槐角制品的物质评价方法技术

本发明专利技术公开了一种槐角制品的物质评价方法

【技术实现步骤摘要】
槐角制品的物质评价方法、药物组合物和应用


[0001]本专利技术涉及一种槐角制品的物质评价方法
、
药物组合物和应用
。

技术介绍

[0002]槐角为豆科植物槐
Sophora japonica L.
的干燥成熟果实，性寒
、
味苦，归肝
、
大肠经
。
具有清热泻火
、
凉血止血的功效，用于肠热便血
、
痣肿出血，肝热头痛
、
眩晕目赤等症
。
槐角主要成分有黄酮
、
异黄酮
、
生物碱
、
三萜皂苷
、
氨基酸及硬脂酸类等，其中以异黄酮及其苷类含量最高
。
槐角具有防癌抗癌及雌性激素样作用，对癌症
、
心血管疾病
、
骨质疏松和女性更年期综合征有很好的防治作用
。
槐角生品清热凉血力较强，用于凉血止血
。
槐角炭寒性大减，长于收敛止血
。
槐角经炮制其外型
、
功效都发生了变化，推测可能与炒炭过程中活性物质的改变相关
。
槐角炭在经典名方凉血地黄汤中为君药使用，而在验方选集
、
杨氏家藏方等中都有关于槐角炭的应用记载
。
目前对于槐角炭的炮制研究还不够系统深入，槐角炭存性标准尚未统一，仅凭主观经验判别，各地的炮制品质量相差很大，致使临床作用也相差很大
。
目前对槐角炒炭前后的成分鉴别研究较少，尚无对槐角炭止血物质基础的分析
。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的在于针对目前缺乏的有效高效的评价槐角制品止血作用的方法，提供了一种槐角制品的物质评价方法
、
药物组合物和应用，本专利技术基于谱效关系的槐角制品止血作用物质评价方法可以快速
、
准确地评价槐角制品止血成分，进行活性成分筛选，为槐角制品的药效物质基础研究及质量控制提供科学有效的方法
。
[0004]本专利技术主要通过以下技术方案解决上述技术问题
。
[0005]本专利技术提供了一种槐角制品的物质评价方法，其包括以下步骤：
[0006]S1、
采用液相色谱法，建立不同炮制时间的槐角制品的指纹图谱；并提取共有特征峰；
[0007]S2、
测定不同炮制时间的槐角制品的止血效果；
[0008]S3、
根据不同炮制时间的槐角制品的特征峰数据与其止血效果数据，经化学计量学方法进行统计分析，评价槐角制品中止血作用的药效物质基础；
[0009]步骤
S1
中，所述液相色谱法中，色谱条件如下：
[0010]色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；
[0011]流动相包括流动相
A
与流动相
B
，所述流动相
A
为甲酸溶液，所述流动相
B
为甲醇；
[0012]采用梯度洗脱的方式，以所述流动相的总体积为
100
％计，所述梯度洗脱的程序按下表的顺序从上到下依次进行：
[0013]洗脱时长
/
分钟流动相
A
流动相
B8
‑
1290
％
→
80
％
10
％
→
20
％
15
‑
2080
％
→
60
％
20
％
→
40
％2‑5保持
60
％保持
40
％
8
‑
1260
％
→
40
％
40
％
→
60
％2‑5保持
40
％保持
60
％5‑
840
％
→
20
％
60
％
→
80
％1‑4保持
20
％保持
80
％
12
‑
18
保持
90
％保持
10
％
[0014]其中，所述洗脱时长为该洗脱阶段的洗脱终点时间与洗脱起点时间的差值
。
[0015]步骤
S1
中，所述液相色谱可为高效液相色谱
(HPLC)
或超高效液相色谱
(UPLC)。
[0016]步骤
S1
中，所述不同炮制时间的槐角制品可包括：炮制时间分别为
0、5、9、12、15、20、30
和
50min
的槐角制品中的两种以上
。
[0017]步骤
S1
中，所述槐角制品可通过本领域常规的方法制备，例如通过以下方法制备：将槐角生品进行炒制
。
较佳地，所述炒制的温度为
200
‑
300℃
，例如
200℃。
较佳地，所述炒制的时间为5‑
50min
；例如
5、9、12、15、20、30
或
50min。
[0018]步骤
S1
中，所述色谱柱可为
Waters ACQUITY CSH C18
色谱柱
(
规格可为
150mm
×
2.1mm,1.7
μ
m)、1
‑
ACQUITY CSH C18
色谱柱
(
规格可为
150mm*2.1mm,1.7
μ
m)
或2‑
Hypersi1 Gold(
规格可为
100*2.1mm,1.9
μ
m)
色谱柱；优选为
Waters ACQUITY CSH C18
色谱柱
(
规格可为
150mm
×
2.1mm,1.7
μ
m)。
[0019]步骤
S1
中，所述梯度洗脱的程序可如下表所示：
[0020]时间
/
分钟流动相
A/
体积百分比流动相
B/
体积百分比0‑
990
％
→
80
％
10
％
→
20
％9‑
2780
％
→
60
％
20
％
→
40
％
27
‑...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
槐角制品的物质评价方法，其包括以下步骤：
S1、
采用液相色谱法，建立不同炮制时间的槐角制品的指纹图谱，并提取共有特征峰；
S2、
测定不同炮制时间的槐角制品的止血效果；
S3、
根据不同炮制时间的槐角制品的特征峰数据与其止血效果数据，经化学计量学方法进行统计分析，评价槐角制品中止血作用的药效物质基础；步骤
S1
中，所述液相色谱法中，色谱条件如下：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；流动相包括流动相
A
与流动相
B
，所述流动相
A
为甲酸溶液，所述流动相
B
为甲醇；采用梯度洗脱的方式，以所述流动相的总体积为
100
％计，所述梯度洗脱的程序按下表的顺序从上到下依次进行：洗脱时长
/
分钟流动相
A
流动相
B8
‑
1290
％
→
80
％
10
％
→
20
％
15
‑
2080
％
→
60
％
20
％
→
40
％2‑5保持
60
％保持
40
％8‑
1260
％
→
40
％
40
％
→
60
％2‑5保持
40
％保持
60
％5‑
840
％
→
20
％
60
％
→
80
％1‑4保持
20
％保持
80
％
12
‑
18
保持
90
％保持
10
％其中，所述洗脱时长为该洗脱阶段的洗脱终点时间与洗脱起点时间的差值
。2.
如权利要求1所述的槐角制品的物质评价方法，其特征在于，所述的槐角制品的物质评价方法满足下述条件中的一个或两个以上：
(1)
步骤
S1
中，所述色谱柱为
Waters ACQUITY CSH C18
色谱柱
(
规格可为
150mm
×
2.1mm,1.7
μ
m)、1
‑
ACQUITY CSH C18
色谱柱
(
规格可为
150mm*2.1mm,1.7
μ
m)
或2‑
Hypersi1 Gold(
规格可为
100*2.1mm,1.9
μ
m)
色谱柱；较佳地，所述色谱柱为
Waters ACQUITY CSH C18
色谱柱
(
规格可为
150mm
×
2.1mm,1.7
μ
m)
；
(2)
步骤
S1
中，所述色谱条件中，检测波长为
210
‑
300nm
，例如检测波长为
230、254
或
280nm
，优选波长为
280nm
；
(3)
步骤
S1
中，所述色谱条件中，流速为
0.12
‑
0.18mL/min
；例如
0.12mL/min、0.15mL/min
和
0.18mL/min
；优选为
0.12
‑
0.15mL/min
；
(4)
步骤
S1
中，所述色谱条件中，柱温为
30
‑
40℃
；例如
30℃、35℃
或
40℃
；优选为
35℃
；
(5)
步骤
S1
中，所述共有特征峰包括以下保留时间的特征峰：
5.60
±
0.05min、6.56
±
0.01min、19.83
±
0.01min、28.24
±
0.06min、33.60
±
0.04min、34.99
±
0.05min、36.28
±
0.05min、37.45
±
0.05min、41.63
±
0.07min、43.58
±
0.03min
和
44.34
±
0.04min
；
(6)
步骤
S2
中，所述止血效果包括鼠尾出血时间，凝血时间和凝血四项中的一个或多个；和
(7)
步骤
S3
中，槐角制品中发挥止血作用的物质基础包括没食子酸
、
对羟基苯甲醇
、
没食子酸甲酯
、
二氢山柰酚
‑3‑
O
‑
葡萄糖苷
、
山柰酚
‑3‑
O
‑
(2
″‑
O
‑
β
‑
D
‑
葡萄糖基
)
‑
β
‑
D
‑
芸香糖苷
、
山柰酚
‑3‑
O
‑
槐糖
、
二氢芹菜素
‑7‑
O
‑
葡萄糖苷
、
芦丁
、
芹菜素
‑7‑
O
‑
芸香糖苷
、
异鼠李素
‑
3
‑
O
‑
β
‑
D
‑
芸香糖苷
、
山柰酚
‑3‑
O
‑
芸香糖苷，柃木花甙和染料木素
‑4′‑
O
‑
(6
″‑
乙酰基
)
‑
葡萄糖苷中的一种或多种
。3.
如权利要求1所述的槐角制品的物质评价方法，其特征在于，所述的槐角制品的物质评价方法满足下述条件中的一个或两个以上：
(1)
步骤
S1
中，所述流动相
A
中甲酸为
0.05
‑
0.5
％甲酸溶液，例如
0.05
％甲酸溶液；
(2)
步骤
S1
中，所述梯度洗脱的程序如下表所示：时间
/
分钟流动相
A/
体积百分比流动相
B/
体积百分比0‑
990
％
→
80
％
10
％
→
20
％9‑
2780
％
→
60
％
20
％
→
40
％
27
‑
3060
％
40
％
30
‑
3960
％
→
40
％
40
％
→
60
％
39
‑
4240
％
60
％
42
‑
4840
％
→
20
％
60
％
→
80
％
48
‑
5020
％
80
％
50
‑
50.120
％
→
90
％
80
％
→
10
％
50.1
‑
6590
％
10
％
(3)
步骤
S1
中，所述色谱条件中，检测器为
UV
‑
DAD
检测器；
(4)
步骤
S1
中，所述色谱条件中，进样量为1‑5μ
l
，例如进样量为1μ
L
；
(5)
步骤
S1
中，所述色谱条件中，进样浓度为
0.004
‑
0.1g/mL
，例如
0.025g/mL
；
(6)
步骤
S1
中，在进样前对槐角制品进行预处理，所述预处理包括下述步骤：将所述槐角制品溶解于溶剂中；所述溶剂可为甲醇；进一步地，所述预处理步骤中，还包括以下步骤：将槐角制品加水
(200mL)
浸泡
(30min)、
煎煮
(
煮沸后煎煮
30min
加入
160mL
水继续煎煮
20min)、
过滤
、
滤液浓缩后冷冻干燥，得槐角制品的冻干粉末，以冻干粉末的形式溶解于所述溶剂中；和
(7)
所述共有特征峰还包括保留时间如下一个或多个的特征峰：
5.31
±
0.01min
，
9.14
±
0.03min
，
11.31
±
0.02min
，
16.89
±
0.01min
，
22.97
±
0.04min
，
25.92
±
0.01min
，
27.44
±
0.02min
，
27.91
±
0.02min
，
30.14
±
0.05min
，
30.53
±
0.03min
，
32.78
±
0.02min
，
33.15
±
0.03min
，
34.06
±
0.03min
，
34.70
±
0.03min
，
35.96
±
0.06min
，
38.27
±
0.05min
，
39.89
±
0.06min
，
40.90
±
0.04min
，
42.09
±
0.05min
，
43.35
±
0.02min
，
44.60
±
0.03min
，
45.31
±
0.03min
，
46.28
±
0.02min
，
46.74
±
0.04min
和
49.21
±
0.04min。4.
如权利要求1所述的槐角制品的物质评价方法，其特征在于，步骤
S3
中，采用
Pearson
双变量相关分析法，将所述共有特征峰的峰面积与止血效果数据之间进行相关性分析，并通过多元线性回归建立谱效方程，从而判断槐角制品止血作用的物质基础
。5.
如权利要求4所述的槐角制品的物质评价方法，其特征在于，所述的槐角制品的物质评价方法满足下述条件中的一个或两个以上：
(1)
保留时间为
5.60
±
0.05min、6.56
±
0.01min、19.83
±
0.01min、28.24
±
0.06min、33.60
±
0.04min、34.99
±
0.05min、36.28
±
0.05min、37.45
±
0.05min、41.63
±
0.07min、43.58
±
0.03min
和
44.34
±
0.04min
的特征峰与止血效果呈现较好的相关性；较佳地，保留时间为
5.60
±
0.05min
的特征峰为没食子酸，保留时间为
6.58min
的特征
峰为对羟基苯甲醇，保留时间为
19.83
±
0.01min
的特征峰为没食子酸甲酯，保留时间为
28.24
±
0.06min
的特征峰为二氢山柰酚
‑3‑
O
‑
葡萄糖苷，保留时间为
33.60
±
0.04min
的特征峰为山柰酚
‑3‑
O
‑
(2
”‑
O
‑
β
‑
D
‑
葡萄糖基
)
‑
β
‑
D
‑
芸香糖苷，保留时间为
34.99
±
0.05min
的特征峰为山柰酚
...

【专利技术属性】
技术研发人员：欧阳丹薇，何自会，刘沫，任俊璇，
申请(专利权)人：中国医药工业研究总院有限公司，
类型：发明
国别省市：