迷迭香酸－杨梅黄酮药物配方及其在治疗帕金森病中的应用组成比例

本发明专利技术涉及一种迷迭香酸－杨梅黄酮药物配方及其在治疗帕金森病中的应用。该复合制剂的药物配方为迷迭香酸与杨梅黄酮的摩尔浓度配比为１０∶１。该药物用于神经保护，１０－９ｍｏｌ／Ｌ迷迭香酸与１０－１０ｍｏｌ／Ｌ杨梅黄酮配比使用时，减轻神经毒素６－羟基多巴胺诱导的ＭＥＳ２３．５多巴胺能细胞存活率的下降；减轻神经毒素６－羟基多巴胺诱导的细胞线粒体膜电位的下降和活性氧物质的生成，具有抗氧化应激作用。该药物能够保护ＭＥＳ２３．５多巴胺能细胞免受神经毒素６－ＯＨＤＡ的损伤，安全无毒，副作用小，对于开发成为一种新型的抗帕金森病天然新药具有重要的应用前景和价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种迷迭香酸-杨梅黄酮药物配方及其在治疗帕金森病中的应用，尤其是涉及迷迭香酸-杨梅黄酮复合制剂药物配方及其在治疗帕金森病中对多巴胺能神经 元起神经保护作用的应用。属医药

技术介绍
神经退行性疾病是困扰现代社会中老年人群的重大脑疾病，帕金森病(PD)以发 病率仅次于居首位的老年痴呆病排列第二。无论是从社会学角度还是从市场经济角度， PD已经成为影响我国乃至世界人口健康水平和生活质量，阻碍经济持续发展的重大社会问 题。PD主要病理变化为黑质多巴胺能神经元丢失，多巴胺递质含量减少。虽然PD的可能致 病因素很多，但确切机制还不清楚。更为严重的是，至今尚无成熟有效的药物或方法能阻止 或逆转PD病情的发展。目前PD的治疗仍以药物治疗为主。左旋多巴——作为治疗PD的 经典药物，长期应用后大部分患者会出现多动症、疗效波动和开关现象，其用药副作用不仅 严重影响病人的生活，而且难以纠治。因此人们一直致力于从分子、细胞和整体水平上，多 层次、多角度研究PD的发病机理，以寻求有效的预防和治疗的药物及方法。开发新型的能 够防治PD及具有神经保护作用的药物尤其是天然提取物将对保护人类健康具有重要的现 实社会意义和应用经济价值。 迷迭香酸(Rosmarinic acid，RA)是一种水溶性的含多酚羟基的酸，其化学名称为 a-氧基]-3，4-二羟基苯丙酸。1958 年首次从迷迭香植物中分离提取而得名。迷迭香酸为天然抗氧化剂，有抗氧化、抗炎、免疫 抑制等多种活性。杨梅黄酮(Myricetin)是一种脂溶性的黄酮类植物提取物，其化学名称 为3， 5， 7-三羟基-2- (3， 4， 5-三羟基苯基)-4H-1-苯并呋喃_4_酮，具有抗炎、抗肿瘤、抗 突变、预防龋齿、抗氧化性、消除体内自由基等多种药理活性，已广泛应用于医药、食品、保 健品和化妆品等领域，并可作为添加剂用作治疗、预防关节炎和其它各种炎症。目前迷迭 香酸已有多项相关专利用于抑制血糖水平升高，预防、控制或治疗糖尿病或肥胖症；制备治 疗或预防冠心病、心绞痛、脑损伤；治疗或预防急慢性肾功能衰竭；升高白细胞及血小板等 等；杨梅黄酮已有保健酒的相关专利。 迷迭香酸和杨梅黄酮的化学结构明确，结构式分别为 3<formula>formula see original document page 4</formula> 迷迭香酸 杨梅黄酮 本专利技术人从事迷迭香酸和杨梅黄酮的综合开发利用研究，长期研究和大量试验结 果表明，作为结构明确的天然植物提取物，迷迭香酸和杨梅黄酮来源丰富，配比使用毒性 低，副作用小，足以其作为药物开发的新靶点。其在PD中是否具有防治作用未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服目前传统的抗PD药物都有一些不良反应，严重地限制了 其应用和推广的缺点，旨在提供一种迷迭香酸_杨梅黄酮复合制剂的药物配方及其在治疗 帕金森病中的应用。本专利技术人通过长期研究和大量试验发现，迷迭香酸与杨梅黄酮复合制 剂具有明显的神经保护作用，其发挥作用的浓度无任何毒副作用，故在治疗PD和神经保护 方面有良好的应用前景。同时，迷迭香酸与杨梅黄酮复合制剂作为结构明确的天然植物提 取物，来源丰富，毒性低，具有良好的神经保护及抗氧化应激作用，有着巨大的新药开发价 值。 为了实现上述专利技术目的，本专利技术的迷迭香酸-杨梅黄酮复合制剂的药物配方是 迷迭香酸与杨梅黄酮的摩尔浓度配比为10 : 1。迷迭香酸和杨梅黄酮均为天然植物提取 物。迷迭香酸可以从迷迭香植物如紫苏中提取获得。 本专利技术的迷迭香酸-杨梅黄酮药物在治疗帕金森病中的应用，其特征在于该复合制剂用于神经保护，其机制与抗氧化应激有关 1、10—、q1/L迷迭香酸与10—10 mol/L杨梅黄酮配比使用时，可以明显减轻神经毒素6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导的MES23. 5多巴胺能细胞存活率的下降； 2、10—、q1/L迷迭香酸与10—"mol/L杨梅黄酮配比使用时，可以明显减轻神经毒素6-0HDA诱导的细胞线粒体膜电位的下降和活性氧物质的生成，具有抗氧化应激作用。 本专利技术的迷迭香酸-杨梅黄酮复合制剂药物配方在体外实验中证实迷迭香酸_杨梅黄酮配比使用能够保护MES23. 5多巴胺能细胞免受神经毒素6-0HDA的损伤，其保护作用与抗氧化应激有关。通过迷迭香酸-杨梅黄酮复合制剂药物在体外的细胞毒性实验证实其发挥保护作用的浓度不具有毒性。本专利技术对于开发成为一种新型的国家I类抗PD天然新药具有重要的应用前景和价值。具体实施例方式下面通过具体实施例对本专利技术作进一步的阐述。 实施例1 :迷迭香酸_杨梅黄酮药物配方在MES23. 5多巴胺能细胞上发挥神经保 护作用实验4 —、实验材料( — )细胞 MES23. 5多巴胺能细胞由美国休斯敦贝勒医学院乐卫东教授惠赠。置371:，5%0)2培养箱中培养。 (二)药品及试剂 迷迭香酸由青岛大学医学院生物学教研室李荣贵教授提供(李荣贵，中国专利CN1796362，紫苏迷迭香酸的生产工艺)，以Dulbecco ' s modification of Eagle' smedium/F12(Dulbecco改良的Eagle培养基/F12，DMEM/F12)培养液(Gibco公司)溶解后以10—^Ql/L储存。实验时稀释为所需浓度10—9mol/L。杨梅黄酮为Sigma公司产品，以二甲亚砜(DMS0)溶解后以10—^Ql/L储存，实验时用DMEM/F12培养液稀释为所需浓度10—1Qm0l/L。 DMS0，2，7-二氢二氯荧光黄双乙酸钠0y)CF-DA)，6-0HDA，罗丹明123，3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)为Sigma公司产品。(三)仪器 酶标仪R-T-2100C，深圳雷杜公司。超净工作台苏州净化设备工程有限公司。C02培养箱美国热电公司。倒置生物光学显微镜重庆奥特光学仪器有限公司。流式细胞仪美国BD Biosciences公司。 二、实验方法 1、 MTT测定细胞存活率取对数生长期的MES23. 5多巴胺能细胞，吹打制成单细胞悬液后离心，用完全培养基稀释成2X 105个细胞/ml的细胞悬液，每孔200 Pl接种于96孔板，置于37°C、5% C02培养箱中培养。贴壁后加入迷迭香酸(10—9mol/L)和杨梅黄酮(10—10mol/L)预孵育12h后，与6-0HDA(100 y mol/L)共培养24h ;之后每孔加入5mg/ml的MTT 20iU，37t:培养箱中培养4h ;弃上清后每孔加入匿SO 200 yl，自动酶标读数仪比色(主波长573nm，次波长630nm)，测定其吸光度值，并计算各组MES23. 5多巴胺能细胞的存活率。细胞存活率=(实验组吸光度值-空白组吸光度值)/(阴性对照组吸光度值-空白组吸光度值)。 2、细胞线粒体跨膜电位的检测细胞按上述处理后加入荧光染料罗丹明123(终浓度为5 ii mol/L) 37。C避光负载30min ;用N-2-羟乙基哌嗪-N-2-乙磺酸(HEPES)缓冲液(20mmol/L HEPES， 150mmol/L NaCl，pH = 7. 4)洗3次后再用lml缓冲液重悬；以激发波长488nm，发本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种迷迭香酸－杨梅黄酮药物配方，其特征在于迷迭香酸与杨梅黄酮的摩尔浓度配比为１０∶１。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：谢俊霞，姜宏，李荣贵，宋宁，杜婷婷，
申请(专利权)人：青岛大学，
类型：发明
国别省市：95[中国|青岛]