本发明专利技术是涉及生物应用技术领域，特别是涉及一种甲型Ｈ１Ｎ１流感病毒Ｈ１Ｎ１ＩｇＭ和总抗体联合快速检测试纸，采用胶体金标记甲型Ｈ１Ｎ１流感病毒抗原，包被抗人ＩｇＭ和甲型Ｈ１Ｎ１流感病毒抗原实现对血液中抗甲型Ｈ１Ｎ１流感病毒抗体的检测。具有操作简便、反应快速、敏感性高、特异性强、适合现场检测和经济实用等优点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术是涉及生物应用
，特别是涉及一种以胶体金免疫层析法快速检测 甲型HlNl流感病毒IgM和总抗体快速检测试纸。
技术介绍
甲型HlNl流感病毒是一种新型的流感病毒，2009年在世界范围内大流行，严重 危害人类的健康。其"Ha"指的是血球凝集素(Hemagglutinin) 、"Na"指的是神经氨酸酶 (Neuraminidase),甲型流感病毒H有1 15型，有1 9型。HlNl是甲型流感病毒的一 种，也是危害最大的病毒之一。在历史上曾造成数次大流行。 目前对甲型H1N1流感检测的主要方法是PCR基因扩增诊断方法，鼻咽试纸抗原诊 断方法等。在抗体检测方面，有ELISA等检测方法，但用胶体金类免疫层析技术对甲型HlNl IgM抗体进行检测尚未有相关报道。 对HlNl IgM和总抗体抗体检测主要有已下作用1 :对HlNl流感进行辅助诊断。 部分HlNl感染的病程较长，可达2周已上，而IgM在5-7天时即可检测出来，并且IgM的存 在时间较短，是现症感染的标志，对疾病的治疗有重要的作用；若检测只有IgG抗体而没有 IgM抗体，则是既往感染，可排除现症感染。对免疫接种的效果进行评价，从数据上看，目前 HlNl接种的有效率约为90%，尚有10%的人需要筛选出来重新接种或用其它方式进行该 病的预防。IgM的早期检出和IgG长期存能从两个方面评价疫苗的反应性和有效性。考虑 到感染和接种的人群巨大，运用一种快速、简便、有效的抗体检测方法是必要的。 免疫层析胶体金技术是新型的诊断技术，在抗体检测方面已得到较为广泛运用， 基本原理如下利用胶体金标记一种抗原或抗体，在试剂的NC膜上包被相应的配对抗原或 抗体，检测时当样品中含相应的特异性抗体或抗原时，胶体金标记颗粒和样品中配体相结 合形成复合物，然后在NC膜上层析，再被包被抗原或抗体捕获，形成肉眼可见的检测T线， 通过检测线的有无实现对结果的判定。具有操作简便、反应快速、敏感性高、特异性强、适合 现场检测和经济实用等优点。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种甲型HlNl流感病毒IgM和总抗体快速检测试纸，具有操作简便、反应快速、敏感性高、特异性强、适合现场检测和经济实用等优点。 本专利技术提供一种甲型H1N1流感病毒IgM和总抗体快速检测试纸，其特征在于塑料 支撑板8 —端连接上样垫1，上样垫1的一端紧密压接含有标记HlNl特异性的血球凝集素 Ha或HlNl特异性的血球凝集素Ha和神经氨酸酶Na抗原的胶体金垫2，胶体金垫2 —端紧 密压接硝酸纤维素NC膜3，硝酸纤维素NC膜3包被有相互分离的检测线T15、检测线T26 和质控C线，检测线T15为包被在NC膜上的抗人IgM抗体，检测线T26为包被在NC膜上的 HlNl特异性的血球凝集素Ha或HlNl特异性的血球凝集素Ha和神经氨酸酶Na抗原，质控 C线7为包被在NC膜上的抗HlNl抗体，硝酸纤维素NC膜3的另一端连接吸样垫4形成试3纸。 所述的甲型H1N1流感病毒IgM和总抗体快速检测试纸，其特征在于所述的抗原为 H1N1特异性的血球凝集素(Ha)和神经氨酸酶(Na)抗原，抗原可以从H1N1病毒中纯化提取 或利用基因工程重组表达。 所述的甲型H1N1流感病毒IgM和总抗体快速检测试纸，其特征在于所述的上样垫 1为玻璃纤维膜或无纺布，吸样垫4由吸水滤纸构成。 所述的甲型H1N1流感病毒IgM和总抗体快速检测试纸，其特征在于，所述的抗原 的包被方法为以0. 01M pH 7. 2磷酸盐缓冲液(PBS)将抗人IgM抗体配制成l_2mg/ml的 溶液，以0. 01M pH 7. 2磷酸盐缓冲液(PBS)将抗人H1N1特异性的血球凝集素(Ha)和或神 经氨酸酶(Na)抗原配制成0. 5-2mg/ml的溶液，用喷膜仪在NC膜下部以lul/cm的参数进 行划线，包被T1、T2线，同时在NC膜上部包被抗H1N1抗体作为C线，划线后将NC膜在干燥 间温度20-25。C，湿度小于30%干燥2-5小时。 所述的甲型H1N1流感病毒IgM和总抗体快速检测试纸，其特征在于，所述的混合 抗原标记胶体金颗粒的方法为以氯金酸_柠檬酸三钠还原法制备直径为30-50nm的胶体 金溶液，制备完成后取100ml胶体金液放在烧杯内，用0. 2M K2C03调至pH8. 0，按100ml胶 体金溶液加入O. 5-2mg H1N1特异性的血球凝集素(Ha)和(或)神经氨酸酶(Na)抗原，室 温搅拌2小时，加入1%牛血清白蛋白BSA，O. 1X聚乙二醇PEG20000封闭20min， 12000r/m 离心30分钟，弃上清，用胶体金工作液复溶至100ml，按lml溶液铺22cm2的比例均匀地铺 在玻璃纤维膜或无纺布上，再置干燥间温度20-25t:，湿度小于30%干燥2-4小时，制成胶 体金垫。 所述的甲型H1N1流感病毒IgM和总抗体快速检测试纸，其特征在于所述的试纸的 装配方法为在干燥室内(温度20-25t:，湿度小于30X)，取塑料支撑板板，将已包被的NC 膜放置在塑料支撑板的中部粘贴，在NC膜T线一侧搭接胶体金垫(搭胶体金垫的1/3)粘 贴，在胶体金垫另一侧搭接粘贴上样垫(搭胶体金垫的1/5);在NC膜C线一侧搭接吸样垫 (搭吸样垫的1/10);最后用裁剪机将贴好塑料板切成2-5mm宽的试纸条。切好的试纸条可 以再装入塑料卡内，形成检测卡。 所述的甲型H1N1流感病毒IgM和总抗体快速检测试纸，其特征在于，检测方法为 将被检血清或血浆平衡至温室，将试纸条或试剂卡平放，在上样垫上加入50-100ul被检样 品，样品溶解胶体金并在NC膜上层析，然后用肉眼直接观察在20分钟内C、 T线的出现情 况，并判定检测结果。 本专利技术的有益效果是提供一种利用免疫层析胶体金技术检测甲型H1N1流感病 毒IgM和总抗体快速检测试纸。采用胶体金标记甲型H1N1流感病毒抗原，包被抗人IgM和 甲型H1N1流感病毒抗原实现对血液中抗甲型H1N1流感病毒抗体的检测。具有操作简便、 反应快速、敏感性高、特异性强、适合现场检测和经济实用等优点。附图说明 图1甲型H1N1流感病毒IgM和总抗体快速检测试纸结构示意图。 附图符号说明 1 :上样垫;2 :胶体金垫;3 :NC膜;4 :吸样垫4 5 :检测线Tl ;6 :检测线T2 ;7 :质控(C)线;8 :塑料支撑板 具体实施例方式实施例制备甲型H1N1流感病毒IgM和总抗体快速检测试纸 1主要材料 1. 1特异性甲型H1N1流感病毒Ha抗原Sino Biological Inc.产品，为重组抗 原，用于胶体金标记；鼠抗人IgM:军事医学科学院产品，抗Ha抗体，用Ha免疫山羊自制，用 于NC膜包被；氯金酸Sigma公司产品；硝酸纤维素(NC)膜Millipore公司产品；牛血清 白蛋白(BSA)，聚乙二醇PEG20000，水解酪蛋白Sigma产品。其它常用试剂均为分析纯试 剂。 1. 2临床血清由公司在相关医院获得，其中在近期接种H1N1疫苗样本80份，未接 种疫苗样本120份。 1. 3甲型H1N1流感病毒IgM和IgG ELISA试剂盒，Sino Biological Inc.产品。 2方法 2. 1甲型H1N1流本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种甲型Ｈ１Ｎ１流感病毒ＩｇＭ和总抗体快速检测试纸，其特征在于塑料支撑板（８）一端连接上样垫（１），上样垫（１）的一端紧密压接含有标记Ｈ１Ｎ１特异性的血球凝集素Ｈａ或Ｈ１Ｎ１特异性的血球凝集素Ｈａ和神经氨酸酶Ｎａ抗原的胶体金垫（２），胶体金垫（２）一端紧密压接硝酸纤维素ＮＣ膜（３），硝酸纤维素ＮＣ膜（３）包被有相互分离的检测线Ｔ１（５）、检测线Ｔ２（６）和质控Ｃ线，检测线Ｔ１（５）为包被在ＮＣ膜上的抗人ＩｇＭ抗体，检测线Ｔ２（６）为包被在ＮＣ膜上的Ｈ１Ｎ１特异性的血球凝集素Ｈａ或Ｈ１Ｎ１特异性的血球凝集素Ｈａ和神经氨酸酶Ｎａ抗原，质控Ｃ线（７）为包被在ＮＣ膜上的抗Ｈ１Ｎ１抗体，硝酸纤维素ＮＣ膜（３）的另一端连接吸样垫（４）形成试纸。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李洲，杨发青，
申请(专利权)人：天津中新科炬生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：12[中国|天津]
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。