由液体肿瘤扩增肿瘤浸润淋巴细胞及其治疗用途制造技术

本文公开了由血液恶性肿瘤(包括淋巴瘤和白血病)患者的血液扩增外周血淋巴细胞(PBL)、对扩增的PBL进行基因修饰以掺入嵌合抗原受体、对T细胞受体进行基因修饰和其他基因修饰的方法，以及此类扩增和/或修饰的PBL在治疗疾病(例如癌症和血液恶性肿瘤)中的用途。病(例如癌症和血液恶性肿瘤)中的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】由液体肿瘤扩增肿瘤浸润淋巴细胞及其治疗用途
相关申请的交叉引用
[0001]本申请要求于2019年3月1日提交的美国临时申请号62/812,900和2019年6月4日提交的美国临时申请号62/857,219的优先权，其各自通过引用整体并入本文。


[0002]本文公开了扩增外周血淋巴细胞(PBL)的方法和包含由此获得的PBL群的组合物，所述PBL源自血液恶性肿瘤(例如液体肿瘤，包括淋巴瘤和白血病)患者的血液和/或骨髓。此外，本文公开了由患者血液扩增的自体PBL在治疗血液恶性肿瘤中的治疗用途。

技术介绍

[0003]使用过继性自体转移的肿瘤浸润淋巴细胞(TIL，tumor infiltrating lymphocyte)治疗大体积、难治性的癌症代表了一种治疗预后不良患者的有效方法。Gattinoni等，Nat.Rev.I mmunol.，2006，6，383
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393。TIL以T细胞为主，由于其速度和效率，基于IL
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2的TIL扩增、随后进行―快速扩增过程”(REP，rapid expansion本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.由外周血扩增外周血淋巴细胞(PBL)的方法，其包括以下步骤：a.由患者的外周血获得外周血单核细胞(PBMC)的样品，可选地对所述样品进行冷冻保存，所述患者可选地经ITK抑制剂预治疗；b.可选地通过离心对PBMC进行洗涤；c.向PBMC中添加对CD3和CD28有选择性的磁性微珠；d.将PBMC接种至透气容器中，在包含约3000IU/mL IL
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2的培养基中共培养所述PBMC约4至约6天；e.使用包含约3000IU/mL IL
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2的培养基喂养所述PBMC，共培养所述PBMC约5天，使得步骤d和步骤e的共培养总时间为约9至约11天；f.从培养基中收获PBMC；g.使用磁铁除去对CD3和CD28有选择性的磁性微珠；h.使用磁性活化的细胞分选和CD19
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微珠除去残留B细胞，得到PBL产品；i.使用细胞收集器洗涤和浓缩PBL产品；以及j.配制和可选地冷冻保存PBL产品；其中，所述ITK抑制剂可选地为共价结合ITK的ITK抑制剂。2.根据权利要求1所述的方法，其中，在步骤a中，获得小于或等于约50mL的患者的外周血。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，在步骤a中，获得约10mL至约50mL的患者的外周血。4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中，在步骤d期间，PBMC相对于透气容器表面积的接种密度为约2
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105个细胞/cm2至约1.6
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103个细胞/cm2。5.由全血样品制备外周血淋巴细胞(PBL)的方法，其包括以下步骤：(a)由小于或等于约50mL的全血获得外周血单核细胞(PBMC)，所述全血来自具有液体肿瘤的患者，所述患者可选地经ITK抑制剂预治疗；(b)将对CD3和CD28有选择性的微珠与PBMC进行混合，以3微珠：1细胞的比率添加微珠，形成PBMC和微珠的混合物；(c)以约25,000个细胞/cm2至约50,000个细胞/cm2的密度，在一个以上含有第一细胞培养基和IL
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2的容器的透气表面上培养PBMC和微珠的混合物约4天的时间；(d)向步骤(c)的每个容器中加入IL
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2和第二细胞培养基，培养约5天至约7天的时间，形成扩增的PBL群，所述第二细胞培养基与所述第一细胞培养基相同或不同；以及(e)从每个容器中收获扩增的PBL群。6.根据权利要求5所述的方法，其中，在步骤(e)中，收获的细胞总数为约80亿至约220亿。7.根据权利要求5所述的方法，其中，在步骤(b)中，微珠和PBMC的混合物形成PBMC和微珠的复合物；在步骤(c)之前，所述方法包括从混合物中分离复合物的步骤；并且，步骤(c)由以下步骤代替：以约25,000个细胞/cm2至约50,000个细胞/cm2的密度，在一个以上含有第一细胞培养基和IL
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2的容器的透气表面上培养PBMC和微珠的复合物约4天的时间。8.根据权利要求7所述的方法，其中，在步骤(b)中，将对CD3和CD28有选择性的磁性微珠与PBMC进行混合；并且，从混合物中分离复合物的步骤通过使用磁...

【专利技术属性】
技术研发人员：L，
申请(专利权)人：艾欧凡斯生物治疗公司，
类型：发明
国别省市：