一种麝香通心滴丸中胆酸类入血成分的定量检测方法技术

本发明专利技术提供一种麝香通心滴丸中胆酸类入血成分的定量检测方法，具体采用超高效液相色谱

【技术实现步骤摘要】
一种麝香通心滴丸中胆酸类入血成分的定量检测方法


[0001]本技术方案属于复方中药成分检测领域，具体涉及麝香通心滴丸入血成分的定量检测
。

技术介绍

[0002]麝香通心滴丸由人工麝香
、
人参茎叶总皂苷
、
蟾酥
、
丹参
、
熊胆粉
、
人工牛黄和冰片7味药材组成，具有芳香开窍
、
益气温阳
、
理气止痛之效，用于冠心病稳定型劳累性心绞痛，中医辨证气虚血瘀证，症见胸痛胸闷，心悸气短，神倦乏力
。
其中，人工麝香和蟾酥芳香通脉
、
缓急止痛，为君药；人参茎叶总皂苷和丹参补益心气
、
活血化瘀，为臣药；人工牛黄和熊胆粉清脉凉开
、
化痰逐淤，为佐药；冰片开窍醒神，与麝香相须为用，引诸药入心络
。
[0003]“血清药物化学”这一理论最先由德国科学家格哈德
·
多马克提出，后由我国科学家王喜军教授提出符合中医药理论的中药血清药物化学
。
中药化学成分极其复杂，口服后部分成分经肠道和肝脏代谢酶代谢后吸收入血进而发挥效应
。
人工牛黄和熊胆粉作为佐药，具有引导诸药至病所，协助君
、
臣药以加强治疗的作用，对应的入血成分对疾病治疗发挥着重要作用
。
[0004]人工牛黄与熊胆粉中均有胆酸类成分
。
其中，人工牛黄由牛胆粉
、<br/>胆酸
、
猪去氧胆酸
、
牛磺酸
、
胆红素
、
胆固醇
、
微量元素等加工制成
。
对应胆酸类成分包括甘氨胆酸
、
牛磺胆酸
、
甘氨鹅去氧胆酸
、
牛磺去氧胆酸
、
鹅去氧胆酸
、
去氧胆酸等
。
熊胆粉中牛磺熊去氧胆酸
(TUDCA)
和牛磺鹅去氧胆酸
(TCDCA)
的含量最高，二者的含量占比高达
90
％以上
。
此外，熊去氧胆酸
(UDCA)
是熊胆粉的特征性成分，同时也是现代医学治疗胆汁淤积性疾病的临床一线药物
(
商品名：优思弗
)。
胆酸类入血成分的定量检测对药品有效成分的研究和药代动力学研究具有重要意义
。
[0005]麝香通心滴丸的胆酸类入血成分定性检测方法已有公开，但定量检测暂无报道
。《
基于血清药物化学与网络药理学探究麝香通心滴丸治疗冠心病的机制
》(
中成药，
2020,42(10),2768
‑
2777)
公开了血清样本用甲醇提取，浓缩后经
HPLC
‑
Q
‑
TOF/MS
联用检测
。
其中，
Hydro
‑
RP C18
色谱柱
(250mm
×
4.6mm,4
μ
m)
；流动相
0.4
％甲酸乙腈
‑
0.2
％甲酸，梯度洗脱；离子源
ESI
，扫描方式
ESI+/ESI
‑
模式；干燥气体温度
320℃
，体积流量
10L/min
，鞘气温度
350℃
，体积流量
12L/min
，碎裂能量
175V
，毛细管电压
3kV
，正负离子采集范围
m/z 50
～
1500。
该技术方案能定性检测沙蟾毒精，牛磺胆酸，远华蟾毒精，甘氨胆酸，去乙酰华蟾毒精，蟾毒灵，熊去氧胆酸和脂蟾毒配基
。
但该技术方案能同步检测的胆酸类入血成分种类较少，且无法定量
。
[0006]麝香通心滴丸药物成分的定量检测也有报道，但检测的胆酸种类较少
。《Qualitative and Quantitative Analysis of the Major Constituents in Shexiang Tongxin Dropping Pill by HPLC
‑
Q
‑
TOF
‑
MS/MS and UPLC
‑
QqQ
‑
MS/MS(HPLC
‑
Q
‑
TOF
‑
MS/MS
和
UPLC
‑
QqQ
‑
MS/MS
定性定量分析麝香通心滴丸中主要成分
)》(Molecules.2015,20(10):18597
‑
619)
中采用流动相乙腈和水梯度洗脱，对麝香通心滴丸提取物进行主要成分分析，
定量检测了人参皂苷
Rg1
，人参皂苷
Rk3
，华蟾毒精，沙蟾毒精，蟾毒灵，脂蟾毒配基，丹参酮
IIA
，牛磺酸，牛磺熊去氧胆酸，牛磺胆酸，胆酸，去氧胆酸和鹅去氧胆酸
。
但入血成分不等于药物成分原型
。
药物原型化合物入血后根据代谢途径不同
、
酶种类不同
、
酶解程度不同会产生不同的代谢产物，不能通过药物原型结构式进行简单推断
。
因此，用于药物成分原型的检测方法不一定适用于入血成分的检测
。
[0007]此外，其他内源性成分的干扰加大了胆酸入血成分的检测难度
。CN113960222A“基于血清样本的胆汁酸全通路代谢轮廓的检测方法及其应用”(
申请日：
2021.12.23
；公开日：
2022.01.21)
采用液相色谱的条件包括：流动相为
A
：
0.1
％甲酸
‑
水，
B
：
0.1
％甲酸
‑
乙腈；色谱柱为碳十八柱，流速为
0.4mL/min
，柱温为
40℃
，质谱的条件包括：检测时间0～
19.5min
，离子扫描范围
50
～
1200Da
，碰撞能量
20
～
50V
，锥孔电压
25V
，脱溶剂气流速
800L/h
，脱溶剂气温度
450℃
，锥孔气流速
50L/h
，离子源温度
100℃
，毛细管电压
2kV
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种麝香通心滴丸中胆酸类入血成分的定量检测方法，其特征在于，所述检测方法包括超高效液相色谱
‑
串联质谱分析，其中液相色谱条件中采用碳十八填料色谱柱，流动相
A
为
0.05
％～
0.2
％甲酸水，流动相
B
为
0.05
％～
0.2
％甲酸乙腈，梯度洗脱程序如下：时间
(min)B(
％
)037
～
439.567
～
739.637
～
431137
～
43
柱温
30
～
40℃
，流速为
0.1
～
0.3mL/min
；所述质谱分析条件包括：电喷雾离子源，负离子模式，多反应监测模式，干燥气温度为
300
～
400℃
，干燥气流量为4～
8L/min
，鞘气温度为
300
～
400℃
，鞘气流量为8～
12L/min
，雾化气压力为
40
～
50psi
，毛细管入口电压为3～
4kV
，锥孔电压为
450
～
550V
，碰撞能量
10
～
40eV
，碎裂电压
100
～
250V。2.
根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述胆酸类入血成分的质谱参数如下：编号化合物
m/z
碎裂电压
(V)
碰撞能量
(eV)1
牛磺猪去氧胆酸
498.1
→
498.1200152
牛磺熊去氧胆酸
498.2
→
498.2200103
牛磺胆酸
514.2
→
514.2200154
甘氨胆酸
464.3
→
464.3200155
甘氨猪去氧胆酸
448.3
→
448.3200156
牛磺鹅去氧胆酸
498.1
→
498.1250207
牛磺脱氧胆酸
498.1
→
498.1200158
胆酸
407.3
→
342.9200359
甘氨鹅去氧胆酸
...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋永标，徐春玲，潘红烨，赵洁平，黄妍，侯一哲，卢晓玮，
申请(专利权)人：内蒙古康恩贝药业有限公司，
类型：发明
国别省市：