结合制造技术

本公开涉及特异性结合至肿瘤相关抗原

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】结合PSMA和CD3的异二聚体双特异性抗体
[0001]相关申请的交叉参考
[0002]本申请要求
2020
年
12
月1日提交的美国临时申请号
63/120,154、2020
年
12
月
22
日提交的美国临时申请号
63/129,372
和
2021
年3月
26
日提交的美国临时申请号
63/166,394
的权益，各案以引用的方式整体并入本文中
。
[0003]有关通过
EFS
‑
WEB
以电子方式提交的序列表的参考
[0004]以电子方式提交的序列表
(
名称：
4897_005PC03_Seqlisting_ST 25.txt
；大小：
405,168
字节；以及创建日期：
2021
年
12
月1日
)
的内容以引用的方式整体并入本文中
。


[0005]本公开涉及特异性结合至肿瘤相关抗原
(TAA)(
例如
PSMA、HER2
和
BCMA)
和
/
或
CD3
的抗体，包括结合至
TAA(
例如
PSMA、HER2
和
BCMA)
和
CD3
的双特异性抗体，以及包含它们的组合物
。
这些抗体可用于增强免疫反应以及治疗疾病，包括实体瘤癌症
。

技术介绍

[0006]用抗
CD3
单克隆抗体靶向人
T
细胞上的
T
细胞受体
(TCR)
复合物已被用于或建议用于治疗自身免疫性疾病和相关病症，例如器官同种异体移植排斥反应的治疗
。
对人
CD3
具有特异性的小鼠单克隆抗体，例如
OKT3(Kung
等人
(1979)Science 206:347
‑
9)
是此类治疗的第一代
。
尽管
OKT3
具有强大的免疫抑制效力，但其临床应用受到与其免疫原性和促有丝分裂潜能相关的严重副作用的阻碍
(Chatenoud(2003)Nature Reviews 3:123
‑
132)。
它诱导抗球蛋白反应，促进其自身的快速清除和中和
(Chatenoud
等人
(1982)Eur.J.Immunol.137:830
‑
8)。
此外，
OKT3
在体外诱导
T
细胞增殖和细胞因子产生，并引起体内细胞因子的大规模释放
(Hirsch
等人
(1989)J.Immunol 142:737
‑
43,1989)。
细胞因子释放
(
也称为“细胞因子风暴”)
又导致“流感样”综合征，以发烧
、
发冷
、
头痛
、
恶心
、
呕吐
、
腹泻
、
呼吸窘迫
、
脓毒性脑膜炎和低血压为特征
(Chatenoud,2003)。
如此严重的副作用限制了
OKT3
在移植中更广泛的应用，也限制了其用途向自身免疫等其它临床领域的扩展
。
同上文
。
[0007]为了减少抗
CD3
单克隆抗体的副作用，不仅通过将鼠抗
CD3
单克隆抗体的互补决定区
(CDR)
移植到人
IgG
序列中，还通过将非
FcR
结合突变引入
Fc
中以减少细胞因子风暴的发生，开发出新一代经历基因工程改造的抗
CD3
单克隆抗体
(Cole
等人
(1999)Transplantation 68:563
；
Cole
等人
(1997)J.Immunol.159:3613)。
另参见
PCT
公布号
WO2010/042904
，该案以引用的方式整体并入本文中
。
尽管抗
CD3
抗体和双特异性抗体的开发取得了进展，但细胞因子释放综合征仍然是接合
CD3
的治疗剂的开发中的关键问题
。
[0008]除了靶向
CD3
的单特异性治疗剂外，选择性结合至
T
细胞和肿瘤细胞的多特异性多肽也可以提供一种将
T
细胞的细胞毒性重定向至肿瘤细胞以及癌症治疗的机制
。
然而，设计双特异性或多特异性
T
细胞募集抗体的一个问题是维持特异性，同时通过多个调控路径覆盖对
T
细胞活化的调控
。
此外，由于
CD3
存在于血液淋巴细胞中，故需要产生一种抗
CD3
单特异性或多特异性分子，该分子不仅会结合至淋巴细胞中的
CD3
，而且还会到达实体瘤并结合
实体瘤附近的
CD3。
[0009]因此，结合至肿瘤相关抗原
(TAA)
和
CD3
的双特异性抗体难以在临床上实现治疗实体瘤的功效
。
据推测，难题可能是由双特异性抗体的
CD3
结合结构域对
CD3
具有高结合亲和力引起的
。
由于存在这种亲和力，大多数双特异性抗体在施用给患者时会与血液中循环
T
细胞上的
CD3
结合
。
这可能会导致到达实体瘤的双特异性抗体的量不足
。
[0010]已经开发出靶向
CD3
以及
TAA
前列腺特异性膜抗原
(PSMA)
的双特异性构建体
。PSMA
又称为谷氨酸羧肽酶
II
和
N
‑
乙酰化
α
连接的酸性二肽酶
1。
它是一种二聚体
II
型跨膜糖蛋白，属于
M28
肽酶家族，由叶酸水解酶
1(FOLH1)
基因编码
。
这一蛋白质作为谷氨酸羧肽酶作用于包括养分叶酸和神经肽
N
‑
乙酰
‑
l
‑
天冬氨酰基
‑
l
‑
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.
一种双特异性抗体，所述双特异性抗体包含
(a)
第一多肽，所述第一多肽从
N
末端到
C
末端包含
(i)
结合至肿瘤相关抗原
(TAA)
的第一单链可变片段
(scFv)、(ii)
免疫球蛋白恒定区和
(iii)
结合至
CD3
的
scFv
；以及
(b)
第二多肽，所述第二多肽从
N
末端到
C
末端包含
(i)
结合至所述
TAA
的第二
scFv
和
(ii)
免疫球蛋白恒定区，其中所述双特异性抗体不含第二
CD3
结合结构域
。2.
如权利要求1所述的双特异性抗体，其中所述
TAA
是
PSMA、HER2
或
BCMA。3.
如权利要求1所述的双特异性抗体，其中所述
TAA
是
PSMA。4.
如权利要求1‑3中任一项所述的双特异性抗体，其中所述第一多肽与所述第二多肽通过至少一个二硫键接合
。5.
如权利要求1‑4中任一项所述的双特异性抗体，其中结合至所述
TAA
的所述第一
scFv
呈
VH
‑
VL
取向
。6.
如权利要求1‑4中任一项所述的双特异性抗体，其中结合至所述
TAA
的所述第一
scFv
呈
VL
‑
VH
取向
。7.
如权利要求1‑6中任一项所述的双特异性抗体，其中结合至所述
TAA
的所述第二
scFv
呈
VH
‑
VL
取向
。8.
如权利要求1‑6中任一项所述的双特异性抗体，其中结合至所述
TAA
的所述第二
scFv
呈
VL
‑
VH
取向
。9.
如权利要求1‑8中任一项所述的双特异性抗体，其中结合至所述
TAA
的所述第一
scFv
与结合至所述
TAA
的所述第二
scFv
是相同的
。10.
如权利要求1‑9中任一项所述的双特异性抗体，其中结合至
CD3
的所述
scFv
呈
VH
‑
VL
取向
。11.
如权利要求1‑9中任一项所述的双特异性抗体，其中结合至
CD3
的所述
scFv
呈
VL
‑
VH
取向
。12.
如权利要求1‑
11
中任一项所述的双特异性抗体，其中所述第一多肽中的所述免疫球蛋白恒定区包含节突变和
/
或所述第二多肽中的所述免疫球蛋白恒定区包含孔突变
。13.
如权利要求1‑
11
中任一项所述的双特异性抗体，其中所述第一多肽中的所述免疫球蛋白恒定区包含孔突变和
/
或所述第二多肽中的所述免疫球蛋白恒定区包含结突变
。14.
如权利要求
12
或
13
所述的双特异性抗体，其中包含结突变的免疫球蛋白恒定区包含
SEQ ID NO:66
的氨基酸序列和
/
或包含孔突变的所述免疫球蛋白恒定区包含
SEQ ID NO:68
的氨基酸序列
。15.
如权利要求1‑
14
中任一项所述的双特异性抗体，其中与野生型免疫球蛋白恒定区相比，所述免疫球蛋白恒定区包含一个
、
两个
、
三个
、
四个
、
五个或更多个氨基酸取代和
/
或缺失以防止
Fc
γ
R1
和
/
或
Fc
γ
RIIIb
的结合
。16.
如权利要求1‑
14
中任一项所述的双特异性抗体，其中与野生型免疫球蛋白恒定区相比，所述免疫球蛋白恒定区包含一个
、
两个
、
三个
、
四个
、
五个或更多个氨基酸取代和
/
或缺失以防止或降低
CDC
活性
。17.
如权利要求1‑
16
中任一项所述的双特异性抗体，其中所述免疫球蛋白恒定区包含
IgG1 CH2
结构域，根据
EU
编号系统，所述
IgG1 CH2
结构域包含
E233P、L234A、L235A、G237A
和
K322A
取代以及
G236
缺失
。18.
如权利要求1‑
17
中任一项所述的双特异性抗体，其中所述免疫球蛋白恒定区包含
IgG1
的免疫球蛋白
CH2
和
CH3
结构域
。19.
如权利要求1‑
18
中任一项所述的双特异性抗体，其中所述双特异性抗体不含
CH1
结构域
。20.
如权利要求1‑
19
中任一项所述的双特异性抗体，其中结合至所述
TAA
的所述第一
scFv、
结合至
CD3
的所述
scFv
和
/
或结合至所述
TAA
的所述第二
scFv
包含甘氨酸
‑
丝氨酸接头
。21.
如权利要求1‑
19
中任一项所述的双特异性抗体，其中结合至所述
TAA
的所述第一
scFv、
结合至
CD3
的所述
scFv
和
/
或结合至所述
TAA
的所述第二
scFv
包括含氨基酸序列
(Gly4Ser)
n
的甘氨酸
‑
丝氨酸接头，其中
n
＝1‑
5。22.
如权利要求
21
所述的双特异性抗体，其中
n
＝
4。23.
如权利要求1‑
22
中任一项所述的双特异性抗体，其中所述第一多肽和
/
或所述第二多肽还在
scFv
与免疫球蛋白恒定结构域之间包含至少一个接头
。24.
如权利要求
23
所述的双特异性抗体，其中所述接头包含铰链区
。25.
如权利要求
24
所述的双特异性抗体，其中所述铰链是
IgG1
铰链区
。26.
如权利要求
25
所述的双特异性抗体，其中所述铰链包含
SEQ ID NO:156
的氨基酸序列
。27.
如权利要求3‑
26
中任一项所述的双特异性抗体，其中结合至
PSMA
的所述第一
scFv
和
/
或结合至
PSMA
的所述第二
scFv
能够结合至食蟹猴
PSMA。28.
如权利要求
27
所述的双特异性抗体，其中结合至
PSMA
的所述第一
scFv
和
/
或结合至食蟹猴
PSMA
的所述第二
scFv
具有比结合至人
PSMA
的
EC50
高不超过5倍的
EC50。29.
如权利要求1‑
28
中任一项所述的双特异性抗体，其中所述双特异性抗体能够同时结合至所述
TAA
和
CD3。30.
如权利要求1‑
29
所述的双特异性抗体，其中结合至
CD3
的所述
scFv
结合至
CD3
ε
。31.
如权利要求3‑
30
中任一项所述的双特异性抗体，其中结合至
PSMA
的所述第一
scFv
包含可变重链
(VH)
互补决定区
(CDR)1、VH CDR2
和
VH CDR3
，所述
VH CDR1、VH CDR2
和
VH CDR3
分别包含
SEQ ID NO:70、72
和
74
的氨基酸序列，并且包含可变轻链
(VL)CDR1、VL CDR2
和
VL CDR3
，所述
VL CDR1、VL CDR2
和
VL CDR3
分别包含
SEQ ID NO:76、78
和
80
的氨基酸序列
。32.
如权利要求3‑
31
中任一项所述的双特异性抗体，其中结合至
PSMA
的所述第一
scFv
包括含
SEQ ID NO:82
的氨基酸序列的
VH
结构域，并且包括含
SEQ ID NO:84
的氨基酸序列的
VL
结构域
。33.
如权利要求3‑
32
中任一项所述的双特异性抗体，其中结合至
PSMA
的所述第一
scFv
包含
SEQ ID NO:86
的氨基酸序列
。34.
如权利要求1‑
33
中任一项所述的双特异性抗体，其中结合至
CD3
的所述
scFv
包含
VH CDR1、VH CDR2
和
VH CDR3
，所述
VH CDR1、VH CDR2
和
VH CDR3
分别包含
SEQ ID NO:88、90
和
92
的氨基酸序列，并且包含
VL CDR1、VL CDR2
和
VL CDR3
，所述
VL CDR1、VL CDR2
和
VL CDR3
分别包含
SEQ ID NO:94、96
和
98
的氨基酸序列
。
35.
如权利要求1‑
34
中任一项所述的双特异性抗体，其中结合至
CD3
的所述
scFv
包括含
SEQ ID NO:100
的氨基酸序列的
VH
结构域，并且包括含
SEQ ID NO:102
的氨基酸序列的
VL
结构域
。36.
如权利要求1‑
35
中任一项所述的双特异性抗体，其中结合至
CD3
的所述
scFv
包含
SEQ ID NO:104
或
110
的氨基酸序列
。37.
如权利要求3‑
36
中任一项所述的双特异性抗体，其中结合至
PSMA
的所述第二
scFv
包含
VH CDR1、VH CDR2
和
VH CDR3
，所述
VH CDR1、VH CDR2
和
VH CDR3
分别包含
SEQ ID NO:70、72
和
74
的氨基酸序列，并且包含
VL CDR1、VL CDR2
和
VL CDR3
，所述
VL CDR1、VL CDR2
和
VL CDR3
分别包含
SEQ ID NO:76、78
和
80
的氨基酸序列
。38.
如权利要求3‑
37
中任一项所述的双特异性抗体，其中结合至
PSMA
的所述第二
scFv
包括含
SEQ ID NO:82
的氨基酸序列的
VH
结构域，并且包括含
SEQ ID NO:84
的氨基酸序列的
VL
结构域
。39.
如权利要求3‑
38
中任一项所述的双特异性抗体，其中结合至
PSMA
的所述第二
scFv
包含
SEQ ID NO:86
的氨基酸序列
。40.
如权利要求3‑
39
中任一项所述的双特异性抗体，其中所述第一多肽包含
SEQ ID NO:106、178
或
112
的氨基酸序列
。41.
如权利要求3‑
39
中任一项所述的双特异性抗体，其中所述第二多肽包含
SEQ ID NO:108
的氨基酸序列
。42.
如权利要求1‑
41
中任一项所述的双特异性抗体，其中所述抗体能够促进
CD8+T
细胞和
/
或
CD4+T
细胞的扩增
。43.
如权利要求1‑
42
中任一项所述的双特异性抗体，其中所述抗体能够活化
CD8+T
细胞和
/
或
CD4+T
细胞
。44.
如权利要求1‑
43
中任一项所述的双特异性抗体，其中所述抗体能够增加中央记忆
T
细胞
(TCM)
和
/
或效应记忆
T
细胞
(TEM)。45.
如权利要求1‑
44
中任一项所述的双特异性抗体，其中所述抗体能够减少原始和
/
或终末分化
T
细胞
(Teff)。46.
如权利要求1‑
45
中任一项所述的双特异性抗体，其中所述抗体能够减少
IFN
‑
γ
、IL
‑
2、IL
‑
6、TNF
‑
α
、
颗粒酶
B、IL
‑
10
和
/
或
GM
‑
CSF
的分泌
。47.
如权利要求1‑
46
中任一项所述的双特异性抗体，其中所述抗体能够增加
NF
κ
B、NFAT
和
/
或
ERK
信号传导路径的信号传导
。48.
一种包含
PSMA
结合结构域的抗体或其抗原结合片段，其中所述
PSMA
结合结构域包含
VH
和
VL
，其中所述
VH
包含
SEQ ID NO:82
的氨基酸序列
。49.
一种包含
PSMA
结合结构域的抗体或其抗原结合片段，其中所述
PSMA
结合结构域包含
VH
和
VL
，其中所述
VL
包含
SEQ ID NO:84
的氨基酸序列
。50.
如权利要求
48
或
49
所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述
VH
包含
SEQ ID NO:82
的氨基酸序列，并且所述
VL
包含
SEQ ID NO:84
的氨基酸序列
。51.
一种包含
CD3
抗原结合结构域的抗体或其抗原结合片段，其中所述
CD3
抗原结合结构域包含
VH
和
VL
，其中所述
VH
包含
SEQ ID NO:100
的氨基酸序列
。52.
一种包含
CD3
抗原结合结构域的抗体或其抗原结合片段，其中所述
CD3
抗原结合结
构域包含
VH
和
VL
，其中所述
VL
...

【专利技术属性】
技术研发人员：P，
申请(专利权)人：阿帕特夫研究和发展有限公司，
类型：发明
国别省市：