包含制造技术

本公开提供了包含结合4‑

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含4
‑
1BB和OX40结合蛋白的组合物及其使用方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本国际申请要求
2021
年2月
17
日提交的美国临时申请号
63/150,475
的优先权权益，该临时申请全文以引用方式并入本文
。
[0003]以电子方式提交的序列表参考
[0004]以电子方式提交的序列表
(
名称：
4897_0060000_Seqlisting_ST25.txt
；大小：
18,030
字节；以及创建日期：
2022
年2月
16
日
)
全文以引用方式并入本文
。


[0005]本公开涉及包含特异性结合4‑
1BB
和
OX40
的双特异性抗体及其抗原结合片段的药物组合物
。
该组合物可用于治疗病症，包括实体瘤癌症
。
还提供了使用此类组合物治疗病症诸如癌症的方法
。

技术介绍

[0006]4‑
1BB(CD137)
和
OX40
是
TNF
受体
(TNFR)
家族的成员
(Bremer
，
ISRN Oncol.:371854(2013))。
这些受体不组成型地存在于天然
T
或
NK
>细胞上：通过
T
细胞受体
(TCR)
或
NK
细胞中的其他刺激物刺激
T
细胞来触发它们的表达
。4
‑
1BB
主要在
CD8 T
细胞和
NK
细胞中上调，而
OX40
主要在
CD4 T
细胞中上调
。
这些受体的功能是向
T
细胞和
NK
细胞提供共刺激信号
。
这些受体的激活是通过与4‑
1BB
配体
(4
‑
1BBL)
或
OX40
配体
(OX40L)
三聚体相互作用而实现的三聚反应自然触发的，导致信号转导和特定细胞功能的起始
。4
‑
1BB
通过增加
IFN
‑
γ
、
颗粒酶和抗凋亡基因的表达来增强
CD8 T
细胞和
NK
细胞的效应子功能，导致生成更多和更好的效应子
CD8 T
和
NK
细胞
。OX40
通过增强
CD4 T
细胞产生
IL
‑2的能力和记忆
CD4 T
细胞的克隆扩增的能力来增强其效应子功能
。
[0007]4‑
1BB
和
OX40
通常在肿瘤浸润性淋巴细胞上表达，并且它们的表达已被用于鉴定肿瘤特异性
T
细胞
。
人实体瘤通常被淋巴细胞浸润，主要是
CD8+
和
CD4+T
细胞
。
肿瘤浸润性淋巴细胞的积累通常与受各种恶性肿瘤影响的患者的改善的生存率相关
。(Ye
等人，
OncoImmunology 2:e27184(2013)
；
Montler
等人，
Clin Transl Immunology 5:e70(2016))。
[0008]多种诱导和自发肿瘤模型中的临床前结果表明，用激动剂抗体靶向4‑
1BB
可导致肿瘤清除和持久的抗肿瘤免疫
。
乌瑞芦单抗和乌托鲁单抗是激动剂抗4‑
1BB
单克隆抗体，正在进行包括实体瘤治疗在内的适应症临床试验
。
尽管有最初的功效迹象，但在高于
1mg/kg
的剂量下，乌瑞芦单抗的临床研发受到炎性肝毒性的阻碍
。
乌托鲁单抗不如乌瑞芦单抗有效，但与乌瑞芦单抗相比，它具有改善的安全特性
(Chester
等人，
Blood 131:39
‑
57(2018))。
需要靶向4‑
1BB
的有效治疗剂，其不会引起如用乌瑞芦单抗观察到的肝毒性或其他全身性损伤
。
[0009]OX40
激动剂已被报道能够增加
T
‑
细胞在肿瘤中的浸润
。OX40
信号传导可以阻止
Treg
介导的对抗肿瘤免疫应答的抑制
。
在若干个临床前小鼠癌症模型中，包括
4T
‑1乳腺癌
、
B16
黑素瘤
、Lewis
肺癌和若干种化学诱导的肉瘤，
OX40
激动剂的注射引起治疗反应
。(Ohsima
等人，
J.Immunology 159:3838
‑
3848(1997)
；
Imura
等人，
J.Exp.Med.183:2185
‑
2195(1996)
；
Maxwell
等人，
J.Immunology164:107
‑
112(2000)
；
Gough
等人，
J.Immunotherapy 33(8):798
‑
809(2010))。
[0010]在一些情况下，研究人员已生成包含针对4‑
1BB
或
OX40
的多个结合结构域
(>2)
，或多个
OX40L
和4‑
1BBL
细胞外结构域的融合物以诱导激动作用的蛋白构建体
。
在其他示例中，存在包含针对4‑
1BB
或
OX40
的结合结构域和针对肿瘤特异性抗原的结合结构域的双特异性蛋白质
。
经由肿瘤抗原结合的结合和聚集会诱导4‑
1BB
和
OX40
的聚集和信号传导
。
然而，预期这些构建体均不能刺激肿瘤浸润性淋巴细胞
(
即，
CD8+T
细胞
、CD4 T+
细胞和
NK
细胞
)
的功能，并且在效应细胞的脱靶活化
(
即，通过结合
Fc
γ
R1、Fc
γ
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.
一种药物组合物，所述药物组合物包含：
(a)
特异性结合4‑
1BB
和
OX40
的双特异性抗体或其抗原结合片段；
(b)
约
5mM
至约
15mM
的稳定性促进缓冲液；
(c)
约
25mM
至约
50mM
的稳定氨基酸；
(d)
约2％至约8％
w/v
的糖；以及
(e)
约
0.01
％至约
‑
0.03
％的表面活性剂
。2.
如权利要求1所述的药物组合物，其中所述稳定性促进缓冲液选自由琥珀酸盐
、
组氨酸
、
柠檬酸盐和谷氨酸盐组成的组
。3.
如权利要求1或2所述的药物组合物，其中所述稳定性促进缓冲液以约
5mM、
约
6mM、
约
7mM、
约
8mM、
约
9mM、
约
10mM、
约
11mM、
约
12mM、
约
13mM、
约
14mM
或约
15mM
的浓度存在于所述组合物中
。4.
如权利要求3所述的药物组合物，其中所述稳定性促进缓冲液是谷氨酸盐
。5.
如权利要求2至4中任一项所述的药物组合物，其中所述谷氨酸盐以约
5mM
的浓度存在于所述组合物中
。6.
如权利要求1至5中任一项所述的药物组合物，其中所述稳定氨基酸选自由精氨酸
、
甲硫氨酸
、
亮氨酸和甘氨酸组成的组
。7.
如权利要求6所述的药物组合物，其中所述稳定氨基酸以约
25mM、
约
26mM、
约
27mM、
约
28mM、
约
29mM、
约
30mM、
约
31mM、
约
32mM、
约
33mM、
约
34mM、
约
35mM、
约
36mM、
约
37mM、
约
38mM、
约
39mM、
约
40mM、
约
41mM、
约
42mM、
约
43mM、
约
44mM、
约
45mM、
约
46mM、
约
47mM、
约
48mM、
约
49mM
或约
50mM
的浓度存在于所述组合物中
。8.
如权利要求6或7所述的药物组合物，其中所述稳定氨基酸是亮氨酸
。9.
如权利要求6至8中任一项所述的药物组合物，其中所述亮氨酸以约
40mM
的浓度存在于所述组合物中
。10.
如权利要求1至9中任一项所述的药物组合物，其中所述糖选自由以下项组成的组：蔗糖
、
海藻糖和山梨糖醇
。11.
如权利要求
10
所述的药物组合物，其中所述糖以约2％
w/v
至约8％
w/v
的浓度存在于所述组合物中
。12.
如权利要求
10
或
11
中任一项所述的药物组合物，其中所述糖以约2％
w/v、
约3％
w/v、
约4％
w/v、
约5％
w/v、
约6％
w/v、
约7％
w/v
或约8％
w/v
的浓度存在于所述组合物中
。13.
如权利要求
10
至
12
中任一项所述的药物组合物，其中所述糖是蔗糖
。14.
如权利要求
11
至
13
中任一项所述的药物组合物，其中所述蔗糖以约3％
w/v
的浓度存在于所述组合物中
。15.
如权利要求1至
14
中任一项所述的药物组合物，所述药物组合物还包含表面活性剂
。16.
如权利要求
15
所述的药物组合物，其中所述表面活性剂是聚山梨酯
‑
80。17.
如权利要求
16
所述的药物组合物，其中所述聚山梨酯
‑
80
以约
0.01
％
w/v
至约
0.03
％
w/v
的浓度存在于所述组合物中
。18.
如权利要求6或
17
所述的药物组合物，其中所述聚山梨酯
‑
80
以约3％
w/v
的浓度存在于所述组合物中
。
19.
如权利要求1至
18
中任一项所述的药物组合物，其中所述组合物的
pH
在约
4.3
至约
4.7
的范围内
。20.
如权利要求1至
19
中任一项所述的药物组合物，其中所述组合物的
pH
为约
4.5。21.
如权利要求1至
20
中任一项所述的药物组合物，其中所述双特异性抗体或其抗原结合片段以约
10mg/mL
至约
50mg/mL
的浓度存在于所述组合物中
。22.
如权利要求1至
21
中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物不含氯化钠
(NaCl)。23.
如权利要求1至
22
中任一项所述的药物组合物，其中所述4双特异性抗体或其抗原结合片段具有约
>90
％的纯度
。24.
如权利要求1至
23
中任一项所述的药物组合物，所述药物组合物包含：
(a)
浓度为约
10mg/mL
的所述4‑
1BB x OX40
双特异性抗体或其抗原结合片段；
(b)
约
10mM
谷氨酸盐；
(c)
约
40mM
亮氨酸；
(d)
约3％
w/v
蔗糖；以及
(e)
约
0.02
％聚山梨酯
‑
80
其中所述组合物的
pH
为约
4.3
至约
4.7。25.
如权利要求1至
24
中任一项所述的药物组合物，所述药物组合物包含：
(a)
浓度为
10mg/mL
的所述4‑
1BB x OX40
双特异性抗体或其抗原结合片段；
(b)10mM
谷氨酸盐；
(c)40mM
亮氨酸；
(d)3
％
w/v
蔗糖；以及
(e)0.02
％聚山梨酯
‑
80
；其中所述组合物的
pH
为
4.5。26.
如权利要求1至
25
中任一项所述的药物组合物，其中所述双特异性抗体或其抗原结合片段包含单链
Fv(scFv)。27.
如权利要求1至
26
中任一项所述的药物组合物，其中所述双特异性抗体或其抗原结合片段包含
Fab、Fab'、F(ab')2、scFv、
二硫键连接的
Fv
或
scFv
‑
Fc。28.
如权利要求1至
27
中任一项所述的药物组合物，其中所述双特异性抗体或其抗原结合片段包含人4‑
1BB
抗原结合结构域和人
OX40
抗原结合结构域，其中：
(a)
所述4‑
1BB
抗原结合结构域包含
(i)
含有
SEQ ID NO:1
的氨基酸序列的
VH
‑
CDR1
；
(ii)
含有
SEQ ID NO:2
的氨基酸序列的
VH
‑
CDR2
；
(iii)
含有
SEQ ID NO:3
的氨基酸序列的
VH
‑
CDR3
；
(iv)
含有
SEQ ID NO:4
的氨基酸序列的轻链可变结构域
(VL)
‑
CDR1
；
(v)
含有
SEQ ID NO:5
的氨基酸序列的
VL
‑
CDR2
；以及
(vi)
含有
SEQ IDNO:6
的氨基酸序列的
VL
‑
CDR3
；以及
(b)
所述
OX40
抗原结合结构域包含
(i)
含有
SEQ ID NO:7
的氨基酸序列的
VH
‑
CDR1
；
(ii)
含有
SEQ ID NO:8
的氨基酸序列的
VH
‑
CDR2
；
(iii)
含有
SEQ ID NO:9
的氨基酸序列的
VH
‑
CDR3
；
(iv)
含有
SEQ ID NO:10
的氨基酸序列的
VL
‑
CDR1
；
(v)
含有
SEQ ID NO:11
的氨基酸序列的
VL
‑
CDR2
；以及
(vi)
含有
SEQ ID NO:12
的氨基酸序列的
VL
‑
CDR3。29.
如权利要求1至
28
中任一项所述的药物组合物，其中所述双特异性抗体或其抗原结合片段包含人4‑
1BB
抗原结合结构域和人
OX40
抗原结合结构域，其中：
(a)
所述4‑
1BB
抗原结合结构域包含含有
SEQ ID NO:14
的氨基酸序列的重链可变区和含有
SEQ ID NO:15
的氨基酸序列的轻链可变区；并且
(b)
所述
OX40
抗原结合结构域包含含有
SEQ ID NO:17
的氨基酸序列的重链可变区和含有
SEQ ID NO:18
的氨基酸序列的轻链可变区
。30.
如权利要求1至
29
中任一项所述的药物组合物，其中所述4‑
1BB x OX40
双特异性抗体或其抗原结合片段包含人4‑
1BB
抗原结合结构域和人
OX40
抗原结合结构域，其中：
(a)
所述4‑
1BB
抗原结合结构域包含含有
SEQ ID NO:16
的氨基酸序列的
scFv
；并且
(b)
所述
OX40
抗原结合结构域包含含有
SEQ ID NO:19
的氨基酸序列的
scFv。31.
如权利要求1至
30
中任一项所述的药物组合物，其中所述双特异性抗体或其抗原结合片段含有
SEQ ID NO:13
的氨基酸序列
。32.
一种药物组合物，所述药物组合物包含：
(a)10mg/mL
的4‑
1BB x OX40
双特异性抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
(i)4
‑
1BB
抗原结合结构域，其包含含有
SEQ ID NO:1
的氨基酸序列的
VH
‑
CDR1
；含有
SEQ ID NO:2
的氨基酸序列的
VH
‑
CDR2
；含有
SEQ ID NO:3
的氨基酸序列的
VH
‑
CDR3
；含有
SEQ ID NO:4
的氨基酸序列的轻链可变结构域
(VL)
‑
CDR1
；含有
SEQ ID NO:5
的氨基酸序列的
VL
‑
CDR2
；以及含有
SEQ ID NO:6
的氨基酸序列的
VL
‑
CDR3
；以及
OX40
抗原结合结构域，其包含含有
SEQ ID NO:7
的氨基酸序列的
VH
‑
CDR1
；含有
SEQ ID NO:8
的氨基酸序列的
VH
‑
CDR2
；含有
SEQ ID NO:9
的氨基酸序列的
VH
‑
CDR3
；含有
SEQ ID NO:10
的氨基酸序列的
VL
‑
CDR1
；含有
SE...

【专利技术属性】
技术研发人员：D，
申请(专利权)人：阿帕特夫研究和发展有限公司，
类型：发明
国别省市：