专利权)人：美国卫生及公众服务部代表，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。