【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本公开涉及降低由riok3基因编码的丝氨酸/苏氨酸-蛋白激酶rio3的表达的核糖核苷酸药剂。该核糖核苷酸药剂特异性地靶向riok3 mrna，防止其被翻译，降低丝氨酸/苏氨酸-蛋白激酶rio3的表达，并随后降低其生物功能，并且可用作患有镰状细胞病及其并发症的患者的治疗剂。
技术介绍
1、血红蛋白是红细胞中的氧转运金属蛋白，其包含四个蛋白亚基，这四个蛋白亚基包含两个α-珠蛋白亚基和两个β-珠蛋白亚基。α-血红蛋白由hba1和hba2基因编码。β-血红蛋白由hbb基因编码。在人类中，ε-珠蛋白在胚胎期期间表达，并且γ-珠蛋白在胎儿期期间表达。出生后，γ-珠蛋白表达降低，并且β-珠蛋白增加。hardison《冷泉港医学展望(cold spring harb perspect med)》(2012)2:a011627。
2、胎儿红细胞(rbc)(其含有hbf(α2γ2))对氧的亲和力高于成人rbc(其含有血红蛋白a(hba；α2β2)，并且这有利于氧从母体转移到胎儿循环。从产生γ珠蛋白到产生β珠蛋白的转换在子宫内开始并且导致胎儿rbc群体中hbf的线性下降，使得出生时50％至95％的hbf水平在出生后六个月下降到<5％。colombo等人《英国血液杂志(br j haematol)》(1976)32:79–87。
3、镰状细胞病(scd)是一组遗传性红细胞病症，其特征在于在缺氧时形成“镰刀”形状的红细胞具有缩短的寿命，并且从而导致红细胞持续短缺。scd的临床并发症包括急性和慢性疼痛、感染、急性胸部综合征、中
4、在患有镰状细胞病的患者中，血红蛋白中的β-珠蛋白亚基中的至少一个被血红蛋白s取代，要么以纯合方式遗传(hbss，镰状细胞贫血)，要么遗传了另一个异常的β-珠蛋白亚基。hbss是scd最严重的形式，其次是hbs-β零地中海贫血，然而并发症会继续发生在其他形式的疾病中，如hbsc或hbs-β加性地中海贫血等。美国国家医学图书馆(medlineplus)“镰状细胞病(sickle cell disease)”(2021)。在本领域中存在对治疗β-血红蛋白病的需要。
技术实现思路
1、本专利技术提供了降低riok3的表达的核糖核苷酸药剂。所述核糖核苷酸药剂可以是反义寡核苷酸、短发夹rna(shrna)、小干扰rna(sirna)、任选不对称irna(airna)、微小rna、迷你rna、lncrna、核酶或其组合。
2、在一个实施例中，所述核糖核苷酸药剂可以是短发夹rna(shrna)。所述shrna可以包含seq id no:3的正向序列和/或seq id no:4的反向序列。
3、在一个实施例中，所述核糖核苷酸药剂可进一步降低blc11a的表达。所述核糖核苷酸药剂可进一步降低lrf的表达。所述核糖核苷酸药剂可进一步增加pogz的表达。
4、在一个实施例中，所述核糖核苷酸药剂可进一步增加血红蛋白γ、任选hbg1、hgb2或两者的表达。
5、在一个实施例中，所述核糖核苷酸药剂可进一步降低血红蛋白β(hbb)的表达。
6、在一个实施例中，所述核糖核苷酸药剂可以靶向seq id no:1的mrna序列。所述核糖核苷酸药剂可以靶向seq id no:2的mrna序列。所述靶标可以进一步包含处于seq idno:2的3'和/或5'位处的1-20个核糖核苷酸的侧翼序列。
7、在一个实施例中，组合物可包含本文所述的核糖核苷酸药剂。所述组合物可以是药物组合物。所述组合物可以进一步包含佐剂、载剂、缓冲剂、抗氧化剂、润湿剂、润滑剂、胶凝剂、增稠剂、粘合剂、崩解剂、湿润剂、防腐剂、稀释剂、稳定剂、填充剂、赋形剂或其组合。
8、在一个实施例中，微粒可以包含本文所述的核糖核苷酸药剂。所述微粒可以是微球、微胶囊、纳米球、纳米胶囊或纳米颗粒。所述微粒可以包含脂质载剂。
9、在一个实施例中，组合物可包含有包含本文所述的核糖核苷酸药剂的微粒。
10、在一个实施例中，载体可包含编码本文所述的核糖核苷酸药剂的多核苷酸。所述载体可以是表达载体。所述载体可以是病毒载体。所述病毒载体可以是逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体或慢病毒载体。所述病毒载体可以是慢病毒载体。
11、在一个实施例中，慢病毒载体可包含编码本文所述的核糖核苷酸药剂的多核苷酸。
12、在一个实施例中，所述载体可以进一步包含启动子。所述载体可以进一步包含红系特异性启动子。所述红系特异性启动子可以是α-血影蛋白启动子、锚蛋白-1启动子、γ-珠蛋白启动子或β-珠蛋白启动子。所述启动子可以是iii型rna聚合酶iii启动子。所述启动子可以是u6或h1启动子。所述启动子可以是trna或cmv启动子。
13、在一个实施例中，所述载体可以包含增强子，例如红系特异性增强子。
14、在一个实施例中，宿主细胞可包含载体，所述载体包含编码本文所述的核糖核苷酸药剂的核酸序列。
15、在一个实施例中，用于治疗患者的镰状细胞病的方法可包含施用有效量的本文所述的核糖核苷酸药剂。所述镰状细胞病可以是血红蛋白ss病、血红蛋白sc病、血红蛋白sb+(β)地中海贫血、血红蛋白sb 0(β-零)地中海贫血、血红蛋白sd、血红蛋白se或血红蛋白so。所述镰状细胞病可以是镰状细胞贫血(ss)、镰状血红蛋白-c病(sc)、镰状β-加性地中海贫血或镰状β-零地中海贫血。
16、在一个实施例中，用于治疗患者的镰状细胞病的并发症的方法可包含施用有效量的本文所述的核糖核苷酸药剂。所述镰状细胞病的并发症可以是镰状细胞危象、血管闭塞性危象、急性胸部综合征、再生障碍性危象、溶血性危象、指炎、急性胸部综合征、癫痫发作、中风、局部缺血、短暂性脑缺血发作、缺血性结肠炎或其组合。
17、在一个实施例中，用于促进细胞中的β-珠蛋白合成的方法可包含施用有效量的本文所述的核糖核苷酸药剂。
18、在一个实施例中，用于治疗患者的镰状细胞病的方法包含施用有效量的本文所述的核糖核苷酸药剂、本文所述的组合物、本文所述的微粒、本文所述的载体或其组合。
19、在一个实施例中，用于治疗患者的镰状细胞病的并发症的方法包含施用有效量的本文所述的核糖核苷酸药剂、本文所述的组合物、本文所述的微粒、本文所述的载体或其组合。
20、在一个实施例中，用于促进细胞中的β-珠蛋白合成的方法包含施用有效量的本文所述的核糖核苷酸药剂、本文所述的组合物、本文所述的微粒、本文所述的载体或其组合。
21、在一个实施例中，用于治疗有需要的患者的镰状细胞病的离体方法包含(a)从患有镰状细胞病的患者获得造血干细胞和祖细胞，任选地原血细胞(造血干细胞)；(b)向所述造血干细胞和祖细胞施用有效量的本文所述的核糖核苷酸本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种核糖核苷酸药剂，其降低丝氨酸/苏氨酸-蛋白激酶3(RIOK3)的表达。
2.根据权利要求1所述的核糖核苷酸药剂，其中所述核糖核苷酸药剂是反义寡核苷酸、短发夹RNA(shRNA)、小干扰RNA(siRNA)、任选不对称iRNA(aiRNA)、微小RNA、迷你RNA、lncRNA、核酶或其组合。
3.根据权利要求1或2所述的核糖核苷酸药剂，其中所述核糖核苷酸药剂是短发夹状RNA(shRNA)。
4.根据权利要求3所述的核糖核苷酸药剂，其中所述shRNA包含有包含SEQ ID NO:3的核苷酸序列的正向序列。
5.根据权利要求3所述的核糖核苷酸药剂，其中所述shRNA包含有包含SEQ ID NO:4的核苷酸序列的反向序列。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的核糖核苷酸药剂，其中所述药剂进一步降低B细胞淋巴瘤/白血病11A(BCL11A)的表达。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的核糖核苷酸药剂，其中所述药剂进一步降低淋巴瘤/白血病相关因子(LRF)的表达。
8.根据权利要求1至7中任一项所述
9.根据权利要求1至8中任一项所述的核糖核苷酸药剂，其中所述药剂进一步增加血红蛋白γ、任选HBG1、HGB2或两者的表达。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的核糖核苷酸药剂，其中所述药剂进一步降低血红蛋白β(HBB)的表达。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的核糖核苷酸药剂，其中所述药剂靶向SEQ IDNO:1的mRNA序列。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的核糖核苷酸药剂，其中所述药剂靶向SEQ IDNO:2的mRNA序列。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的核糖核苷酸药剂，其中所述靶标进一步包含处于SEQ ID NO:2的3'和/或5'位处的1-20个核糖核苷酸的侧翼序列。
14.一种组合物，其包含根据权利要求1至13中任一项所述的核糖核苷酸药剂。
15.根据权利要求14所述的组合物，其中所述组合物是药物组合物。
16.根据权利要求14或15所述的组合物，其中所述组合物进一步包含佐剂、载剂、缓冲剂、抗氧化剂、润湿剂、润滑剂、胶凝剂、增稠剂、粘合剂、崩解剂、湿润剂、防腐剂、稀释剂、稳定剂、填充剂、赋形剂或其组合。
17.一种微粒，其包含根据权利要求1至13中任一项所述的核糖核苷酸药剂。
18.根据权利要求17所述的微粒，其中所述微粒是微球、微胶囊、纳米球、纳米胶囊或纳米颗粒。
19.根据权利要求17所述的微粒，其中所述微粒包含脂质载剂。
20.一种组合物，其包含根据权利要求17所述的微粒。
21.根据权利要求20所述的组合物，其中所述微粒包含微球、微胶囊、纳米球、纳米胶囊、纳米颗粒或其组合。
22.一种载体，其包含编码根据权利要求1至13中任一项所述的核糖核苷酸药剂的多核苷酸。
23.根据权利要求22所述的载体，其中所述载体是病毒载体。
24.根据权利要求23所述的载体，其中所述病毒载体是逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体或慢病毒载体。
25.根据权利要求24所述的载体，其中所述病毒载体是慢病毒载体。
26.根据权利要求22至25中任一项所述的载体，其中所述载体进一步包含红系特异性启动子。
27.根据权利要求26所述的载体，其中所述红系特异性启动子是α-血影蛋白启动子、锚蛋白-1启动子、γ-珠蛋白启动子或β-珠蛋白启动子。
28.根据权利要求22至25中任一项所述的载体，其中所述启动子是III型RNA聚合酶III启动子。
29.根据权利要求28所述的载体，其中所述启动子是U6或H1启动子。
30.根据权利要求22至25中任一项所述的载体，其中所述启动子是tRNA或CMV启动子。
31.根据权利要求22至30中任一项所述的载体，其中所述载体进一步包含增强子或红系特异性增强子。
32.根据权利要求22所述的载体，其中所述载体是表达载体。
33.一种宿主细胞，其包含根据权利要求32所述的载体。
34.一种用于治疗患者的镰状细胞病的方法，其包含施用有效量的根据权利要求1至13中任一项所述的核糖核苷酸药剂、根据权利要求14至16中任一项所述的组合物、根据权利要求17至19所述的微粒、根据权利要求22至31所述的载体或其组合...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种核糖核苷酸药剂，其降低丝氨酸/苏氨酸-蛋白激酶3(riok3)的表达。
2.根据权利要求1所述的核糖核苷酸药剂，其中所述核糖核苷酸药剂是反义寡核苷酸、短发夹rna(shrna)、小干扰rna(sirna)、任选不对称irna(airna)、微小rna、迷你rna、lncrna、核酶或其组合。
3.根据权利要求1或2所述的核糖核苷酸药剂，其中所述核糖核苷酸药剂是短发夹状rna(shrna)。
4.根据权利要求3所述的核糖核苷酸药剂，其中所述shrna包含有包含seq id no:3的核苷酸序列的正向序列。
5.根据权利要求3所述的核糖核苷酸药剂，其中所述shrna包含有包含seq id no:4的核苷酸序列的反向序列。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的核糖核苷酸药剂，其中所述药剂进一步降低b细胞淋巴瘤/白血病11a(bcl11a)的表达。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的核糖核苷酸药剂，其中所述药剂进一步降低淋巴瘤/白血病相关因子(lrf)的表达。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的核糖核苷酸药剂，其中所述药剂进一步增加源自znf结构域的pogo转座因子(pogz)的表达。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的核糖核苷酸药剂，其中所述药剂进一步增加血红蛋白γ、任选hbg1、hgb2或两者的表达。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的核糖核苷酸药剂，其中所述药剂进一步降低血红蛋白β(hbb)的表达。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的核糖核苷酸药剂，其中所述药剂靶向seq idno:1的mrna序列。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的核糖核苷酸药剂，其中所述药剂靶向seq idno:2的mrna序列。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的核糖核苷酸药剂，其中所述靶标进一步包含处于seq id no:2的3'和/或5'位处的1-20个核糖核苷酸的侧翼序列。
14.一种组合物，其包含根据权利要求1至13中任一项所述的核糖核苷酸药剂。
15.根据权利要求14所述的组合物，其中所述组合物是药物组合物。
16.根据权利要求14或15所述的组合物，其中所述组合物进一步包含佐剂、载剂、缓冲剂、抗氧化剂、润湿剂、润滑剂、胶凝剂、增稠剂、粘合剂、崩解剂、湿润剂、防腐剂、稀释剂、稳定剂、填充剂、赋形剂或其组合。
17.一种微粒，其包含根据权利要求1至13中任一项所述的核糖核苷酸药剂。
18.根据权利要求17所述的微粒，其中所述微粒是微球、微胶囊、纳米球、纳米胶囊或纳米颗粒。
19.根据权利要求17所述的微粒，其中所述微粒包含脂质载剂。
20.一种组合物，其包含根据权利要求17所述的微粒。
21.根据权利要求20所述的组合物，其中所述微粒包含微球、微胶囊、纳米球、纳米胶囊、纳米颗粒或其组合。
22.一种载体，其包含编码根据权利要求1至13中任一项所述的核糖核苷酸药剂的多核苷酸。
23.根据权利要求22所述的载体，其中所述载体是病毒载体。
24.根据权利要求23所述的载体，其中所述病毒载体是逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体或慢病毒载体。
25.根据权利要求24所述的载体，其中所述病毒载体是慢病毒载体。
26.根据权利要求22至25中任一项所述的载体，其中所述载体进一步包含红系特异性启动子。
27.根据权利要求26所述的载体，其中所述红系特异性启动子是α-血影蛋白启动子、锚蛋白-1启动子、γ-珠蛋白启动子或β-珠蛋白启动子。
28.根据权利要求22至25中任一项所述的载体，其中所述启动子是iii型rna聚合酶iii启动子。
29.根据权利要求28所述的载体，其中所述启动子是u6或h1启动子。
30.根据权利要求22至25中任一项所述的载体，其中所述启动子是trna或cmv启动子。
31.根据权利要求22至30中任一项所述的载体，其中所述载体进一步包含增强子或红系特异性增强子。
32.根据权利要求22所述的载体，其中所述载体是表达载体。
33.一种宿主细胞，其包含根...
【专利技术属性】
技术研发人员：约翰·菲茨杰拉德·蒂斯代尔，比约格·古德蒙德斯多蒂尔，拉克斯米纳特·图姆布鲁，
申请(专利权)人：美国卫生及公众服务部代表，
类型：发明
国别省市：
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