一种二氧化硅支架组合物及利用其扩增人制造技术

本发明专利技术公开了一种基于功能化的二氧化硅支架组合物及利用其扩增人肿瘤浸润淋巴细胞

【技术实现步骤摘要】
一种二氧化硅支架组合物及利用其扩增人TIL的方法


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及一种基于功能化的二氧化硅支架组合物及利用其扩增人
TIL
的方法
。

技术介绍

[0002]基于肿瘤浸润淋巴细胞
(TIL)
的过继性细胞疗法
(ACT)
是指从手术切除的患者肿瘤组织中分离
TIL
，
TIL
在体外扩增到一定数量后回输到患者体内从而杀伤肿瘤细胞，引起宿主抗肿瘤免疫应答的一种免疫疗法
。TIL
的扩增培养体系发展至今为止趋于成熟，主要分为两个阶段
。
在第一阶段，从患者切除的肿瘤标本剪碎成2‑
5mm3大小的切块或消化成肿瘤细胞悬液，在含高剂量
IL
‑
2(3000IU/ml
‑
6000IU/ml)
的培养基中扩增培养，第
10
‑
18
天后，淋巴细胞过度增长，肿瘤细胞大量凋亡从而得到较纯的
TIL
细胞群
。
第一阶段所产生的
TIL
在过量辐照的同种异体外周血单个核细胞
(PBMC)、
针对
T
细胞受体的抗
CD3
抗体
(30ng/mL)
和高剂量
IL
‑
2(3000IU/ml
‑
6000IU/ml)
的条件下进入快速扩增阶段
(REP)。
在
14
天的培养期内，
TIL
会扩增至
1000
‑
2000
倍
。
通过这种方法，可以收获多达2×
10
11
个
TIL
以供患者输注
。
[0003]然而，传统的
TIL
扩增方案有一定的局限性
。
首先，
TIL
在体外扩增时需一直处于高剂量
IL
‑2的条件下扩增，而这会引起
TIL
的衰竭和凋亡，杀瘤活性难以持续
。
其次，
TIL
临床回输量大，一般临床上需要回输
10
11
个
TIL
才能达到临床效果
。
再者，不同的肿瘤患者尤其是不同疾病进展期的患者中提取的
TIL
活性差异大，
TIL
的扩增周期和扩增效果可变性高，不可控因素难以把握
。
最后，
TIL
中存在大量无法识别肿瘤抗原的
T
细胞，回输产品中有效杀瘤成分低
。
[0004]因此，需要开发一种新型的
TIL
培养工艺从三个方面进行优化，第一，降低
TIL
对
IL
‑2的依赖，减少
TIL
的衰竭和凋亡
。
第二，高效富集有效杀瘤成分从而降低回输用量
。
第三，提高记忆型
TIL
的产率，以期促进细胞效应的长期存续
。

技术实现思路

[0005]为了解决现有技术中人肿瘤浸润淋巴细胞
(TIL)
体外扩增时依赖
IL
‑
2、
容易衰竭和凋亡
、
很难富集有效杀瘤成分
、TIL
的抗瘤活性及体内存续能力低等问题，本专利技术公开了一种基于功能化的二氧化硅支架组合物及利用其扩增人
TIL
的方法
。
[0006]为解决上述技术问题，本专利技术提供的技术方案之一为：一种功能化的二氧化硅支架组合物，所述二氧化硅支架组合物包括：
(1)
介孔二氧化硅微粒；
(2)
细胞因子组合，包含选自
IL
‑
2、IL
‑
7、IL
‑
15、IL
‑
21
等
γ
链细胞因子中的两种或两种以上的细胞因子
。
[0007]具体地，所述细胞因子组合包含选自
IL
‑
2、IL
‑
7、IL
‑
15
和
IL
‑
21
中的两种或两种以上的细胞因子
。
[0008]介孔二氧化硅微粒可高吸附各种细胞因子，
IL
‑2等细胞因子随着支架的降解逐渐释放，避免
TIL
因高剂量
IL
‑2等细胞因子的刺激下引起的衰竭及凋亡
。
为提高活性
TIL
的扩增效率及产量，
IL
‑7等细胞因子的补充能大幅降低
TIL
对
IL
‑2的依赖，提高记忆型
TIL
的产
率，促进细胞的长期存续
。
即，二氧化硅微粒细胞因子缓释体系既可降低
TIL
对
IL
‑2的依赖性同时提高
TIL
的扩增效率，又能在原有技术基础上增强
TIL
的杀瘤活性及记忆性能从而高效富集有效成分
。
[0009]如本专利技术技术方案之一所述的二氧化硅支架组合物，所述细胞因子组合包含选自
IL
‑
2、IL
‑
7、IL
‑
15
和
IL
‑
21
中的三种细胞因子
。
[0010]在本专利技术的较佳实施方案中，所述细胞因子组合包含细胞因子
IL
‑
2、IL
‑7和
IL
‑
15。
[0011]为更大程度地优化支架扩增
TIL
的效果，已装载细胞因子的二氧化硅微棒按固定比例混合
。
[0012]在本专利技术的更佳实施方案中，所述细胞因子组合中各细胞因子的质量比为
IL
‑
2:IL
‑
7:IL
‑
15
＝
1:(0.05
～
0.3):(0.05
～
0.3)
，优选
IL
‑
2:IL
‑
7:IL
‑
15
＝
1:(0.1
～
0.3):(0.1
～
0.3)。
[0013]在本专利技术的具体实施方案中，所述细胞因子组合中各细胞因子的质量比为
IL
‑
2:IL
‑
7:IL
‑
15<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种功能化的二氧化硅支架组合物，其特征在于，所述二氧化硅支架组合物包括：
(1)
介孔二氧化硅微粒；
(2)
细胞因子组合；包含选自
IL
‑
2、IL
‑
7、IL
‑
15
和
IL
‑
21
中的两种或两种以上的细胞因子
。2.
如权利要求1所述的二氧化硅支架组合物，其特征在于，所述细胞因子组合包含选自
IL
‑
2、IL
‑
7、IL
‑
15
和
IL
‑
21
中的三种细胞因子；较佳地，所述细胞因子组合包含细胞因子
IL
‑
2、IL
‑7和
IL
‑
15
；更佳地，所述细胞因子组合中各细胞因子的质量比为
IL
‑
2:IL
‑
7:IL
‑
15
＝
1:(0.05
～
0.3):(0.05
～
0.3)
，优选
IL
‑
2:IL
‑
7:IL
‑
15
＝
1:(0.1
～
0.3):(0.1
～
0.3)
；进一步更佳地，所述细胞因子组合中各细胞因子的质量比为
IL
‑
2:IL
‑
7:IL
‑
15
＝
1:0.1:0.1。3.
如权利要求1所述的二氧化硅支架组合物，其特征在于，所述细胞因子组合包含
IL
‑
2、IL
‑
7、IL
‑
15
和
IL
‑
21
四种细胞因子；较佳地，所述细胞因子组合中各细胞因子的质量比为
IL
‑
2:IL
‑
7:IL
‑
15:IL
‑
21
＝
1:(0.05
～
0.5):(0.05
～
0.5):(0.1
～
1)
；更佳地，所述细胞因子组合中各细胞因子的质量比为
IL
‑
2:IL
‑
7:IL
‑
15:IL
‑
21
＝
1:(0.1
～
0.3):(0.1
～
0.3):(0.1
～
0.5)
；进一步更佳地，所述细胞因子组合中各细胞因子的质量比为
IL
‑
2:IL
‑
7:IL
‑
15:IL
‑
21
＝
1:0.1:0.1:0.5。4.
如权利要求1～3任一项所述的二氧化硅支架组合物，其特征在于，所述二氧化硅支架组合物表面还包裹了脂质体；较佳地，所述二氧化硅支架组合物与脂质体的质量比为
1:0.8
～
1:1.2
，优选
1:1
；更佳地，所述脂质体选自
POPC
和
Cap PE
；进一步更佳地，
POPC:Cap PE
的摩尔比为
1000:1
～
1100:1
，优选
1010:1。5.
如权利要求1～3任一项所述的二氧化硅支架组合物，其特征在于，所述介孔二氧化硅微粒为
SBA
‑
15
型介孔分子筛，和
/
或，所述介孔二氧化硅微粒为直棒状结构；优选地，所述介孔二氧化硅微粒的棒长为
70
±
40
μ
m
，棒宽为4±
2.5
μ
m
，中孔大小为3±
2.5nm
，例如棒长为
70.43
±
31.66
μ
m。6.
如权利要求1～3任一项所述的二氧化硅支架组合物，其特征在于，所述介孔二氧化硅微粒在吸附细胞因子之前，需要去除模板剂，所述去除模板剂的方法优选化学萃取法；较佳地，所述化学萃取法为使用盐酸
‑
乙醇溶液进行萃...

【专利技术属性】
技术研发人员：周佩佩，刘莉，吕新越，刘翔，
申请(专利权)人：中国医药工业研究总院有限公司，
类型：发明
国别省市：