一种针对制造技术

本发明专利技术涉及基因工程技术领域，提供一种针对

【技术实现步骤摘要】
一种针对SFTSV
‑
Gn和CD3的双特异性抗体及其制备方法


[0001]本专利技术涉及基因工程
，尤其涉及一种针对
SFTSV
‑
Gn
和
CD3
的双特异性抗体及其制备方法
。

技术介绍

[0002]发热伴血小板减少综合征病毒
(Severe fever with thrombocytopenia syndrome virus
，
SFTSV)
是一种导致人体患伴有发热
、
血小板减少和白细胞减少等综合性症状的病原体，已经成为公共卫生严重威胁
。SFTSV
的病毒颗粒附着在细胞膜上，通过糖蛋白和宿主细胞之间的相互作用进入细胞，其中
Gn/Gc
糖蛋白广泛地介导它进入人类和动物细胞系
。
感染后的潜伏期通常为5至
14
天
。
发热
、
胃肠道不适
、
血小板减少，在极端情况下，胰腺损伤
、
心肌损伤，甚至中枢神经系统病变和脑炎，都是常见的临床表现
。
[0003]病毒感染伴有抗病毒免疫反应的损害
。T
淋巴细胞是介导细胞免疫反应的主要免疫细胞
。
对
SFTSV
的血清学反应缺陷已被发现与疾病的发病率和病死率相关，而
T
细胞损伤会导致抗病毒免疫的破坏
。
在/>SFTSV
感染的早期过程中，
T
细胞缺乏，特别是在严重疾病的患者，患者
T
细胞的丢失伴随免疫检查点分子的上调，急性
SFTSV
感染期间免疫细胞上的程序性细胞死亡蛋白
1(PD1)
，
T
细胞呈现重度耗竭的表型，这些结果显示发热伴感染急性期患者特别是后续发生死亡的患者中
T
细胞抗病毒免疫被明显的损害
。
[0004]现有可用于治疗
SFTSV
的药物有法匹拉韦
、
硼替佐米
(PS
‑
341)
和六氯酚等，均属于核苷酸类似物
。
法匹拉韦是一种吡嗪衍生物，根据法匹拉韦的小鼠实验，它证明了法匹拉韦提高了在
SFTSV
感染的致死模型中的存活率，而不会导致体重减轻，并降低了血清中的病毒载量，该治疗方法将可用于常规的临床应用；硼替佐米
(PS
‑
341)
是一种二肽硼酸类似物，是一种
FDA
批准的高选择性可逆性蛋白酶体抑制剂，已被证明具有抗病毒活性
。
对
PS
‑
341
的研究表明，
PS
‑
341
处理降低了易感细胞中
SFTSV
的增殖，并抑制了
SFTSV
的复制和释放以及
NSs
介导的
RIG
‑
I
的降解
。
数据显示，
PS
‑
341
通过诱导细胞凋亡来抑制
SFTSV
的复制；六氯酚是通过
ELISA
对
FDA
许可的
1528
种药物进行筛选所得到的一种抗病毒化合物，其活性最好
。
根据机制研究，六氯酚通过干扰细胞膜融合来阻止
SFTSV
进入宿主细胞，通过分子对接研究，预测了六氯酚与
SFTSV Gc
糖蛋白
I
和
III
结构域之间的疏水区的高度稳定结合，六氯酚新发现的抗病毒特性和机制将使其能够作为一种先导分子，进一步增加抗
SFTSV
活性和降低药物毒性
。
[0005]核苷酸类似物的作用机制是它通过与天然核苷酸竞争反转录酶的结合位点而发挥作用，由于与天然核苷酸的结构相似，核苷酸类似物可与反转录酶结合并成为合成中的病毒
DNA
链的一部分，一旦与病毒基因结合，核苷酸类似物即阻止其他核苷酸进入合成中的
DNA
链，从而终止病毒基因的复制
。
但是核苷酸类似物仅能抑制病毒复制而不是杀灭病毒，停药后容易复发，所以需要长期服用，没有确定的疗程
。
而且这类药物可引起病毒耐药变异，一旦出现耐药就需要调整治疗方案；如果出现多重耐药，进一步治疗就会非常棘手
。
[0006]除了小分子核苷酸类似物药物外，研究人员还利用类固醇治疗
、
静脉注射免疫球
蛋白或血浆置换等方法，但这些方法均表现出治疗效果较差和作用机制不明确等特点，还有可能增加并发症的风险
。

技术实现思路

[0007]本专利技术旨在至少解决相关技术中存在的技术问题之一
。
为此，本专利技术提供一种针对
SFTSV
‑
Gn
和
CD3
的双特异性抗体，通过
T
细胞接合器双特异性抗体
(Bispecific T
‑
cell engager
，
BiTE)
可以同时结合
SFTSV
感染细胞膜上的病毒
Gn
包膜蛋白和
T
细胞上的
CD3
受体将
T
细胞重定向到感染细胞并杀死感染细胞，从而发挥抗病毒作用
。
[0008]本专利技术提供一种针对
SFTSV
‑
Gn
和
CD3
的双特异性抗体，所述双特异性抗体的氨基酸序列为
SEQ ID NO
：
1、SEQ ID NO
：2或
SEQ ID NO
：3中的一种
。
[0009]根据本专利技术提供的一种针对
SFTSV
‑
Gn
和
CD3
的双特异性抗体，所述双特异性抗体的氨基酸序列为
SEQ ID NO
：1，所述特异性抗体包括
IL
‑2信号肽
、Anti
‑
Gn scFv、CD3
‑
scFv
和
His
标签区；
[0010]所述
Anti
‑
Gn scFv
为
3A5
‑
scFv
；
[0011]所述
IL
‑2信号肽的氨基酸序列为
SEQ ID NO
：4；
[0012]所述
3A5
‑
scFv
的氨基酸本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种针对
SFTSV
‑
Gn
和
CD3
的双特异性抗体，其特征在于，所述双特异性抗体的氨基酸序列为
SEQ ID NO
：
1、SEQ ID NO
：2或
SEQ ID NO
：3中的一种
。2.
根据权利要求1所述的一种针对
SFTSV
‑
Gn
和
CD3
的双特异性抗体，其特征在于，所述双特异性抗体的氨基酸序列为
SEQ ID NO
：1，所述特异性抗体包括
IL
‑2信号肽
、Anti
‑
Gn scFv、CD3
‑
scFv
和
His
标签区；所述
Anti
‑
Gn scFv
为
3A5
‑
scFv
；所述
IL
‑2信号肽的氨基酸序列为
SEQ ID NO
：4；所述
3A5
‑
scFv
的氨基酸序列为
SEQ ID NO
：
11
；所述
CD3
‑
scFv
的氨基酸序列为
SEQ ID NO
：5；所述
His
标签区的氨基酸序列为
SEQ ID NO
：
6。3.
根据权利要求1所述的一种针对
SFTSV
‑
Gn
和
CD3
的双特异性抗体，其特征在于，所述双特异性抗体的氨基酸序列为
SEQ ID NO
：2，所述特异性抗体包括
IL
‑2信号肽
、Anti
‑
Gn scFv、CD3
‑
scFv
和
His
标签区；所述
Anti
‑
Gn scFv
为
Mab45
‑
scFv
；所述
IL
‑2信号肽的氨基酸序列为
SEQ ID NO
：4；所述
Mab45
‑
scFv
的氨基酸序列为
SEQ ID NO
：
21
；所述
CD3
‑
scFv
的氨基酸序列为
SEQ ID NO
：5；所述
His
标签区的氨基酸序列为
SEQ ID NO
：
6。4.
根据权利要求1所述的一种针对
SFTSV
‑
Gn
和
CD3
的双特异性抗体，其特征在于，所述双特异性抗体的氨基酸序列为
SEQ ID NO
：3，所述特异性抗体包括
IL
‑2信号肽
、Anti
‑
Gn scFv、CD3
‑
scFv
和
His
标签区；所述
Anti
‑
Gn scFv
为
5D4
‑
scFv
；所述
IL
‑2信号肽的氨基酸序列为
SEQ ID NO
：4；所述
5D4
‑
scFv
的氨基酸序列为
SEQ ID NO
：
31
；所述
CD3
‑
scFv
的氨基酸序列为
SEQ ID NO
：5；所述
His
标签区的氨基酸序列为
SEQ ID NO
：
6。5.
根据权利要求2或3或4所...

【专利技术属性】
技术研发人员：黎浩，张宏恺，刘玮，彭学芳，梁跃霞，简易，
申请(专利权)人：南开大学，
类型：发明
国别省市：