肿瘤储存及细胞培养组合物制造技术

本文提供了可用于制造

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】肿瘤储存及细胞培养组合物

技术介绍

[0001]在癌症患者中，继宿主免疫抑制之后，利用通过快速扩增方案
(REP)
体外培养的肿瘤浸润性淋巴细胞
(TIL)
的过继性细胞疗法已成为成功的过继性细胞疗法
。
然而，目前的
TIL
制造和治疗过程受到持续时间
、
成本
、
无菌性问题以及本文所述其他因素的限制，使得治疗癌症患者的潜力受到严重限制
。
[0002]无菌性是
TIL
成功生长的重要因素
。
例如，必须通过手术切除小心保持样品的无菌性以限制微生物污染的风险
。
在将肿瘤样品输送至
TIL
处理设备
、
在处理前储存肿瘤样本以及在处理肿瘤样本以产生高级别治疗性
TIL
的过程中，也必须确保无菌
。
因此，需要在
TIL
治疗剂的制造中提供无菌保障的试剂
。

技术实现思路

[0003]本文提供了可用于制造
TIL
治疗剂的肿瘤储存组合物
、
细胞培养基及肿瘤洗涤缓冲液
。
这些试剂允许制造高品质的
TIL
治疗剂，同时降低微生物生物负荷并在
TIL
制造过程中提供无菌保障
。
具体地说，本文提供的肿瘤储存组合物有利地使细菌
(
例如革兰氏阴性及革兰氏阳性细菌物种
)
及真菌污染减到最少，同时不会明显影响细胞存活率
。
另外的，在所主张的细胞培养基中培养的淋巴细胞能够在具有极少细菌
(
例如革兰氏阳性及革兰氏阴性细菌
)
和
/
或真菌污染情况下进行分化
、
耗竭和
/
或活化
。
[0004]在一方面，本文提供了一种用于低温储存肿瘤样本的组合物
。
该组合物包含：
a)
无血清
、
无动物组分的冷冻保存培养基；和
b)
抗生素组分，该抗生素组分包含：
1)
抗生素组合，该抗生素组合选自：
i)
庆大霉素
(gentamicin)
和万古霉素
(vancomycin)
；以及
ii)
庆大霉素和克林霉素
(clindamycin)
；或者
2)
为万古霉素的抗生素
。
[0005]在一些实施方式中，万古霉素的浓度为约
50
‑
600
μ
g/mL。
在某些实施方式中，克林霉素的浓度为约
400
‑
600
μ
g/mL。
在一些实施方式中，庆大霉素的浓度为约
50
μ
g/mL。
[0006]在示例性实施方式中，该抗生素组分包含约
50
μ
g/mL
庆大霉素及约
400
‑
600
μ
g/mL
克林霉素
。
在某些实施方式中，该抗生素组分包含约
50
μ
g/mL
庆大霉素及约
50
‑
600
μ
g/mL
万古霉素
。
在某些实施方式中，该抗生素组分包含约
50
μ
g/mL
庆大霉素及约
100
μ
g/mL
万古霉素
。
[0007]在一些实施方式中，该抗生素组分还包含抗真菌性抗生素
。
在某些实施方式中，该抗真菌性抗生素为双性霉素
B(amphotericin B)。
在一些实施方式中，该双性霉素
B
的浓度为约
2.5
‑
10
μ
g/mL。
[0008]在示例性实施方式中，该冷冻保存培养基包含：
i)
一种以上选自钾离子
、
钠离子
、
镁离子及钙离子的电解质；以及
ii)
在生理条件及低温条件下有效的生物
pH
缓冲液
。
在一些实施方式中，钾离子的浓度在约
35
‑
45mM
范围内，钠离子的浓度在约
80
‑
120mM
范围内，镁离子的浓度在约2‑
10mM
范围内，并且，钙离子的浓度在约
0.01
‑
0.1mM
范围内
。
[0009]在一些实施方式中，该组合物还包含营养有效量的至少一种单糖
。
在某些实施方式中，该组合物还包含不可透过细胞膜且在冷暴露期间有效抵抗细胞膨胀的不透过性阴离
子，该阴离子选自以下：乳糖酸根
、
葡糖酸根
、
柠檬酸根及甘油磷酸根
。
在一些实施方式中，该组合物还包含对
ATP
再生有效的底物，该底物为选自如下的至少一个：腺苷
、
果糖
、
核糖及腺嘌呤
。
在某些实施方式中，该组成物还包含至少一种选自于
EDTA
或维生素
E
的调节凋亡诱导的细胞死亡的试剂
。
[0010]在一些实施方式中，该冷冻保存培养基包含
10
％ DMSO。
[0011]在另一方面，本文提供了一种肿瘤样本组合物，其包含：
a)
含有多个肿瘤细胞及多个肿瘤浸润淋巴细胞
(TIL)
的肿瘤样本；以及
b)
低温储存培养基
。
该储存培养基包含：
i)
无血清
、
无动物组分的冷冻保存培养基；和
ii)
抗生素，该抗生素包含：
1)
抗生素组合，该抗生素组合选自：
i)
庆大霉素及万古霉素；和
ii)
庆大霉素及克林霉素；或
2)
为万古霉素的抗生素
。
[0012]在一些实施方式中，该肿瘤样本为实体瘤肿瘤样本
。
在某些实施方式中所述肿瘤样本为如下癌症类型的一种：乳腺癌
、
胰腺癌
、
前列腺癌
、
结直肠癌
、
肺癌
、
脑癌
、
肾癌
、
胃癌
、
皮肤癌
(
包括但不限于鳞状细胞癌
、...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.
一种用于低温储存肿瘤样本的组合物，其中，所述组合物包含：
a)
无血清
、
无动物组分的冷冻保存培养基；和
b)
抗生素组分，其包含：
1)
选自以下的抗生素组合：
i.
庆大霉素和万古霉素，以及
ii.
庆大霉素和克林霉素；或者
2)
万古霉素作为抗生素
。2.
如权利要求1所述的组合物，其中，所述抗生素组分包含约
50
‑
600
μ
g/mL
浓度的万古霉素
。3.
如权利要求1所述的组合物，其中，所述抗生素组分包含约
100
μ
g/mL
浓度的万古霉素
。4.
如权利要求1所述的组合物，其中，所述抗生素组分包含约
400
‑
600
μ
g/mL
浓度的克林霉素
。5.
如权利要求1所述的组合物，其中，所述抗生素组分包含约
50
μ
g/mL
浓度的庆大霉素
。6.
如权利要求1所述的组合物，其中，所述抗生素组分包含约
50
‑
600
μ
g/mL
浓度的万古霉素
。7.
如权利要求1所述的组合物，其中，所述抗生素组分包含约
100
μ
g/mL
浓度的万古霉素
。8.
如权利要求1所述的组合物，其中，所述抗生素组分包含抗生素组合，所述抗生素组合包含约
50
μ
g/mL
的庆大霉素和约
400
‑
600
μ
g/mL
的克林霉素
。9.
如权利要求1所述的组合物，其中，所述抗生素组分包含抗生素组合，所述抗生素组合包含约
50
μ
g/mL
的庆大霉素和约
50
‑
600
μ
g/mL
的万古霉素
。10.
如权利要求1所述的组合物，其中，所述组合物还包含抗真菌性抗生素
。11.
如权利要求8所述的组合物，其中，所述抗真菌性抗生素为双性霉素
B。12.
如权利要求9所述的组合物，其中，所述双性霉素
B
的浓度为约
2.5
‑
10
μ
g/mL。13.
如权利要求1至
12
中任一项所述的组合物，其中，所述冷冻保存培养基包含：
i.
选自钾离子
、
钠离子
、
镁离子和钙离子的一种以上电解质；和
ii.
在生理条件及低温条件下有效的生物
pH
缓冲液
。14.
如权利要求
13
所述的组合物，其中，所述钾离子的浓度在约
35
‑
45mM
范围内，所述钠离子的浓度在约
80
‑
120mM
范围内，所述镁离子的浓度在约2‑
10mM
范围内，并且所述钙离子的浓度在约
0.01
‑
0.1mM
范围内
。15.
如权利要求
13
所述的组合物，其中，所述组合物还包含营养有效量的至少一种单糖
。16.
如权利要求
13
所述的组合物，其中，所述组合物还包含不可透过细胞膜且有效抵抗冷暴露期间的细胞膨胀的不透过性阴离子，所述阴离子选自如下：乳糖酸根
、
葡糖酸根
、
柠檬酸根和甘油磷酸根
。17.
如权利要求
13
所述的组合物，其中，所述组合物还包含对
ATP
再生有效的底物，所述底物为选自如下中的至少一个：腺苷
、
果糖
、
核糖和腺嘌呤
。18.
如权利要求
13
所述的组合物，其中，所述组合物还包含至少一种调节凋亡诱导的细
胞死亡的试剂，所述试剂选自
EDTA
或维生素
E。19.
如权利要求1至
12
中任一项所述的组合物，其中，所述冷冻保存培养基包含
10
％
DMSO。20.
一种肿瘤样本组合物，其包含：
a)
肿瘤样本，所述肿瘤样本包含多个肿瘤细胞和多个肿瘤浸润淋巴细胞
(TIL)
；和
b)
低温储存培养基，其包含：
i.
无血清
、
无动物组分的冷冻保存培养基；和
ii.
抗生素组分，其包含：
I)
选自以下的抗生素组合：
1.
庆大霉素和万古霉素，以及
2.
庆大霉素和克林霉素；或者
II)
万古霉素作为抗生素
。21.
如权利要求
20
所述的组合物，其中，所述肿瘤样本为实体肿瘤样本
。22.
如权利要求
21
所述的组合物，其中，所述肿瘤样本为如下癌症类型之一：乳腺癌
、
胰腺癌
、
前列腺癌
、
结直肠癌
、
肺癌
、
脑癌
、
肾癌
、
胃癌
、
皮肤癌
(
包括但不限于鳞状细胞癌
、
基底细胞癌和黑色素瘤
)、
宫颈癌
、
头颈癌
、
胶质母细胞瘤
、
卵巢癌
、
肉瘤
、
膀胱癌和胶质母细胞瘤
。23.
如权利要求
20
所述的组合物，其中，所述肿瘤样本为液体肿瘤样本
。24.
如权利要求
23
所述的组合物，其中，所述液体肿瘤样本为来自血液恶性肿瘤的液体肿瘤样本
。25.
如权利要求
20
所述的组合物，其中，所述肿瘤样本从原发性肿瘤中获得
。26.
如权利要求
20
所述的组合物，其中，所述肿瘤样本从侵袭性肿瘤中获得
。27.
如权利要求
20
所述的组合物，其中，所述肿瘤样本从转移性肿瘤中获得
。28.
如权利要求
20
所述的组合物，其中，所述肿瘤样本从恶性黑色素瘤中获得
。29.
如权利要求
20
所述的组合物，其中，所述多个
TIL
包含至少
90
％活细胞
。30.
如权利要求
20
至
29
中任一项所述的组合物，其中，所述抗生素组分包含约
50
‑
600
μ
g/mL
浓度的万古霉素
。31.
如权利要求
20
至
29
中任一项所述的组合物，其中，所述抗生素组分包含约
100
μ
g/mL
浓度的万古霉素
。32.
如权利要求
20
至
29
中任一项所述的组合物，其中，所述抗生素组分包含约
400
‑
600
μ
g/mL
浓度的克林霉素
。33.
如权利要求
20
至
29
中任一项所述的组合物，其中，所述抗生素组分包含约
50
μ
g/mL
浓度的庆大霉素
。34.
如权利要求
20
至
29
中任一项所述的组合物，其中，所述抗生素组分包含约
100
μ
g/mL
浓度的万古霉素
。35.
如权利要求
20
至
29
中任一项所述的组合物，其中，所述抗生素组分包含抗生素组合，所述抗生素组合包含约
50
μ
g/mL
的庆大霉素和约
400
‑
600
μ
g/mL
的克林霉素
。36.
如权利要求
20
至
29
中任一项所述的组合物，其中，所述抗生素组分包含抗生素组合，所述抗生素组合包含约
50
μ
g/mL
的庆大霉素和约
50
‑
600
μ
g/mL
的万古霉素
。
37.
如权利要求
20
至
29
中任一项所述的组合物，其中，所述抗生素组分包含抗生素组合，所述抗生素组合包含约
50
μ
g/mL
的庆大霉素和约
100
μ
g/mL
的万古霉素
。38.
如权利要求
20
至
29
中任一项所述的组合物，其中，所述组合物还包含抗真菌性抗生素
。39.
如权利要求
38
所述的组合物，其中，所述抗真菌性抗生素为双性霉素
B。40.
如权利要求
39
所述的组合物，其中，所述双性霉素
B
的浓度为约
2.5
‑
10
μ
g/mL。41.
如权利要求
20
至
40
中任一项所述的组合物，其中，所述冷冻保存培养基包含：
i.
选自钾离子
、
钠离子
、
镁离子和钙离子的一种以上电解质；和
ii.
在生理条件及低温条件下有效的生物
pH
缓冲液
。42.
如权利要求
41
所述的组合物，其中，所述钾离子的浓度在约
35
‑
45mM
范围内，所述钠离子的浓度在
80
‑
120mM
范围内，所述镁离子的浓度在约2‑
10mM
范围内，并且所述钙离子的浓度在
0.01
‑
0.1mM
范围内
。43.
如权利要求
41
所述的组合物，其中，所述组合物还包含营养有效量的至少一种单糖
。44.
如权利要求
41
所述的组合物，其中，所述组合物还包含不可透过细胞膜且有效抵抗冷暴露期间的细胞膨胀的不透过性阴离子，所述阴离子选自如下：乳糖酸根
、
葡糖酸根
、
柠檬酸根和甘油磷酸根
。45.
如权利要求
41
所述的组合物，其中，所述组合物还包含对
ATP
再生有效的底物，所述底物为选自如下中的至少一个：腺苷
、
果糖
、
核糖和腺嘌呤
。46.
如权利要求
37
所述的组合物，其中，所述组合物还包含至少一种调节凋亡诱导的细胞死亡的试剂，所述试剂选自
EDTA
或维生素
E。47.
如权利要求
20
至
46
中任一项所述的组合物，其中，所述冷冻保存培养基包含
10
％
DMSO。48.
一种细胞培养基组合物，其包含：
a.
基础培养基，其包含：
i.
葡萄糖；
ii.
多种盐；
iii.
多种氨基酸和维生素；
b.
谷氨酰胺或谷氨酰胺衍生物；
c.
血清；以及
d.
抗生素组分，其包含：
1)
选自以下的抗生素组合：
i.
庆大霉素和万古霉素；和
ii.
庆大霉素和克林霉素；或者
2)
万古霉素作为抗生素
。49.
一种细胞培养基组合物，其包含：
a.
基础培养基，其包含：
i.
葡萄糖；
ii.
多种盐；
iii.
多种氨基酸和维生素；
b.
血清白蛋白；
c.
胆固醇
NF
；
d.
可选的谷氨酰胺或谷氨酰胺衍生物；以及
e.
抗生素组分，其包含：
1)
选自以下的抗生素组合：
i.
庆大霉素和万古霉素；和
ii.
庆大霉素和克林霉素；或者
2)
万古霉素作为抗生素
。50.
一种细胞培养基组合物，其包含：
a)
成分确定的培养基或无血清培养基，其包含：
i.
葡萄糖；
ii.
多种盐；
iii.
多种氨基酸和维生素；
b)
可选的转铁蛋白；
c)
可选的胰岛素；
d)
可选的白蛋白；
e)
胆固醇
NF
；
f)
可选的谷氨酰胺或谷氨酰胺衍生物；以及
g)
抗生素组分，其包含：
1)
选自以下的抗生素组合：
i.
庆大霉素和万古霉素；和
ii.
庆大霉素和克林霉素；或者
2)
万古霉素作为抗生素
。51.
如权利要求
50
所述的细胞培养基，其中，所述细胞培养基包含
(
可选的重组的
)
转铁蛋白
、(
可选的重组的
)
胰岛素和
(
可选的重组的
)
白蛋白
。52.
如权利要求
50
或
51
所述的细胞培养基，其中，所述成分确定的培养基或无血清培养基包含基础培养基和血清补充剂和
/
或血清替代物
。53.
如权利要求
52
所述的细胞培养基组合物，其中，所述基础细胞培养基包括：
CTS
TM
OpTmizer
TM
T
细胞扩增基础培养基
、CTS
TM
OpTmizer
TM
T
细胞扩增
SFM、CTS
TM
AIM
‑
V
培养基
、CTS
TM
AIM
‑
V SFM、LymphoONE
TM
T
细胞扩增无外源物质培养基
、
杜尔贝科氏改良型伊格尔氏培养基
(DMEM)、
最低必需培养基
(MEM)、
伊格尔氏基础培养基
(BME)、RPMI 1640、F
‑
10、F
‑
12、
最低必需培养基
(
α
MEM)、
格拉斯哥氏最低必须培养基
(G
‑
MEM)、RPMI
生长培养基或伊斯科夫氏改良型杜尔贝科氏培养基
。54.
如权利要求
52
或
53
所述的细胞培养基，其中，所述血清补充剂或血清替代物选自如下：
CTS
TM
OpTmizer T
细胞扩增血清补充剂和
CTS
TM
免疫细胞血清替代物
。55.
如权利要求
50
至
54
中任一项所述的细胞培养基，其中，所述成分确定的培养基或无血清培养基包含一种以上白蛋白或白蛋白替代物
。56.
如权利要求
50
至
55
中任一项所述的细胞培养基，其中，所述成分确定的培养基或无
血清培养基包含一种以上转铁蛋白或转铁蛋白替代物
。57.
如权利要求
50
至
56
中任一项所述的细胞培养基，其中，所述成分确定的培养基或无血清培养基包含一种以上胰岛素或胰岛素替代物
。58.
如权利要求
50
至
57
中任一项所述的细胞培养基，其中，所述成分确定的培养基或无血清培养基包含一种以上抗氧化剂
。59.
如权利要求
50
至
58
中任一项所述的细胞培养基，其中，所述成分确定的培养基或无血清培养基包含一种以上胶原蛋白前体和一种以上微量元素
。60.
如权利要求
50
至
59
中任一项所述的细胞培养基，其中，所述成分确定的培养基或无血清培养基包含选自如下的一种以上成分：甘氨酸
、L
‑
组氨酸
、L
‑
异亮氨酸
、L
‑
甲硫氨酸
、L
‑
苯丙氨酸
、L
‑
脯氨酸
、L
‑
羟脯氨酸
、L
‑
丝氨酸
、L
‑
苏氨酸
、L
‑
色氨酸
、L
‑
酪氨酸
、L
‑
缬氨酸
、
硫胺素
、
还原型谷胱甘肽
、L
‑
抗坏血酸
‑2‑
磷酸盐
、
铁饱和转铁蛋白
、
胰岛素和含有微量元素部分的化合物，所述微量元素部分为
Ag
+
、Al
3+
、Ba
2+
、Cd
2+
、Co
2+
、Cr
3+
、Ge
4+
、Se
4+
、Br、T、Mn
2+
、P、Si
4+
、V
5+
、Mo
6+
、Ni
2+
、Rb
+
、Sn
2+
和
Zr
4+
。61.
如权利要求
50
至
60
中任一项所述的细胞培养基，其中，所述成分确定的培养基或无血清培养基还包含
L
‑
谷氨酰胺
、
碳酸氢钠和
/
或2‑
巯基乙醇
。62.
如权利要求
48
至
61
中任一项所述的组合物，其中，所述抗生素组分包含约
50
‑
600
μ
g/mL
浓度的万古霉素
。63.
如权利要求
48
至
61
中任一项所述的组合物，其中，所述抗生素组分包含约
100
μ
g/mL
浓度的万古霉素
。64.
如权利要求
48
至
61
中任一项所述的组合物，其中，所述抗生素组分包含约
400
‑
600
μ
g/mL
浓度的克林霉素
。65.
如权利要求
48
至
61
中任一项所述的组合物，其中，所述抗生素组分包含约
50
μ
g/mL
浓度的庆大霉素
。66.
如权利要求
48
至
61
中任一项所述的组合物，其中，所述抗生素组分为约
50
‑
600
μ
g/mL
浓度的万古霉素
。67.
如权利要求
48
至
61
中任一项所述的组合物，其中，所述抗生素组分为约
100
μ
g/mL
浓度的万古霉素
。68.
如权利要求
48
至
61
中任一项所述的组合物，其中，所述抗生素组分包含抗生素组合，所述抗生素组合包含约
50
μ
g/mL
的庆大霉素和约
400
‑
600
μ
g/mL
的克林霉素
。69.
如权利要求
48
至
61
中任一项所述的组合物，其中，所述抗生素组分包含抗生素组合，所述抗生素组合包含约
50
μ
g/mL
的庆大霉素和约
50
‑
600
μ
g/mL
的万古霉素
。70.
如权利要求
48
至
61
中任一项所述的组合物，其中，所述抗生素组分包含抗生素组合，所述抗生素组合包含约
50
μ
g/mL
的庆大霉素和约
100
μ
g/mL
的万古霉素
。71.
如权利要求
48、49
或
52
至
70
中任一项所述的细胞培养基，其中，所述基础培养基为
RPMI 1640
培养基
、DMEM
培养基或它们的组合
。72.
如权利要求
48、49
或
52
至
70
中任一项所述的细胞培养基，其中，所述基础培养基为
DMEM
培养基
。73.
如权利要求
48
至
72
中任一项所述的细胞培养基，其中，所述细胞培养基包含谷氨酰胺衍生物，即
L
‑
丙氨酸
‑
L
‑
谷氨酰胺
(GutaMAX)。
74.
如权利要求
48
至
72
中任一项所述的细胞培养基，其中，所述细胞培养基包含谷氨酰胺，即
L
‑
谷氨酰胺
。75.
如权利要求
48
所述的细胞培养基，其中，所述血清为人类
AB
血清
。76.
如权利要求
48
至
75
中任一项所述的细胞培养基，其中，所述细胞培养基还包含
IL
‑
2。77.
如权利要求
76
所述的细胞培养基，其中，所述
IL
‑2是浓度为约
3,000
‑
6,000IU/mL
的
IL
‑
2。78.
如权利要求
48
至
77
中任一项所述的细胞培养基，其中，所述细胞培养基还包含抗
CD3
抗体
。79.
如权利要求
78
所述的细胞培养基，其中，所述抗
CD3
抗体是浓度为约
30ng/mL
的
OKT
‑
3。80.
如权利要求
48
至
79
中任一项所述的细胞培养基，其中，所述细胞培养基还包含抗原呈递饲养细胞
。81.
如权利要求
78
所述的细胞培养基，其中，所述细胞培养基还包含约
6,000IU/mL IL
‑
2。82.
如权利要求
78
所述的细胞培养基，其中，所述细胞培养基还包含约
3,000IU/mL IL
‑2和约
30ng/mL OKT
‑
3。83.
如权利要求
78
所述的细胞培养基，其中，所述细胞培养基还包含约
3,000IU/mL IL
‑
2、
约
30ng/mL OKT
‑3和抗原呈递饲养细胞
。84.
如权利要求
78
所述的细胞培养基，其中，所述细胞培养基还包含约
6,000IU/mL IL
‑
2、
约
30ng/mL OKT
‑3和抗原呈递饲养细胞
。85.
如权利要求
78
所述的细胞培养基，其中，所述细胞培养基还包含约
3,000IU/mL IL
‑
2。86.
一种肿瘤浸润淋巴细胞组合物，其包含：
a)
多个肿瘤浸润淋巴细胞
(TIL)
；和
b)
细胞培养基组合物，其包含：
i.
基础培养基，其包含：
1.
葡萄糖，
2.
多种盐，
3.
多种氨基酸和维生素；
ii.
谷氨酰胺或谷氨酰胺衍生物；
iii.
血清；和
iv.
抗生素组分，其包含：
I)
选自以下的抗生素组合：
1.
庆大霉素和万古霉素；以及
2.
庆大霉素和克林霉素；或者
II)
万古霉素作为抗生素
。87.
一种肿瘤浸润淋巴细胞组合物，其包含：
a)
多个肿瘤浸润淋巴细胞
(TIL)
；和
b)
细胞培养基组合物，所述细胞培养基组合物为成分确定的培养基或无血清培养基，所述培养基包含：
i.
葡萄糖，
ii.
多种盐，
iii.
多种氨基酸和维生素；
c)
可选的转铁蛋白；
d)
可选的胰岛素；
e)
可选的白蛋白；
f)
胆固醇
NF
；
g)
可选的谷氨酰胺或谷氨酰胺衍生物；以及
h)
抗生素组分，其包含：
1)
选自以下的抗生素组合：
i.
庆大霉素和万古霉素；以及
ii.
庆大霉素和克林霉素；或者
2)
万古霉素作为抗生素
。88.
如权利要求
87
所述的组合物，其中，所述组合物包含
(
可选的重组的
)
转铁蛋白
、(
可选的重组的
)
胰岛素和
(
可选的重组的
)
白蛋白
。89.
如权利要求
87
或
88
所述的组合物，其中，所述成分确定的培养基或无血清培养基包含基础培养基和血清补充剂和
/
或血清替代物
。90.
如权利要求
89
所述的组合物，其中，所述基础细胞培养基包括但不限于：
CTS
TM
OpTmizer
TM
T
细胞扩增基础培养基
、CTS
TM
OpTmizer
TM
T
细胞扩增
SFM、CTS
TM
AIM
‑
V
培养基
、CTS
TM
AIM
‑
V SFM、LymphoONE
TM
T
细胞扩增无外源物质培养基
、
杜尔贝科氏改良型伊格尔氏培养基
(DMEM)、
最低必需培养基
(MEM)、
伊格尔氏基础培养基
(BME)、RPMI 1640、F
‑
10、F
‑
12、
最低必需培养基
(
α
MEM)、
格拉斯哥氏最低必须培养基
(G
‑
MEM)、RPMI
生长培养基或伊斯科夫氏改良型杜尔贝科氏培养基
。91.
如权利要求
89
或
90
所述的组合物，其中，所述血清补充剂或血清替代物选自如下：
CTS
TM
OpTmizer T
细胞扩增血清补充剂和
CTS
TM
免疫细胞血清替代物
。92.
如权利要求
87
至
91
中任一项所述的组合物，其中，所述成分确定的培养基或无血清培养基包含一种以上白蛋白或白蛋白替代物
。93.
如权利要求
87
至
92
中任一项所述的组合物，其中，所述成分确定的培养基或无血清培养基包含一种以上转铁蛋白或转铁蛋白替代物
。94.
如权利要求
87
至
93
中任一项所述的组合物，其中，所述成分确定的培养基或无血清培养基包含一种以上胰岛素或胰岛素替代物
。95.
如权利要求
87
至
94
中任一项所述的组合物，其中，所述成分确定的培养基或无血清培养基包含一种以上抗氧化剂
。96.
如权利要求
87
至
95
中任一项所述的组合物，其中，所述成分确定的培养基或无血清培养基包含一种以上胶原蛋白前体和一种以上微量元素
。97.
如权利要求
87
至
96
中任一项所述的组合物，其中，所述成分确定的培养基或无血清培养基包含选自如下的一种以上成分：甘氨酸
、L
‑
组氨酸
、L
‑
异亮氨酸
、L
‑
甲硫氨酸
、L
‑
苯丙
氨酸
、L
‑
脯氨酸
、L
‑
羟脯氨酸
、L
‑
丝氨酸
、L
‑
苏氨酸
、L
‑
色氨酸
、L
‑
酪氨酸
、L
‑
缬氨酸
、
硫胺素
、
还原型谷胱甘肽
、L
‑
抗坏血酸
‑2‑
磷酸盐
、
铁饱和转铁蛋白
、
胰岛素和含有微量元素部分的化合物，所述微量元素部分为
Ag
+
、Al
3+
、Ba
2+
、Cd
2+
、Co
2+
、Cr
3+
、Ge
4+
、Se
4+
、Br、T、Mn
2+
、P、Si
4+
、V
5+
、Mo
6+
、Ni
2+
、Rb
+
、Sn
2+
和
Zr
4+
。98.
如权利要求
87
至
97
中任一项所述的细胞培养基，其中，所述成分确定的培养基或无血清培养基还包含
L
‑
谷氨酰胺
、
碳酸氢钠和
/
或2‑
巯基乙醇
。99.
如权利要求
86
至
98
中任一项所述的组合物，其中，所述多个
TIL
展现出至少
90
％的活细胞
。100.
如权利要求
86
至
99
中任一项所述的组合物，其中，所述多个
TIL
展现出与不含万古霉素和克林霉素的对照肿瘤浸润淋巴细胞组合物相似的记忆性
TIL
群
。101.
如权利要求
86
至
100
中任一项所述的组合物，其中，所述多个
TIL
展现出与不含万古霉素和克林霉素的对照肿瘤浸润淋巴细胞组合物相似的分化
CD3+/CD4+、
活化
CD3+/CD4+
和耗竭
CD3+/CD4+TIL
群
。102.
如权利要求
86
至
100
中任一项所述的组合物，其中，所述多个
TIL
展现出与不含万古霉素和克林霉素的对照肿瘤浸润淋巴细胞组合物相似的分化
CD3+/CD8+、
活化
CD3+/CD8+
和耗竭
CD3+/CD8+TIL
群
。103.
如权利要求
86
至
102
中任一项所述的组合物，其中，所述抗生素组分包含约
50
‑
600
μ
g/mL
浓度的万古霉素
。104.
如权利要求
86
至
102
中任一项所述的组合物，其中，所述抗生素组分包含约
100
μ
g/mL
浓度的万古霉素
。105.
如权利要求
86
至
102
中任一项所述的组合物，其中，所述抗生素组分包含约
400
‑
600
μ
M
浓度的克林霉素
。106.
如权利要求
86
至
102
中任一项所述的组合物，其中，所述抗生素组分包含约
50
μ
g/mL
浓度的庆大霉素
。107.
如权利要求
86
至
102
中任一项所述的组合物，其中，所述抗生素组分为约
50
‑
600
μ
g/mL
浓度的万古霉素
。108.
如权利要求
86
至
102
中任一项所述的组合物，其中，所述抗生素组分为约
100
μ
g/mL
浓度的万古霉素
。109.
如权利要求
86
至
102
中任一项所述的组合物，其中，所述抗生素组分包含抗生素组合，所述抗生素组合包含约
50
μ
g/mL
的庆大霉素和约
400
‑
600
μ
g/mL
的克林霉素
。110.
如权利要求
86
至
102
中任一项所述的组合物，其中，所述抗生素组分包含抗生素组合，所述抗生素组合包含约
50
μ
g/mL
的庆大霉素和约
50
‑
600
μ
g/mL
的万古霉素
。111.
如权利要求
86
至
102
中任一项所述的组合物，其中，所述抗生素组分包含抗生素组合，所述抗生素组合包含约
50
μ
g/mL
的庆大霉素和约
100
μ
g/mL
的万古霉素
。112.
如权利要求
86
或
89
至
111
中任一项所述的组合物，其中，所述基础培养基为
RPMI 1640
培养基
、DMEM
培养基或它们的组合
。113.
如权利要求
86
或
89
至
111
中任一项所述的组合物，其中，所述基础培养基为
DMEM
培养基
。114.
如权利要求
86
至
113
中任一项所述的组合物，其中，所述组合物包含谷氨酰胺衍生
物，即
L
‑
丙氨酸
‑
L
‑
谷氨酰胺
(GutaMAX)。115.
如权利要求
86
至
113
中任一项所述的组合物，其中，所述组合物包含谷氨酰胺，即
L
‑
谷氨酰胺
。116.
如权利要求
86
所述的组合物，其中，所述血清为人类
AB
血清
。117.
如权利要求
86
至
116
中任一项所述的组合物，其中，所述细胞培养基还包含
IL
‑
2。118.
如权利要求
117
所述的组合物，其中，所述
IL
‑2是浓度为约
3,000
‑
6,000IU/mL
的
IL
‑
2。119.
如权利要求
117
所述的组合物，其中，所述细胞培养基还包含抗
CD3
抗体
。120.
如权利要求
119
所述的组合物，其中，所述抗
CD3
抗体是浓度为约
30ng/mL
的
OKT
‑
3。121.
如权利要求
86
至
120
中任一项所述的组合物，其中，所述细胞培养基还包含抗原呈递饲养细胞
。122.
如权利要求
86
至
121
中任一项所述的组合物，其中，所述细胞培养基包含约
6,000IU/mL IL
‑
2。123.
如权利要求
86
至
120
中任一项所述的组合物，其中，所述细胞培养基还包含约
6,000IU/mL IL
‑
2、
约
30ng/mL OKT
和抗原呈递饲养细胞
。124.
如权利要求
86
至
123
中任一项所述的组合物，其中，所述组合物基本上不含革兰氏阳性细菌
。125.
一种用于扩增
T
细胞的方法，其包括通过如下方式由获自受试者的肿瘤样本来扩增第一
T
细胞群：在包含抗生素组分的培养基中培养第一
T
细胞群，实现所述第一
T
细胞群的生长，其中所述抗生素组分包含：
i)
抗生素组合，所述抗生素组合选自
1)
庆大霉素和万古霉素，以及
2)
庆大霉素和克林霉素；或者
ii)
万古霉素作为抗生素
。126.
如权利要求
125
所述的方法，其中，所述培养基包含
IL
‑
2。127.
如权利要求
125
所述的方法，其中，所述第一
T
细胞群培养约7至
14
天的时间段
。128.
一种用于快速扩增
T
细胞的方法，其包括：使第一
T
细胞群与包含
IL
‑
2、OKT
‑
3(
抗
CD3
抗体
)、
抗原呈递细胞
(APC)
和抗生素组分的培养基接触，实现所述第一
T
细胞群的快速生长，由此产生第二
T
细胞群，其中所述快速扩增进行约7至
14
天的时间段，并且所述抗生素组分包含：
i)
抗生素组合，所述抗生素组合选自
1)
庆大霉素和万古霉素，以及
2)
庆大霉素和克林霉素；或者
ii)
万古霉素作为抗生素
。129.
如权利要求
125
至
128
中任一项所述的方法，其中，所述培养基还包含
IL
‑
15
和
IL
‑
21。130.
如权利要求
125
至
129
中任一项所述的方法，其中，所述抗生素组分包含约
50
‑
600
μ
g/mL
浓度的万古霉素
。131.
如权利要求
125
至
129
中任一项所述的方法，其中，所述抗生素组分包含约
100
μ
g/mL
浓度的万古霉素
。132.
如权利要求
125
至
129
中任一项所述的方法，其中，所述抗生素组分为约
100
μ
g/mL
浓度的万古霉素
。133.
如权利要求
125
至
129
中任一项所述的方法，其中，所述抗生素组分包含约
400
‑
600
μ
g/mL
浓度的克林霉素
。134.
如权利要求
125
至
129
中任一项所述的方法，其中，所述抗生素组分包含约
50
μ
g/mL
浓度的庆大霉素
。135.
如权利要求
125
至
129
中任一项所述的方法，其中，所述抗生素组分包含抗生素组合，所述抗生素组合包含约
50
μ
g/mL
浓度的庆大霉素和约
100
μ
g/mL
浓度的万古霉素
。136.
如权利要求
125
至
135
中任一项所述的方法，其中，所述扩增在基本上不含革兰氏阳性细菌的条件下发生
。137.
一种用于将肿瘤浸润淋巴细胞
(TIL)
扩增成治疗性
TIL
群的方法，其包括：
a)
提供获自受试者切除肿瘤的包含多个肿瘤细胞和
TIL
的样本；
b)
通过将所述样本处理成多个碎片，获得第一
TIL
群；
c)
将所述碎片添加至密闭系统中；
d)
通过在第一细胞培养基中培养所述第一
TIL
群来进行第一次扩增，产生第二
TIL
群，其中所述第一次扩增在提供第一透气表面区域的密闭容器中进行，所述第一次扩增进行约3‑
14
天以获得第二
TIL
群，其中自步骤
c)
至步骤
d)
的转变在不打开系统的情况下发生，以及所述第一细胞培养基包含
IL
‑2和第一抗生素组分；
e)
通过在第二细胞培养基中培养第二
TIL
群来进行第二次扩增，产生第三
TIL
群，其中所述第二次扩增进行约7‑
14
天以获得第三
TIL
群，所述第三
TIL
群为治疗性
TIL
群，所述第二次扩增在提供第二透气表面区域的密闭容器中进行，并且自步骤
d)
至步骤
e)
的转变在不打开系统的情况下发生，所述第二细胞培养基包含
IL
‑
2、OKT
‑
3、
抗原呈递细胞
(APC)
和可选的第二抗生素组分；
f)
收集自步骤
e)
获得的治疗性
TIL
群，其中自步骤
e)
至步骤
f)
的转变在不打开系统的情况下发生；以及
g)
将自步骤
f)
收集的治疗性
TIL
群转移至输注袋，其中自步骤
f)
至步骤
g)
的转移在不打开系统的情况下发生；其中所述第一抗生素组分和可选的第二抗生素组分包含：
i)
抗生素组合，所述抗生素组合选自
1)
庆大霉素和万古霉素，以及
2)
庆大霉素和克林霉素；或者
ii)
万古霉素作为抗生素
。138.
如权利要求
137
所述的方法，其中，在步骤
d)
之前，所述方法还包括以下步骤：
(i)
在包含
IL
‑2和可选的所述第一培养基中的第一抗生素组分的培养基中培养第一
TIL
群，获得自多个肿瘤碎片释放的
TIL
，
(ii)
将步骤
(i)
中至少多个自多个肿瘤碎片释放的
TIL
与多个肿瘤碎片分离，获得多个肿瘤碎片
、
残留在多个肿瘤碎片中的
TIL
和自多个肿瘤碎片释放并在所述分离之后保留在其中的任何
TIL
的混合物，以及
(iii)
可选地，消化多个肿瘤碎片
、
残留在多个肿瘤碎片中的
TIL
和自多个肿瘤碎片释放并在所述分离之后保留在其中的任何
TIL
的混合物，产生所述混合物的消化物；并且在步骤
d)
中，所述混合物或混合物的消化物在第一细胞培养基中培养，获得所述第二
TIL
群
。139.
如权利要求
137
所述的方法，其中，在步骤
d)
中进行的第一次扩增包括：
(i)
在第一细胞培养基中培养第一
TIL
群约3‑
14
天，获得自肿瘤碎片释放的
TIL
，
(ii)
将步骤
(i)
中至少多个自肿瘤碎片释放的
TIL
与肿瘤碎片分离，获得第二
TIL
群，所述第二
TIL
群为肿瘤碎片
、
残留在肿瘤碎片中的
TIL
和自肿瘤碎片释放并在所述分离之后保
留在其中的任何
TIL
的混合物形式，以及
(iii)
可选地，消化肿瘤碎片
、
残留在肿瘤碎片中的
TIL
和自肿瘤碎片释放并在所述分离之后保留在其中的任何
TIL
的混合物，产生所述混合物的消化物；并且在步骤
e)
中，所述第二次扩增通过在第二培养基中扩增呈混合物或混合物的消化物形式的第二
TIL
群约7‑
14
天来进行，由此产生第三
TIL
群
。140.
一种用于将肿瘤浸润淋巴细胞
(TIL)
扩增成治疗性
TIL
群的方法，其包括：
a)
提供第一
TIL
群，所述第一
TIL
群由手术切除
、
穿刺活体组织切片
、
粗针活体组织切片
、
小型活体组织切片或用于自受试者获得包含肿瘤和
TIL
的第一混合物的样本的其他方式获得；
b)
在第一细胞培养基中进行第一
TIL
群的初始第一次扩增，获得第二
TIL
群，其中，所述第一细胞培养基包含
IL
‑
2、
可选的
OKT
‑
3(
抗
CD3
抗体
)、
可选的抗原呈递细胞
(APC)
和第一抗生素组分，所述初始第一次扩增进行约1至7或8天的时间段，所述第二
TIL
群的数量大于第一
TIL
群的数量；
c)
在第二细胞培养基中进行第二
TIL
群的快速第二次扩增，获得治疗性
TIL
群，其中所述第二细胞培养基包含
IL
‑
2、OKT
‑
3、
可选的第二抗生素组分和
APC
；所述快速扩增进行约1至
11
天的时间段；以及
d)
收集治疗性
TIL
群；其中，所述第一培养基中的第一抗生素组分和所述第二培养基中的可选的第二抗生素组分包含：
i)
抗生素组合，所述抗生素组合选自
1)
庆大霉素和万古霉素，以及
2)
庆大霉素和克林霉素；或者
ii)
万古霉素作为抗生素
。141.
如权利要求
140
所述的方法，其中，所述快速第二次扩增进行约1天
、2
天
、3
天
、4
天
、5
天
、6
天
、7
天
、8
天
、9
天或
10
天的时间段
。142.
如权利要求
140
所述的方法，其中，在步骤
b)
中，所述第一细胞培养基还包含
APC
，并且步骤
c)
中的第二培养基中
APC
的数量大于步骤
b)
中的第一培养基中
APC
的数量
。143.
如权利要求
140
所述的方法，其中，在步骤
b)
之前，所述方法还包括以下步骤：
(i)
在包含
IL
‑2和可选的第一抗生素组分的培养基中培养第一
TIL
群，获得自所述样本释放的
TIL
，
(ii)
将步骤
(i)
中至少多个自样本释放的
TIL
与样本分离，获得样本
、
残留在样本中的
TIL
和自样本释放并在所述分离之后保留在其中的任何
TIL
的第二混合物，以及
(iii)
可选地，消化所述样本
、
残留在所述样本中的
TIL
和自所述样本释放并在所述分离之后保留在其中的任何
TIL
的第二混合物，产生所述第二混合物的消化物；并且其中，步骤
b)
包括在第一细胞培养基中对呈第二混合物或第二混合物的消化物形式的第一
TIL
群进行初始第一次扩增，获得所述第二
TIL
群
。144.
如权利要求
140
所述的方法，其中，步骤
a)
包括通过自受试者的肿瘤中切除样本并将所述样本处理成含有来自所述受试者的肿瘤和
TIL
的混合物的多个肿瘤碎片，来提供第一
TIL
群
。145.
如权利要求
144
所述的方法，其中，在步骤
b)
之前，所述方法还包括如下步骤：
(i)
在包含
IL
‑2和可选的所述第一培养基中的第一抗生素组分的培养基中培养第一
TIL
群，获得自多个肿瘤碎片释放的
TIL
，
(ii)
将步骤
(i)
中至少多个自样本释放的
TIL
与肿瘤碎片分离，获得样本
、
残留在多个肿瘤碎片中的
TIL
和自多个肿瘤碎片释放并在所述分离之后保留在其中的任何
TIL
的第二混合物，以及
(iii)
可选地，消化多个肿瘤碎片
、
残留在多个肿瘤碎片中的
TIL
和自多个肿瘤碎片释放并在所述分离之后保留在其中的任何
TIL
的第二混合物，产生所述第二混合物的消化物；并且其中，步骤
b)
包括在第一细胞培养基中对呈第二混合物或第二混合物的消化物形式的第一
TIL
群进行初始第一次扩增，获得第二
TIL
群
。146.
一种扩增肿瘤浸润淋巴细胞
(TIL)
的方法，其包括：
a)
通过在包含第一抗生素组分的第一培养基中培养第一
TIL
群以实现第一
TIL
群的生长并启动其活化，来进行第一
TIL
群的初始第一次扩增，所述第一
TIL
群由手术切除
、
穿刺活体组织切片
、
粗针活体组织切片
、
小型活体组织切片或用于自受试者获得包含肿瘤和
TIL
的混合物的样本的其他方式获得；
b)
在步骤
a)
中启动的第一
TIL
群的活化开始衰退之后，通过在可选地包含第二抗生素组分的第二培养基中培养第一
...

【专利技术属性】
技术研发人员：K，
申请(专利权)人：艾欧凡斯生物治疗公司，
类型：发明
国别省市：