纳米抗体农药残留检测试纸条制造技术

本发明专利技术提供一个构建纳米抗体农药残留检测试纸条的技术方案

【技术实现步骤摘要】
纳米抗体农药残留检测试纸条


[0001]本专利技术涉及抗体技术和生物医药领域，特别是将纳米抗体应用于农药残留的快速检测
。

技术介绍

[0002]抗体对抗原具有特异性结合的能力，能够识别不同的蛋白大分子化合物和与载体蛋白偶联的小分子化合物，在检测和诊断领域有广泛的应用，市场上不乏针对各种蛋白和小分子化合物偶联蛋白的抗体
。
在检测方面，食品安全监管需要及时检测农药残留（如克百威
、
氟虫腈）
、
非法添加物（如三聚氰胺）等，各种基于免疫层析原理的快速检测试纸条由于简单
、
方便
、
快速
、
价廉，在食品监管上发挥了巨大作用
。
在临床诊断方面，免疫检测是重要的检测技术
。
在治疗药物方面，抗体已经成为重要的药物种类，不仅抗体本身可以作为药物，而且抗体药物还包括了由抗体衍生的抗体
‑
毒素蛋白偶联体（
immunotoxin
）
、
抗体
‑
药物偶联体（
antibody
‑
drug conjugate, ADC
）
、
双抗和多抗（
bispecific antibody, multi
‑
specific antibody
），等
。
[0003]抗体分为多克隆抗体和单克隆抗体，我们统称为常规抗体
。
多克隆抗体由免疫动物产生，为抗体的混合物，各批次间的抗体组成不同，效价有差异
。
单克隆抗体由单一基因产生，动物细胞生产，克服了多克隆抗体的批间次差异的问题
。
但单克隆抗体存在以下特点和不足：研发周期长，生产周期长，制备成本高，在机体内不易被清除，穿透能力弱
。
[0004]纳米抗体是常规抗体的简化形式，早期在羊驼等动物的抗体中发现一种罕见的
、
只有重链的抗体，通过仅保留与抗原结合的单个结构域，构建成为大小在纳米级别的纳米抗体，又称为单域抗体
。
纳米抗体保留了常规抗体对抗原的高亲和性和高特异性，还有以下优点：单个结构域的稳定性高；能够在原核或真核细胞中高效表达；在原核细胞（如大肠杆菌）表达时，生长周期短
、
制备成本低；对人的免疫原性弱；分子量小，穿透能力强，甚至可以穿透血脑屏障
。
纳米抗体在生物医药中得到了越来越广泛的应用，如获批上市的双特异性纳米抗体
Ozoralizumab
，利用抗人血清白蛋白的纳米抗体对白蛋白的高亲和性，来延长在体内的存留时间，同时利用另一个融合在一起的抗肿瘤坏死因子
TNF
α
的纳米抗体，靶向药物作用分子，用于治疗类风湿性关节炎
。
然而，纳米抗体在检测和诊断领域还没有得到广泛应用，纳米抗体的检测和诊断产品极其罕见
。
[0005]克百威（
carbofuran, CAR
），又名呋喃丹
、
虫螨威，属氨基甲酸酯类农药，为内吸性广谱型杀虫
、
杀螨剂，具有触杀和胃毒的作用
。
主要抑制乙酰胆碱酯酶的活性，依靠抑制剂对酶活性部位的亲和力形成酶活性抑制剂，从而破坏正常的神经冲动传导
。
可用于防治水稻
、
花生
、
甘蔗
、
棉花等作物的大部分害虫，主要为内吸杀虫作用
。
克百威与其他氨基甲酸酯类杀虫剂所不同的是，其与乙酰胆碱酯酶的结合是不可逆的，因此克百威毒性高，一旦暴露与环境中，残留时间较长，对鸟类
、
蜜蜂和水生动物如鱼类具有高度毒性
。
[0006]多菌灵（
carbendazim, CBD
）是一种广泛使用的广谱苯并咪唑类杀菌剂，也是苯菌灵的代谢产物，又名棉萎灵
、
苯并咪唑
44
号
。
可以有效防治由真菌引起的多种作物病害，但
其残留能引起肝病和染色体畸变，对哺乳动物有毒害
。
[0007]啶虫脒（
Acetamiprid
，
ATP
）是一种烟碱类杀虫剂，除了具有触杀和胃毒作用之外，还具有较强的渗透作用，显示出速效的杀虫力
。
主要对黄瓜
、
苹果
、
柑桔
、
烟草上的蚜虫具有较好的防治效果
。
由于啶虫脒作用机制独特，对有机磷
、
氨基甲酸酯，以及拟除虫菊酯类等农药品种产生抗药性的害虫也具有较好效果
。
[0008]氟虫腈（
Fipronil, FPN
）是一种用于有害生物防治的苯吡唑类杀虫剂
、
杀虫谱广，对害虫以胃毒作用为主，兼有触杀和一定的内吸作用，其作用机制在于阻碍昆虫
γ
‑
氨基丁酸控制的氯化物代谢，因此对蚜虫
、
叶蝉
、
飞虱
、
鳞翅目幼虫
、
蝇类和鞘翅目等重要害虫有很高的杀虫活性
。
[0009]食品安全国家标准，食品中农药最大残留限量（
GB2763
‑
2021
，发布日期
2021.3.3
，实施日期：
2021.9.3
），对克百威
、
多菌灵
、
啶虫脒
、
和氟虫腈等农药残留的限量都有明确规定
。
因此，使用纳米抗体农药残留检测试纸条，快速检测农药残留，有很大的需求
。

技术实现思路

[0010]本专利技术是提供一个利用纳米抗体构建用于农药残留检测的免疫层析试纸条的技术方案
。
采取所述技术方案，用纳米抗体农药残留检测试纸条，可以准确
、
方便
、
快速地检测样本中的农药残留
。
纳米抗体农药残留检测试纸条具有生产成本低
、
产品稳定性好
、
易于保存
、
显色明显
、
便于观察
、
等特点
。
[0011]本专利技术的首要目的是提供了一个构建免疫层析试纸条的技术方案
。
抗原和抗体的特异性结合是免疫反应的关键之处
。
所述技术方案中，抗原为农药偶联蛋白，即农药小分子化合物与载体蛋白形成的偶联蛋白
。
优选的载体蛋白包括牛血清白蛋白（
bovine serum albumin, BSA
）
、
卵清蛋白（
ovalbumin, OVA
）
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
基于纳米抗体的检测农药残留的免疫层析试纸条，其特征在于试纸条上含有通过免疫反应相互结合的抗原和抗体；所述抗原为农药偶联蛋白，所述农药包括克百威
、
多菌灵
、
啶虫脒
、
和氟虫腈；所述抗体为鼠源抗农药偶联蛋白的常规抗体，和抗鼠抗体可结晶段的纳米抗体；所述常规抗体是单克隆或多克隆，带有抗体的可结晶段；所述纳米抗体是
MX21、MY50、
或
MX21
与
MY50
的组合，所述组合在
1:2
与
2:1
之间
。2.
如权利要求1所述的免疫层析试纸条，其特征在于试纸条包括样本垫
、
结合垫
、
层析垫
、
吸收垫，各组成部分依次相互重叠2毫米粘贴在底板上；所述结合垫上，吸附有彩色标记的常规抗体，彩色标记包括采用胶体金和彩色微球；所述层析垫上，平行设置两条线，检测线

【专利技术属性】
技术研发人员：叶其壮，林晓青，肖利群，
申请(专利权)人：广州明药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：