【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于产生肿瘤浸润性淋巴细胞的方法及其在免疫疗法中的用途相关申请的交叉引用本申请要求2018年11月5日提交的美国临时专利申请号62/775,954和2019年9月20日提交的美国临时专利申请号62/903,585的优先权，所述临时专利申请均特此以引用的方式整体并入。
技术介绍
使用过继性转移肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)治疗大型(bulky)、难治疗性癌症对于预后不良患者代表一种强大的治疗方法。Gattinoni,等人,Nat.Rev.Immunol.2006,6,383-393。成功免疫疗法需要大量的TIL，而商业化需要稳健且可靠的方法。由于细胞扩增的技术、后勤和法规问题，要实现这一点是一项挑战。基于IL-2的TIL扩增和随后的“快速扩增过程(REP)”已因其速度和效率而成为TIL扩增的优选方法。Dudley,等人,Science2002,298,850-54；Dudley,等人,J.Clin.Oncol.2005,23,2346-57；Dudley,等人,J.Clin.Oncol.2008,26,5233-39；Riddell,等人,Science1992,257,238-41；Dudley,等人,J.Immunother.2003,26,332-42。REP可在14天时间段内产生1,000倍的TIL扩增，尽管其需要大量过量(例如，200倍)的经照射的通常来自多个供体的同种异体外周血单核细胞(PBMC，也称为单核细胞(MNC))作为饲养细胞，还需要抗CD3抗体(OKT3)和高剂量的IL-2。Dudley,等人,J.Imm...
【技术保护点】
1.一种用于将肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)扩增成治疗性TIL群体的方法，所述方法包括：/n(a)通过将获自受试者的肿瘤样品加工成多个肿瘤片段而获得和/或接受来自从所述受试者切除的肿瘤的第一TIL群体；/n(b)通过在包含IL-2、任选地OKT-3和任选地抗原呈递细胞(APC)的细胞培养基中培养所述第一TIL群体来进行引发性第一扩增以产生第二TIL群体，其中所述引发性第一扩增在包括第一气体可渗透表面区域的容器中进行，其中所述引发性第一扩增进行约1至7/8天的第一时间段以获得所述第二TIL群体，其中所述第二TIL群体在数量上大于所述第一TIL群体；/n(c)通过用额外的IL-2、OKT-3和APC补充所述第二TIL群体的所述细胞培养基来进行快速第二扩增以产生第三TIL群体，其中在所述快速第二扩增中添加的APC数量是步骤(b)中添加的APC数量的至少两倍，其中所述快速第二扩增进行约1至11天的第二时间段以获得所述第三TIL群体，其中所述第三TIL群体是治疗性TIL群体，其中所述快速第二扩增在包括第二气体可渗透表面区域的容器中进行；/n(d)收获获自步骤(c)的所述治疗性TIL群体；以及/n(...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20181105 US 62/755,954;20190920 US 62/903,5851.一种用于将肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)扩增成治疗性TIL群体的方法，所述方法包括：
(a)通过将获自受试者的肿瘤样品加工成多个肿瘤片段而获得和/或接受来自从所述受试者切除的肿瘤的第一TIL群体；
(b)通过在包含IL-2、任选地OKT-3和任选地抗原呈递细胞(APC)的细胞培养基中培养所述第一TIL群体来进行引发性第一扩增以产生第二TIL群体，其中所述引发性第一扩增在包括第一气体可渗透表面区域的容器中进行，其中所述引发性第一扩增进行约1至7/8天的第一时间段以获得所述第二TIL群体，其中所述第二TIL群体在数量上大于所述第一TIL群体；
(c)通过用额外的IL-2、OKT-3和APC补充所述第二TIL群体的所述细胞培养基来进行快速第二扩增以产生第三TIL群体，其中在所述快速第二扩增中添加的APC数量是步骤(b)中添加的APC数量的至少两倍，其中所述快速第二扩增进行约1至11天的第二时间段以获得所述第三TIL群体，其中所述第三TIL群体是治疗性TIL群体，其中所述快速第二扩增在包括第二气体可渗透表面区域的容器中进行；
(d)收获获自步骤(c)的所述治疗性TIL群体；以及
(e)将来自步骤(d)的经收获的TIL群体转移至输注袋。
2.一种用于将肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)扩增成治疗性TIL群体的方法，所述方法包括：
(a)通过将获自受试者的肿瘤样品加工成多个肿瘤片段而获得和/或接受来自从所述受试者切除的肿瘤的第一TIL群体；
(b)通过在包含IL-2、任选地OKT-3且任选地包含抗原呈递细胞(APC)的细胞培养基中培养所述第一TIL群体来进行引发性第一扩增以产生第二TIL群体，其中所述引发性第一扩增进行约1至7/8天的第一时间段以获得所述第二TIL群体，其中所述第二TIL群体在数量上大于所述第一TIL群体；
(c)通过使所述第二TIL群体与包含IL-2、OKT-3和APC的细胞培养基接触来进行快速第二扩增以产生第三TIL群体，其中所述快速第二扩增进行约1至11天的第二时间段以获得所述第三TIL群体，其中所述第三TIL群体是治疗性TIL群体；以及
(d)收获获自步骤(c)的所述治疗性TIL群体。
3.根据权利要求2所述的方法，其中在步骤(b)中，所述细胞培养基还包含抗原呈递细胞(APC)，并且其中步骤(c)的所述培养基中的APC数量大于步骤(b)的培养基中的APC数量。
4.一种用于将肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)扩增成治疗性TIL群体的方法，所述方法包括：
(a)通过在包含IL-2、任选地OKT-3和任选地抗原呈递细胞(APC)的细胞培养基中培养第一TIL群体来进行引发性第一扩增以产生第二TIL群体，所述第一TIL群体可通过将来自从受试者切除的肿瘤的肿瘤样品加工成多个肿瘤片段而获得，其中所述引发性第一扩增在包括第一气体可渗透表面区域的容器中进行，其中所述引发性第一扩增进行约1至7/8天的第一时间段以获得所述第二TIL群体，其中所述第二TIL群体在数量上大于所述第一TIL群体；
(b)通过使所述第二TIL群体与含有额外的IL-2、OKT-3和APC的所述第二TIL群体的细胞培养基接触来进行快速第二扩增以产生第三TIL群体，其中在所述快速第二扩增中的APC数量是步骤(a)中的APC数量的至少两倍，其中所述快速第二扩增进行约1至11天的第二时间段以获得所述第三TIL群体，其中所述第三TIL群体是治疗性TIL群体，其中所述快速第二扩增在包括第二气体可渗透表面区域的容器中进行；以及
(c)收获获自步骤(b)的所述治疗性TIL群体。
5.一种用于将肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)扩增成治疗性TIL群体的方法，所述方法包括：
(a)通过在包含IL-2、任选地OKT-3且任选地包含抗原呈递细胞(APC)的细胞培养基中培养所述第一TIL群体来进行引发性第一扩增以产生第二TIL群体，其中所述引发性第一扩增进行约1至7/8天的第一时间段以获得所述第二TIL群体，其中所述第二TIL群体在数量上大于所述第一TIL群体；
(b)通过使所述第二TIL群体与包含IL-2、OKT-3和APC的细胞培养基接触来进行快速第二扩增以产生第三TIL群体，其中所述快速第二扩增进行约1至11天的第二时间段以获得所述第三TIL群体，其中所述第三TIL群体是治疗性TIL群体；以及
(c)收获获自步骤(b)的所述治疗性TIL群体。
6.根据权利要求5的方法，其中在步骤(a)中，所述细胞培养基还包含抗原呈递细胞(APC)，并且其中步骤(c)的所述培养基中的APC数量大于步骤(b)的所述培养基中的APC数量。
7.根据权利要求1或3或6所述的方法，其中所述快速第二扩增中的APC数量与所述引发性第一扩增中的APC数量的比例在约1.5:1至约20:1的范围内。
8.根据权利要求7所述的方法，其中所述快速第二扩增中的APC数量与所述引发性第一扩增中的APC数量的比例在约1.5:1至约10:1的范围内。
9.根据权利要求1或3或6所述的方法，其中所述快速第二扩增中的APC数量与所述引发性第一扩增中的APC数量的比例在约2:1至约5:1的范围内。
10.根据权利要求1或3或6所述的方法，其中所述快速第二扩增中的APC数量与所述引发性第一扩增中的APC数量的比例在约2:1至约3:1的范围内。
11.根据权利要求1或3或6所述的方法，其中所述快速第二扩增中的APC数量与所述引发性第一扩增中的APC数量的比例是约2:1。
12.根据权利要求1或3或6所述的方法，其中所述引发性第一扩增中的APC数量在约1.0×106个APC/cm2至约4.5×106个APC/cm2的范围内，并且其中所述快速第二扩增中的APC数量在约2.5×106个APC/cm2至约7.5×106个APC/cm2的范围内。
13.根据权利要求1或3或6所述的方法，其中所述引发性第一扩增中的APC数量在约1.5×106个APC/cm2至约3.5×106个APC/cm2的范围内，并且其中所述快速第二扩增中的APC数量在约3.5×106个APC/cm2至约6.0×106个APC/cm2的范围内。
14.根据权利要求1或3或6所述的方法，其中所述引发性第一扩增中的APC数量在约2.0×106个APC/cm2至约3.0×106个APC/cm2的范围内，并且其中所述快速第二扩增中的APC数量在约4.0×106个APC/cm2至约5.5×106个APC/cm2的范围内。
15.根据权利要求1或3或6所述的方法，其中所述引发性第一扩增中的APC数量在约1×108个APC至约3.5×108个APC的范围内，并且其中所述快速第二扩增中的APC数量在约3.5×108个APC至约1×109个APC的范围内。
16.根据权利要求1或3或6所述的方法，其中所述引发性第一扩增中的APC数量在约1.5×108个APC至约3×108个APC的范围内，并且其中所述快速第二扩增中的APC数量在约4×108个APC至约7.5×108个APC的范围内。
17.根据权利要求1或3或6所述的方法，其中所述引发性第一扩增中的APC数量在约2×108个APC至约2.5×108个APC的范围内，并且其中所述快速第二扩增中的APC数量在约4.5×108个APC至约5.5×108个APC的范围内。
18.根据权利要求1或3或6所述的方法，其中将约2.5×108个APC添加至所述引发性第一扩增且将5×108个APC添加至所述快速第二扩增。
19.根据权利要求1至18中任一项所述的方法，其中所述第二TIL群体中的TIL数量与所述第一TIL群体中的TIL数量的比例是约1.5:1至约100:1。
20.根据权利要求1至18中任一项所述的方法，其中所述第二TIL群体中的TIL数量与所述第一TIL群体中的TIL数量的比例是约50:1。
21.根据权利要求1至18中任一项所述的方法，其中所述第二TIL群体中的TIL数量与所述第一TIL群体中的TIL数量的比例是约25:1。
22.根据权利要求1至15中任一项所述的方法，其中所述第二TIL群体中的TIL数量与所述第一TIL群体中的TIL数量的比例是约20:1。
23.根据权利要求1至15中任一项所述的方法，其中所述第二TIL群体中的TIL数量与所述第一TIL群体中的TIL数量的比例是约10:1。
24.根据权利要求1至18中任一项所述的方法，其中所述第二TIL群体在数量上是所述第一TIL群体的至少50倍。
25.根据权利要求2至6中任一项所述的方法，其中所述方法包括在收获所述治疗性TIL群体的步骤之后，进行以下额外步骤：
将经收获的治疗性TIL群体转移至输注袋。
26.根据权利要求2至25中任一项所述的方法，其中所述多个肿瘤片段分布于多个分开的容器中，在所述分开的容器中的每一个中，所述第二TIL群体获自所述引发性第一扩增步骤中的所述第一TIL群体，并且所述第三TIL群体获自所述快速第二扩增步骤中的所述第二TIL群体，并且其中获自所述第三TIL群体的所述治疗性TIL群体从所述多个容器中的每一个收集且合并以产生经收获的TIL群体。
27.根据权利要求26所述的方法，其中所述多个分开的容器包括至少两个分开的容器。
28.根据权利要求26所述的方法，其中所述多个分开的容器包括二至二十个分开的容器。
29.根据权利要求26所述的方法，其中所述多个分开的容器包括二至十个分开的容器。
30.根据权利要求26所述的方法，其中所述多个分开的容器包括二至五个分开的容器。
31.根据权利要求26至30中任一项所述的方法，其中所述分开的容器中的每一个包括第一气体可渗透表面区域。
32.根据权利要求2至25中任一项所述的方法，其中所述多个肿瘤片段分布于单一容器中。
33.根据权利要求32所述的方法，其中所述单一容器包括第一气体可渗透表面区域。
34.根据权利要求31或33所述的方法，其中在所述引发性第一扩增步骤中，所述细胞培养基包含抗原呈递细胞(APC)，并且所述APC以约一个细胞层至约三个细胞层的平均厚度层叠在所述第一气体可渗透表面区域上。
35.根据权利要求33所述的方法，其中在所述引发性第一扩增步骤中，所述APC以约1.5个细胞层至约2.5个细胞层的平均厚度层叠在所述第一气体可渗透表面区域上。
36.根据权利要求33所述的方法，其中在所述引发性第一扩增步骤中，所述APC以约2个细胞层的平均厚度层叠在所述第一气体可渗透表面区域上。
37.根据权利要求34至36中任一项所述的方法，其中在所述快速第二扩增步骤中，所述APC以约3个细胞层至约5个细胞层的厚度层叠在所述第一气体可渗透表面区域上。
38.根据权利要求37所述的方法，其中在所述快速第二扩增步骤中，所述APC以约3.5个细胞层至约4.5个细胞层的厚度层叠在所述第一气体可渗透表面区域上。
39.根据权利要求38所述的方法，其中在所述快速第二扩增步骤中，所述APC以约4个细胞层的厚度层叠在所述第一气体可渗透表面区域上。
40.根据权利要求2至25中任一项所述的方法，其中在所述引发性第一扩增步骤中，所述引发性第一扩增在包括第一气体可渗透表面区域的第一容器中进行，并且在所述快速第二扩增步骤中，所述快速第二扩增在包括第二气体可渗透表面区域的第二容器中进行。
41.根据权利要求40所述的方法，其中所述第二容器大于所述第一容器。
42.根据权利要求40或41所述的方法，其中在所述引发性第一扩增步骤中，所述细胞培养基包含抗原呈递细胞(APC)，并且所述APC以约一个细胞层至约三个细胞层的平均厚度层叠在所述第一气体可渗透表面区域上。
43.根据权利要求41所述的方法，其中在所述引发性第一扩增步骤中，所述APC以约1.5个细胞层至约2.5个细胞层的平均厚度层叠在所述第一气体可渗透表面区域上。
44.根据权利要求43所述的方法，其中在所述引发性第一扩增步骤中，所述APC以约2个细胞层的平均厚度层叠在所述第一气体可渗透表面区域上。
45.根据权利要求40至44中任一项所述的方法，其中在所述快速第二扩增步骤中，所述APC以约3个细胞层至约5个细胞层的平均厚度层叠在所述第二气体可渗透表面区域上。
46.根据权利要求45所述的方法，其中在所述快速第二扩增步骤中，所述APC以约3.5个细胞层至约4.5个细胞层的平均厚度层叠在所述第二气体可渗透表面区域上。
47.根据权利要求45所述的方法，其中在所述快速第二扩增步骤中，所述APC以约4个细胞层的平均厚度层叠在所述第二气体可渗透表面区域上。
48.根据权利要求2至39中任一项所述的方法，其中对于对第一TIL群体进行所述引发性第一扩增所处的每个容器，在相同容器中对由此类第一TIL群体产生的所述第二TIL群体进行所述快速第二扩增。
49.根据权利要求48所述的方法，其中每个容器包括第一气体可渗透表面区域。
50.根据权利要求49所述的方法，其中在所述引发性第一扩增步骤中，所述细胞培养基包含抗原呈递细胞(APC)，并且所述APC以约一个细胞层至约三个细胞层的平均厚度层叠在所述第一气体可渗透表面区域上。
51.根据权利要求50所述的方法，其中在所述引发性第一扩增步骤中，所述APC以约1.5个细胞层至约2.5个细胞层的平均厚度层叠在所述第一气体可渗透表面区域上。
52.根据权利要求51所述的方法，其中在所述引发性第一扩增步骤中，所述APC以约2个细胞层的平均厚度层叠在所述第一气体可渗透表面区域上。
53.根据权利要求49至52中任一项所述的方法，其中在所述快速第二扩增步骤中，所述APC以约3个细胞层至约5个细胞层的平均厚度层叠在所述第一气体可渗透表面区域上。
54.根据权利要求53所述的方法，其中在所述快速第二扩增步骤中，所述APC以约3.5个细胞层至约4.5个细胞层的平均厚度层叠在所述第一气体可渗透表面区域上。
55.根据权利要求54所述的方法，其中在所述快速第二扩增步骤中，所述APC以约4个细胞层的平均厚度层叠在所述第一气体可渗透表面区域上。
56.根据权利要求2至32、40、41和48中任一项所述的方法，其中对于对第一TIL群体进行所述引发性第一扩增所处的每个容器，在所述引发性第一扩增步骤中，所述第一容器包括第一表面区域，所述细胞培养基包含抗原呈递细胞(APC)，并且所述APC层叠在所述第一气体可渗透表面区域上，并且其中所述引发性第一扩增步骤中所层叠的APC平均层数与所述快速第二扩增步骤中所层叠的APC平均层数的比例在约1:1.1至约1:10的范围内。
57.根据权利要求56所述的方法，其中所述引发性第一扩增步骤中所层叠的APC平均层数与所述快速第二扩增步骤中所层叠的APC平均层数的比例在约1:1.2至约1:8的范围内。
58.根据权利要求56所述的方法，其中所述引发性第一扩增步骤中所层叠的APC平均层数与所述快速第二扩增步骤中所层叠的APC平均层数的比例在约1:1.3至约1:7的范围内。
59.根据权利要求56所述的方法，其中所述引发性第一扩增步骤中所层叠的APC平均层数与所述快速第二扩增步骤中所层叠的APC平均层数的比例在约1:1.4至约1:6的范围内。
60.根据权利要求56所述的方法，其中所述引发性第一扩增步骤中所层叠的APC平均层数与所述快速第二扩增步骤中所层叠的APC平均层数的比例在约1:1.5至约1:5的范围内。
61.根据权利要求56所述的方法，其中所述引发性第一扩增步骤中所层叠的APC平均层数与所述快速第二扩增步骤中所层叠的APC平均层数的比例在约1:1.6至约1:4的范围内。
62.根据权利要求56所述的方法，其中所述引发性第一扩增步骤中所层叠的APC平均层数与所述快速第二扩增步骤中所层叠的APC平均层数的比例在约1:1.7至约1:3.5的范围内。
63.根据权利要求56所述的方法，其中所述引发性第一扩增步骤中所层叠的APC平均层数与所述快速第二扩增步骤中所层叠的APC平均层数的比例在约1:1.8至约1:3的范围内。
64.根据权利要求56所述的方法，其中所述引发性第一扩增步骤中所层叠的APC平均层数与所述快速第二扩增步骤中所层叠的APC平均层数的比例在约1:1.9至约1:2.5的范围内。
65.根据权利要求56所述的方法，其中所述引发性第一扩增步骤中所层叠的APC平均层数与所述快速第二扩增步骤中所层叠的APC平均层数的比例是约1:2。
66.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在所述快速第二扩增步骤中2至3天之后，将所述细胞培养基补充额外的IL-2。
67.根据前述权利要求中任一项所述的方法，所述方法还包括使用冷冻保存过程冷冻保存在收获所述治疗性TIL群体的步骤中的经收获的TIL群体。
68.根据权利要求1或25所述的方法，所述方法还包括冷冻保存所述输注袋的步骤。
69.根据权利要求67或68所述的方法，其中所述冷冻保存过程使用1:1比例的经收获的TIL群体与冷冻保存培养基进行。
70.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述抗原呈递细胞是外周血单核细胞(PBMC)。
71.根据权利要求70所述的方法，其中所述PBMC经照射且为同种异体的。
72.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在所述引发性第一扩增步骤中，所述细胞培养基包含外周血单核细胞(PBMC)，并且其中在所述引发性第一扩增步骤中添加至所述细胞培养基的PBMC总数是约2.5×108个。
73.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在所述快速第二扩增步骤中，所述细胞培养基中的所述抗原呈递细胞(APC)是外周血单核细胞(PBMC)，并且其中在所述快速第二扩增步骤中添加至所述细胞培养基的PBMC总数是约5×108个。
74.根据权利要求1至66中任一项所述的方法，其中所述抗原呈递细胞是人工抗原呈递细胞。
75.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在收获所述治疗性TIL群体步骤中的所述收获是使用基于膜的细胞加工系统进行的。
76.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在收获所述治疗性TIL群体步骤中的所述收获是使用LOVO细胞加工系统进行的。
77.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在所述引发性第一扩增步骤中所述多个片段包括每容器约60个片段，其中每个片段具有约27mm3的体积。
78.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述多个片段包括约30至约60个片段，其总体积为约1300mm3至约1500mm3。
79.根据权利要求78所述的方法，其中所述多个片段包括约50个片段，其总体积为约1350mm3。
80.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述多个片段包括约50个片段，其总质量为约1克至约1.5克。
81.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述细胞培养基提供于选自由G容器和Xuri细胞袋组成的组的容器中。
82.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中IL-2浓度是约10,000IU/mL至约5,000IU/mL。
83.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中IL-2浓度是约6,000IU/mL。
84.根据权利要求1或25所述的方法，其中在将经收获的治疗性TIL群体转移至输注袋的步骤中，所述输注袋是含有HypoThermosol的输注袋。
85.根据权利要求67至69中任一项所述的方法，其中所述冷冻保存培养基包含二甲亚砜(DMSO)。
86.根据权利要求85所述的方法，其中所述冷冻保存培养基包含7％至10％DMSO。
87.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述引发性第一扩增步骤的所述第一时间段和所述快速第二扩增步骤的所述第二时间段各自单独地在5天、6天或7天的时间段内进行。
88.根据权利要求1至86中任一项所述的方法，其中所述引发性第一扩增步骤的所述第一时间段在5天、6天或7天的时间段内进行。
89.根据权利要求1至86中任一项所述的方法，其中所述快速第二扩增步骤的所述第二时间段在7天、8天或9天的时间段内进行。
90.根据权利要求1至86中任一项所述的方法，其中所述引发性第一扩增步骤的所述第一时间段和所述快速第二扩增步骤的所述第二时间段各自单独地在7天的时间段内进行。
91.根据权利要求1至86中任一项所述的方法，其中所述引发性第一扩增至所述收获所述治疗性TIL群体的步骤在约14天至约16天的时间段内进行。
92.根据权利要求1至86中任一项所述的方法，其中所述引发性第一扩增至所述收获所述治疗性TIL群体的步骤在约15天至约16天的时间段内进行。
93.根据权利要求1至86中任一项所述的方法，其中所述引发性第一扩增至所述收获所述治疗性TIL群体的步骤在约14天的时间段内进行。
94.根据权利要求1至86中任一项所述的方法，其中所述引发性第一扩增至所述收获所述治疗性TIL群体的步骤在约15天的时间段内进行。
95.根据权利要求1至86中任一项所述的方法，其中所述引发性第一扩增至所述收获所述治疗性TIL群体的步骤在约16天的时间段内进行。
96.根据权利要求1至86中任一项所述的方法，所述方法还包括使用冷冻保存过程冷冻保存经收获的治疗性TIL群体的步骤，其中所述引发性第一扩增至所述收获所述治疗性TIL群体和冷冻保存的步骤在16天或少于16天内进行。
97.根据权利要求1至93中任一项所述的方法，其中收获所述治疗性TIL群体的步骤中所收获的所述治疗性TIL群体包含对治疗有效剂量的所述TIL而言足够的TIL。
98.根据权利要求97所述的方法，其中对治疗有效剂量而言足够的TIL数量是约2.3×1010至约13.7×1010个。
99.根据权利要求1至98中任一项所述的方法，其中所述快速第二扩增步骤中的所述第三TIL群体提供增加的功效、增加的干扰素-γ产生和/或增加的多克隆性。
100.根据权利要求1至98中任一项所述的方法，其中所述快速第二扩增步骤中的所述第三TIL群体相较于通过长于18天的过程所制备的TIL提供至少1倍至5倍或更多倍的干扰素-γ产生。
101.根据权利要求1至98中任一项所述的方法，其中获自所述快速第二扩增步骤中的所述第三TIL群体的效应T细胞和/或中央记忆T细胞相对于获自所述引发性第一扩增步骤中的所述第二TIL群体的效应T细胞和/或中央记忆T细胞展现增加的CD8和CD28表达。
102.根据权利要求1至101中任一项所述的方法，其中将来自所述收获所述治疗性TIL群体的步骤的所述治疗性TIL群体输注至患者。
103.一种用于治疗患有癌症的受试者的方法，所述方法包括施用经扩增的肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)，所述方法包括：
(a)通过将获自受试者的肿瘤样品加工成多个肿瘤片段而获得和/或接受来自从所述受试者切除的肿瘤的第一TIL群体；
(b)通过在包含IL-2、任选地OKT-3和任选地抗原呈递细胞(APC)的细胞培养基中培养所述第一TIL群体来进行引发性第一扩增以产生第二TIL群体，其中所述引发性第一扩增在包括第一气体可渗透表面区域的容器中进行，其中所述引发性第一扩增进行约1至7/8天以获得所述第二TIL群体，其中所述第二TIL群体在数量上是所述第一TIL群体的至少50倍；
(c)通过用额外的IL-2、OKT-3和APC补充所述第二TIL群体的所述细胞培养基来进行快速第二扩增以产生第三TIL群体，其中向所述快速第二扩增添加的APC数量是步骤(b)中添加的APC数量的至少两倍，其中所述快速第二扩增进行约1至11天以获得所述第三TIL群体，其中所述第三TIL群体是治疗性TIL群体，其中所述快速第二扩增在包括第二气体可渗透表面区域的容器中进行；
(d)收获获自步骤(c)的所述治疗性TIL群体；
(e)将来自步骤(d)的经收获的TIL群体转移至输注袋；以及
(f)将治疗有效剂量的来自步骤(e)的所述TIL施用至所述受试者。
104.根据权利要求103所述的方法，其中对步骤(f)中施用治疗有效剂量而言足够的TIL数量是约2.3×1010至约13.7×1010个。
105.根据权利要求103所述的方法，其中所述抗原呈递细胞(APC)是PBMC。
106.根据权利要求103至105中任一项所述的方法，其中在步骤(f)中施用治疗有效剂量的TIL细胞之前，已向所述患者施用了非清髓性淋巴细胞耗尽方案。
107.根据权利要求106所述的方法，其中所述非清髓性淋巴细胞耗尽方案包括施用剂量为60mg/m2/天的环磷酰胺持续两天、随后施用剂量为25mg/m2/天的氟达拉滨持续五天的步骤。
108.根据权利要求103至107中任一项所述的方法，所述方法还包括始于步骤(f)中将所述TIL细胞施用至所述患者之后当天使用高剂量IL-2方案治疗所述患者的步骤。
109.根据权利要求108所述的方法，其中所述高剂量IL-2方案包括每八小时以15分钟静脉推注施用600,000或720,000IU/kg直到耐受为止。
110.根据权利要求103至109中任一项所述的方法，其中步骤(b)中的所述第三TIL群体提供增加的功效、增加的干扰素-γ产生和/或增加的多克隆性。
111.根据权利要求103至109中任一项所述的方法，其中步骤(c)中的所述第三TIL群体相较于通过长于16天的过程所制备的TIL提供至少1倍至5倍或更多倍的干扰素-γ产生。
112.根据权利要求103至109中任一项所述的方法，其中获自步骤(c)中的所述第三TIL群体的效应T细胞和/或中央记忆T细胞相对于获自步骤(b)中的所述第二细胞群体的效应T细胞和/或中央记忆T细胞展现增加的CD8和CD28表达。
113.根据权利要求103至112中任一项所述的方法，其中所述癌症是实体瘤。
114.根据权利要求103至112中任一项所述的方法，其中所述癌症选自由以下组成的组：黑色素瘤、卵巢癌、宫颈癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、肺癌、膀胱癌、乳腺癌、由人乳突瘤病毒引起的癌症、头颈癌(包括头颈鳞状细胞癌(HNSCC))、成胶质细胞瘤(包括GBM)、胃肠癌、肾癌和肾细胞癌。
115.根据权利要求114所述的方法，其中所述癌症选自由以下组成的组：黑色素瘤、HNSCC、宫颈癌、NSCLC、成胶质细胞瘤(包括GBM)和胃肠癌。
116.根据权利要求115所述的方法，其中所述癌症是黑色素瘤。
117.根据权利要求115所述的方法，其中所述癌症是HNSCC。
118.根据权利要求115所述的方法，其中所述癌症是宫颈癌。
119.根据权利要求115所述的方法，其中所述癌症是NSCLC。
120.根据权利要求115所述的方法，其中所述癌症是成胶质细胞瘤(包括GBM)。
121.根据权利要求115所述的方法，其中所述癌症是胃肠癌。
122.根据权利要求103至121中任一项所述的方法，其中所述癌症是高突变癌症。
123.根据权利要求103至121中任一项所述的方法，其中所述癌症是小儿高突变癌症。
124.根据权利要求103至123中任一项所述的方法，其中所述容器是密闭容器。
125.根据权利要求103至124中任一项所述的方法，其中所述容器是G容器。
126.根据权利要求103至125中任一项所述的方法，其中所述容器是GREX-10。
127.根据权利要求103至125中任一项所述的方法，其中所述密闭容器包括GREX-100。
128.根据权利要求103至125中任一项所述的方法，其中所述密闭容器包括GREX-500。
129.治疗性肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)群体，其通过根据前述权利要求中任一项所述的方法制备。
130.一种由患者的肿瘤组织制备的治疗性肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)群体，其中所述治疗性TIL群体提供增加的功效、增加的干扰素-γ产生和/或增加的多克隆性。
131.根据权利要求129或权利要求130所述的治疗性TIL群体，所述治疗性TIL群体提供增加的干扰素-γ产生。
132.根据权利要求129或权利要求130所述的治疗性TIL群体，所述治疗性TIL群体提供增加的多克隆性。
133.根据权利要求129或权利要求130所述的治疗性TIL群体，所述治疗性TIL群体提供增加的功效。
134.根据权利要求129至133中任一项所述的治疗性TIL群体，其中所述治疗性TIL群体相较于通过长于16天的过程所制备的TIL能够产生多至少1倍的干扰素-γ。
135.根据权利要求129至133中任一项所述的治疗性TIL群体，其中所述治疗性TIL群体相较于通过长于16天的过程所制备的TIL能够产生多至少2倍的干扰素-γ。
136.根据权利要求129至133中任一项所述的治疗性TIL群体，其中所述治疗性TIL群体相较于通过长于16天的过程所制备的TIL能够产生多至少3倍的干扰素-γ。
137.一种治疗性肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)群体，其中所述治疗性TIL群体相较于通过其中TIL的第一扩增是在无任何添加的抗原呈递细胞(APC)下进行的过程所制备的TIL能够产生多至少1倍的干扰素-γ。
138.根据权利要求137所述的治疗性TIL群体，其中所述治疗性TIL群体相较于通过其中TIL的第一扩增是在无任何添加的APC下进行的过程所制备的TIL能够产生多至少2倍的干扰素-γ。
139.根据权利要求138所述的治疗性TIL群体，其中所述治疗性TIL群体相较于通过其中TIL的第一扩增是在无任何添加的APC下进行的过程所制备的TIL能够产生多至少3倍的干扰素-γ。
140.一种治疗性肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)群体，其中所述治疗性TIL群体相较于通过其中TIL的第一扩增是在无任何添加的OKT3下进行的过程所制备的TIL能够产生多至少1倍的干扰素-γ。
141.根据权利要求140所述的治疗性TIL群体，其中所述治疗性TIL群体相较于通过其中TIL的第一扩增是在无任何添加的OKT3下进行的过程所制备的TIL能够产生多至少2倍的干扰素-γ。
142.根据权利要求140所述的治疗性TIL群体，其中所述治疗性TIL群体相较于通过其中TIL的第一扩增是在无任何添加的OKT3下进行的过程所制备的TIL能够产生多至少3倍的干扰素-γ。
143.一种治疗性肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)群体，其中所述治疗性TIL群体相较于通过其中TIL的第一扩增是在无添加的抗原呈递细胞(APC)且无添加的OKT3下进行的过程所制备的TIL能够产生多至少1倍的干扰素-γ。
144.根据权利要求143所述的治疗性TIL群体，其中所述治疗性TIL群体相较于通过其中TIL的第一扩增是在无添加的抗原呈递细胞(APC)且无添加的OKT3下进行的过程所制备的TIL能够产生多至少2倍的干扰素-γ。
145.根据权利要求143所述的治疗性TIL群体，其中所述治疗性TIL群体相较于通过其中TIL的第一扩增是在无添加的抗原呈递细胞(APC)且无添加的OKT3下进行的过程所制备的TIL能够产生多至少3倍的干扰素-γ。
146.一种肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)组合物，所述组合物包含根据权利要求126至145中任一项所述的治疗性TIL群体和药学上可接受的载剂。
147.一种无菌输注袋，所述无菌输注袋包含根据权利要求143所述的TIL组合物。
148.一种根据权利要求129至142中任一项所述的治疗性TIL群体的经冷冻保存的制剂。
149.一种肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)组合物，所述组合物包含根据权利要求129至145中任一项所述的治疗性TIL群体和冷冻保存培养基。
150.根据权利要求149所述的TIL组合物，其中所述冷冻保存培养基含有DMSO。
151.根据权利要求150所述的TIL组...
【专利技术属性】
技术研发人员：S·沃德尔，M·L·莫雷诺，
申请(专利权)人：艾欧凡斯生物治疗公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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