具有长制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种具有特定长度的

【技术实现步骤摘要】
具有长CDR3序列的抗人BCMA纳米抗体及CAR
‑
T和应用
[0001]本申请要求
2022
年
12
月6提交的中国专利技术专利申请
【202211579918.7】“一种具有长
CDR3
序列的抗人
BCMA
纳米抗体极其制备方法和应用”，以及，
【202211556901.X】“基于包含长
CDR3
序列的抗
BCMA
纳米抗体的双特异性抗体
、CAR
‑
T
制剂及应用”的优先权，两个优先权专利技术专利申请以引用方式全文并入
。


[0002]本专利技术属于生物
，具体涉及一种具有长
CDR3
序列的抗人
BCMA
纳米抗体及
CAR
‑
T
和应用
。

技术介绍

[0003]B
细胞成熟抗原
(B
‑
cell maturation antigen,BCMA),
也称为肿瘤坏死因子受体超家族成员
17(TNFRS17)
或
CD269,BCMA
是在浆细胞和已分化的浆细胞表面特异性表达的蛋白，由
185
个氨基酸残基组成了其胞外结构域，在
B
细胞成熟和分化为浆细胞中起主要作用
。BCMA
是肿瘤坏死因子超家族的增殖诱号配体
(Aproliferation
‑
inducing ligand,APRIL)
和
B
细胞活化因子
(B
‑
cell activating factor,BAFF)
的受体
。
二者均可触发
NF
‑
κ
B
信号传导，增加促存活的
BCL
‑2家族基因的表达和促凋亡基因的下调，此外
BCMA
可激活
JNK、MAPK8
信号通路，这些信号通路参与调节体液免疫，
B
细胞发育和稳态，促进
B
细胞在不同发育阶段的存活，是调节
B
细胞增殖
、
成熟和分化成浆细胞的关键
。
[0004]多发性骨髓瘤
(Multiple myeloma
，
MM)
是仅次于非霍奇金淋巴瘤的第二大血液恶性肿瘤，其特征是骨髓中恶性浆细胞异常增生和溶骨性骨病变
。
相关的临床症状包括溶骨性病变
、
贫血
、
肾功能不全
、
高钙血症
、
感染和其他相关的器官功能障碍
。
在正常人体组织中，
BCMA
蛋白和
mRNA
几乎只发现在浆细胞上，但其在在浆细胞恶性转化过程中选择性地过度表达，高表达于多发性骨髓瘤细胞表面，并且
MM
患者的血清中
BCMA
水平升高，促进肿瘤细胞生长
、
存活和耐药性的发生，主要通过激活
NF
‑
κ
B、AKT、
磷脂酰肌醇3激酶
(PI3K)、STAT3
和
MAPK
细胞内信号转导级联反应
。
目前主要的治疗方案包括化疗
、
自体干细胞移植
(ASCT)
和新型药物
(
蛋白酶体抑制剂
、
免疫调节药物和单克隆抗体
(
如
daratumumab
或
elotuzumab)
，这些治疗方案虽然能延缓该病的进展，但
MM
在很大程度上仍然无法治愈，大多数患者在多线治疗后复发
。
[0005]1993
年在骆驼科动物和鲨鱼的血清中分离出一种仅有重链可变区
(variabledomain of the heavy chain of HCAb
，
VHH)
和两个
CH2
和
CH3
区的抗体，该抗体被称为单域抗体
(singledomain antibody
，
sdAb)
，又称纳米抗体，它在分子大小
、
稳定性
、
溶解度
、
穿透性等方面都优于常规抗体
。
这种纳米抗体单独表达
VHH
结构，但仍然保留了对原始重链完整的抗原特异性和结合亲和力，是目前已知的可结合抗原的最小抗体片段
。
因此纳米抗体可在疫苗研发
、
疾病诊断和治疗中发挥优势
。
虽然纳米抗体相较于常规抗体具有众多的优点已被广泛证实，但纳米抗体如何在实际临床治疗和应用中发挥更好更稳定的作用，目前还有众多疑问未被完全掌握
。
以及什么类型的纳米抗体具有好的效果目前没有
准确的答案，依然需要研究人员付出大量的时间和精力去探索
。
[0006]综上所述，本领域仍需开发抗
BCMA
的新纳米抗体及相关应用，以缓解目前医疗技术在治疗多发性骨髓瘤中存在的不足
。

技术实现思路

[0007]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种具有特定长度
CDR3
序列的抗人
BCMA
纳米抗体及
CAR
‑
T
和应用，具体技术方案如下
。
[0008]一种抗人
BCMA
纳米抗体，所述抗人
BCMA
纳米抗体包括重链可变区，所述重链可变区包括骨架区和互补决定区，所述互补决定区中
CDR3
的氨基酸残基数量为
16
～
32
个；所述重链可变区的序列为
SEQ ID NO.1
～
SEQ ID NO.42
所示
。
[0009]进一步，所述抗人
BCMA
纳米抗体的亲和力
KD
值范围为
1.0
×
10
‑9～
9.0
×
10
‑
12
。
[0010]优选的，所述抗人
BCMA
纳米抗体的亲和力
KD
值范围为
1.0
×
10
‑9～
7.5
×
10
‑
12
。
[0011]一种靶向多发性骨髓瘤的
CAR
‑
T
细胞，所述
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种抗人
BCMA
纳米抗体，其特征在于，所述抗人
BCMA
纳米抗体包括重链可变区，所述重链可变区包括骨架区和互补决定区，所述互补决定区中
CDR3
的氨基酸残基数量为
16
～
32
个；所述重链可变区的序列为
SEQ ID NO.1
～
SEQ ID NO.42
所示
。2.
如权利要求1所述的抗人
BCMA
纳米抗体，其特征在于，所述抗人
BCMA
纳米抗体的亲和力
KD
值范围为
1.0
×
10
‑9～
9.0
×
10
‑
12
。3.
一种靶向多发性骨髓瘤的
CAR
‑
T
细胞，其特征在于，所述
CAR
‑
T
细胞包含权利要求1所述的抗人
BCMA
纳米抗体
。4.
如权利要求3所述的
CAR
‑
T
细胞，其特征在于，所述
CAR
‑
T
细胞还包括
CD8
信号肽
、
铰链区
、
人源
CD8
跨膜区
、
人源4‑
1BB
共刺激信号区和人源
CD3
ζ
信号结构域
。5.
权利要求1所述的抗人
BCMA
纳米抗体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1：以包含人
BCMA
基因全长序列的质粒为模板，利用真核表达体系制备特异性靶向
BCMA
的重组蛋白；步骤2：用步骤1制备的重组蛋白来免疫动物，提取免疫后动物外周血淋巴细胞的总
RNA
，将所述总
RNA
反转录为
cDNA
，再用巢式
PCR
进行两轮扩增...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨寒朔，
申请(专利权)人：成都赛恩吉诺生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：