【技术实现步骤摘要】
本申请属于体外诊断领域，具体涉及一种多肽、小分子半抗原载体蛋白磁珠包被物的制备方法及应用。
技术介绍
1、半抗原是指具有免疫反应性，并不具有免疫原性的一类小分子化合物，当与大分子蛋白质载体交联或结合(通常是以共价键的形式进行结合)后可获得免疫原性。在免疫诊断试剂中，小分子半抗原一般需要偶联一个大分子载体蛋白才能作为抗原进行应用。钥孔血蓝蛋白（klh）、牛血清白蛋白（bsa）和卵清蛋白（ova）是弱抗原性化合物的常用载体。其中牛血清白蛋白（bsa）由于其物化性质稳定，不易变性，价廉易得，且赖氨酸含量高，因此，常常被选用作为载体蛋白。
2、化学发光免疫分析方法是一种以免疫反应为基础的检测方法，具有灵敏度高，检测范围大等优点。在小分子项目的化学发光检测方法中，一般采用竞争法对待测物进行测定，以小分子偶联载体蛋白作为抗原蛋白包被到磁珠上，或者标记上发光物，从而与样本中的小分子待测物竞争性结合发光物标记抗体或者固相包被抗体。在磁珠包被和发光物标记工艺中，一般依赖于蛋白上的伯氨基，可反应的伯氨基数量越多则越利于包被和标记。
3、在小分子项目的磁珠包被工艺和发光物标记工艺中，一般对小分子偶联载体蛋白的抗原直接进行应用，但是由于常规的小分子偶联载体蛋白的方案中，一般会消耗载体蛋白上的氨基从而影响后面的包被和标记效率。此外载体蛋白上由于小分子化合物的偶联，其亲疏水性和电荷也会受到一定程度的影响。
4、而传统技术中采用小分子偶联载体蛋白作为抗原直接应用的方式会使磁珠包被物或者发光标记物产生非特异增强，不能满足小分
技术实现思路
1、基于此，本申请一实施例提供一种多肽、小分子半抗原载体蛋白磁珠包被物的制备方法及应用，以解决传统技术中小分子半抗原载体蛋白磁珠检测信噪比和灵敏度较低的技术问题。
2、本申请一方面提供一种多肽，所述多肽的结构为：arg-aa1-aa2-aa3-aa4-arg，其中，aa1与aa4分别包含2~5个lys，aa2选自thr、ser、glu或asp，
3、aa3选自tyr、trp或phe。
4、本申请另一方面提供多肽在制备小分子载体蛋白磁珠包被物中的应用，所述多肽的结构为：arg-aa1-aa2-aa3-aa4-arg，其中，aa1与aa4包含2~5个lys，aa2选自thr、ser、glu或asp，aa3选自tyr、trp或phe。
5、本申请还提供一种小分子半抗原载体蛋白磁珠包被物的制备方法，包括以下步骤：
6、还原小分子半抗原载体蛋白中的二硫键，制备游离巯基。
7、将上述的多肽与小分子半抗原载体蛋白上的游离巯基进行偶联，得修饰后的小分子半抗原载体蛋白。
8、将基团修饰的磁珠与修饰后的小分子半抗原载体蛋白混合，反应得小分子半抗原载体蛋白磁珠包被物。
9、在其中一个实施例中，偶联采用的偶联剂为带有peg臂的异型双功能偶联剂。
10、在其中一个实施例中，所述偶联剂的一端具有氨基反应性的基团，另一端具有巯基反应性的基团。
11、在其中一个实施例中，还原采用的还原剂包括tcep或dtt中的一种或多种。
12、在其中一个实施例中，所述磁珠种类包含羧基磁珠，氨基磁珠或甲苯磺酰基磁珠。
13、本申请另一方面还提供一种小分子半抗原载体蛋白磁珠包被物，由上述的小分子半抗原载体蛋白磁珠包被物的制备方法制得。
14、本申请另一方面还提供一种小分子检测试剂，包括上述的小分子半抗原载体蛋白磁珠包被物、磁珠工作液以及吖啶工作液。
15、本申请另一方面还提供一种小分子检测试剂盒，包括上述的检测试剂。
16、相对于传统技术，本申请的有益效果包括：
17、本申请提供的多肽，其中的lys的侧链氨基可以弥补小分子半抗原载体蛋白偶联小分子时消耗的氨基，增加载体蛋白上可反应伯氨基的数量，更利于包被和标记，可以显著提高包被和标记效率。其次，多肽中的亲水性氨基酸的存在可以进一步增加载体蛋白的亲水性，具有平衡蛋白整体亲疏水性的作用，包被或标记后还能抵抗一些由于疏水性带来的非特异吸附，使得磁珠包被物更加亲水而具有更分散的磁珠状态。
18、并且，采用本申请的小分子半抗原载体蛋白磁珠包被物的制备方法，由于独特的多肽设计与特定的偶联剂配合使用，能够有效避免了在修饰过程中，载体蛋白自交联的情况发生。同时，在修饰多肽过程中不会继续消耗载体蛋白上的伯氨基，由此多肽制备的小分子半抗原磁珠包被物用作检测试剂时能够有效提升检测的信噪比和灵敏度。
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1.一种多肽，其特征在于，所述多肽的结构为：Arg-AA1-AA2-AA3-AA4-Arg；
2.多肽在制备小分子载体蛋白磁珠包被物中的应用，所述多肽的结构为：Arg-AA1-AA2-AA3-AA4-Arg；
3.一种小分子半抗原载体蛋白磁珠包被物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的小分子半抗原载体蛋白磁珠包被物的制备方法，其特征在于，偶联采用的偶联剂为带有PEG臂的异型双功能偶联剂。
5.根据权利要求4所述的小分子半抗原载体蛋白磁珠包被物的制备方法，其特征在于，所述偶联剂的一端具有氨基反应性的基团，另一端具有巯基反应性的基团。
6.根据权利要求3~5任一项所述的小分子半抗原载体蛋白磁珠包被物的制备方法，其特征在于，还原采用的还原剂包括TCEP或DTT中的一种或多种。
7.根据权利要求3~5任一项所述的小分子半抗原载体蛋白磁珠包被物的制备方法，其特征在于，所述磁珠种类包含羧基磁珠，氨基磁珠或甲苯磺酰基磁珠。
8.一种小分子半抗原载体蛋白磁珠包被物，其特征在于，由权利要求
9.一种小分子检测试剂，其特征在于，包括权利要求8所述的小分子半抗原载体蛋白磁珠包被物、磁珠工作液以及吖啶工作液。
10.一种小分子检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求9所述的检测试剂。
...【技术特征摘要】
1.一种多肽，其特征在于，所述多肽的结构为：arg-aa1-aa2-aa3-aa4-arg；
2.多肽在制备小分子载体蛋白磁珠包被物中的应用，所述多肽的结构为：arg-aa1-aa2-aa3-aa4-arg；
3.一种小分子半抗原载体蛋白磁珠包被物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的小分子半抗原载体蛋白磁珠包被物的制备方法，其特征在于，偶联采用的偶联剂为带有peg臂的异型双功能偶联剂。
5.根据权利要求4所述的小分子半抗原载体蛋白磁珠包被物的制备方法，其特征在于，所述偶联剂的一端具有氨基反应性的基团，另一端具有巯基反应性的基团。
6.根据权利...
【专利技术属性】
技术研发人员：祝亮，尹智伟，肖文超，何凡，
申请(专利权)人：深圳市卓润生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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