抗制造技术

本发明专利技术公开了抗4‑

【技术实现步骤摘要】
抗4
‑
1BB/抗EGFRvIII的双特异抗体及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于抗体领域，具体地涉及一种抗4‑
1BB/
抗
EGFRvIII
的双特异抗体抗体及其制备方法和应用
。

技术介绍

[0002]4‑
1BB(CD137
，肿瘤坏死因子受体超家族
9)
是广泛研究的共刺激分子，在活化的
T
细胞和自然杀伤
(NK)
细胞等免疫细胞上表达
。4
‑
1BB
介导
T
细胞触发一个信号级联，诱导抗凋亡分子的上调和细胞因子的分泌，进一步增强免疫细胞的效应功能
。
在功能失调的细胞毒性能力下降的
T
细胞中，4‑
1BB
可以介导恢复
T
细胞的效应功能
。
另一方面，在
NK
细胞上，4‑
1BB
信号可以增加抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用
。
[0003]4‑
1BB
和其配体4‑
1BBL
的结合可激活下游
NF
‑
κ
B、JNK/SAPK、p38 MAPK
等通路，进一步产生共刺激信号诱导
CD4+
和
CD8+T
细胞的活性，促进
T
细胞的增殖
。
此外，4‑<br/>1BB
与4‑
1BBL
的结合也可刺激巨噬细胞产生多种炎症细胞因子，如
IL
‑
6、TNF
‑
α
等，进一步增强抗肿瘤免疫
。
保持有效的免疫监视而不引起自身免疫反应需要效应
T
细胞反应的准确性
。
[0004]4‑
1BB
作为共刺激因子结构域
(co
‑
stimulatory domains
，
CD)
被广泛用于
CAR
‑
T(
嵌合抗原受体
T)
细胞治疗
。CAR
‑
T
细胞治疗，具有针对癌细胞的定向特异性，是一种很有前景的治疗癌症的方法
。
作为
CAR
‑
T
细胞的胞内共刺激结构域，4‑
1BB
可促进
CAR
‑
T
在体内的存活和延长留存时间
。
[0005]人类表皮生长因子受体
(EGFR
，
human epidermal growth factor receptor
，也称为
her
‑1或
Erb
‑
B1)
是一个
170kDa
的跨膜蛋白受体，通过酪氨酸激酶介导的信号转导途径调节多种细胞生理过程，主要包括细胞增殖及分化
、
细胞存活及凋亡
、
血管生成
、
以及细胞的有丝分裂和细胞转移
。EGFRvIII
是其中一种突变型蛋白，也称作
de2
‑
7EGFR、
Δ
EGFR
，成熟的
EGFRvIIImRNA
中缺失了外显子2‑7的
801
个核苷酸，相应的
EGFRvIII
蛋白缺失了
267
个氨基酸
(6
‑
273)
，同时插入了一个甘氨酸残基，形成了一个独特的连接肽
。EGFRvIII
特异性的表达于肿瘤组织中，在正常组织中不表达，因此在抗体治疗中是一个高度特异性的靶点
。EGFRvIII
在神经胶质瘤中的作用机制并没有完全清楚，但是根据已有的报道，
EGFRvIII
可以降低神经胶质瘤细胞的凋亡，并小幅度的提高神经胶质瘤细胞的增殖
。
[0006]4‑
1BB
单抗和双抗目前尚处于早期临床或临床前阶段，适应症包括晚期实体瘤
、
黑色素瘤和非霍奇金淋巴瘤等
。
部分早期临床研究的结果显示，4‑
1BB
单抗和双抗具有可接受的安全性
、
耐受性和一定程度的抗肿瘤疗效
。
但是，早期开的4‑
1BB
强激动剂对肝脏具有毒性而若激动剂抗肿瘤疗效有限
。
[0007]鉴于本领域的4‑
1BB
蛋白和
EGFRvIII
蛋白双抗在抗原结合活性
、
安全性上仍然有许多不足，因此，开发新的抗4‑
1BB/
抗
EGFRvIII
的双特异抗体是治疗癌症以及自身免疫性疾病的迫切需求
。

技术实现思路

[0008]本专利技术的目的在于提供一种抗4‑
1BB/
抗
EGFRvIII
的双特异抗体及其制备方法和应用
。
[0009]本专利技术的目的是提供了一种对4‑
1BB
蛋白和
EGFRvIII
蛋白两者都具有较高的结合能力的抗4‑
1BB/
抗
EGFRvIII
的双特异抗体
。
该双特异抗体可以结合肿瘤细胞表面的
EGFRvIII
分子的同时，结合免疫细胞表面的4‑
1BB
激活受体分子，使免疫细胞聚集在肿瘤细胞周围并刺激免疫细胞的抗肿瘤活性，达到协同杀死肿瘤细胞的作用，与4‑
IBB
单克隆抗体相比，使用双特异性抗体可以有效地减少过度激活造成的肝脏毒性
。
[0010]为了达到上述目的，本专利技术体提供了一种抗4‑
1BB/
抗
EGFRvIII
的双特异抗体及其制备方法和应用
。
所述的抗4‑
1BB/
抗
EGFRvIII
双特异抗体包括：
(1)
一种抗4‑
1BB
的抗体或其抗原结合片段，作为4‑
1BB
的靶向分子，能够特异性地识别4‑
1BB
蛋白；以及
(2)
一种抗
EGFRvIII
的抗体或其抗原结合片段，作为
EGFRvIII
的靶向分子，能够特异性地识别
EGFRvIII
蛋白
。
[0011]在本专利技术的第一方面，提供了一种双特异性抗体，所述双特异性抗体包含：
[0012]第一抗原结合结构域
(D1)本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种双特异性抗体，其特征在于，所述双特异性抗体包含：第一抗原结合结构域
(D1)
；和第二抗原结合结构域
(D2)
；其中，所述第一抗原结合结构域特异性结合靶分子4‑
1BB
蛋白；所述第二抗原结合结构域特异性结合靶分子
EGFRvⅢ蛋白；所述
D1
为特异性结合4‑
1BB
蛋白的抗体或其抗原结合片段；和所述
D2
为特异性结合
EGFRvⅢ蛋白的抗体或其抗原结合片段；所述抗4‑
1BB
抗体包括重链可变区和轻链可变区，所述的重链可变区包括以下三个互补决定区
CDR
：
SEQ ID NO:1
所示的
VH
‑
CDR1
，
SEQ ID NO:2
所示的
VH
‑
CDR2
，和
SEQ ID NO:3
所示的
VH
‑
CDR3
；和所述的轻链可变区包括以下三个互补决定区
CDR
：
SEQ ID NO:7
所示的
VL
‑
CDR1
，
SEQ ID NO:8
所示的
VL
‑
CDR2
，和
SEQ ID NO:9
所示的
VL
‑
CDR3。2.
如权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，所述抗
EGFRvⅢ抗体包括重链可变区和轻链可变区，所述的重链可变区包括以下三个互补决定区
CDR
：
SEQ ID NO:4
所示的
VH
‑
CDR1
，
SEQ ID NO:5
所示的
VH
‑
CDR2
，和
SEQ ID NO:6
所示的
VH
‑
CDR3
；和所述的轻链可变区包括以下三个互补决定区
CDR
：
SEQ ID NO:10
所示的
VL
‑
CDR1
，
SEQ ID NO:11
所示的
VL
‑
CDR2
...

【专利技术属性】
技术研发人员：戴朝辉，陈利锋，韩烨，闵晨雨，杨光，展胜，周嘉怡，
申请(专利权)人：上海怀越生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：