本发明专利技术提供了一条α－胞衬蛋白多肽及其类似物用于干燥综合征的诊断。这种多肽抗原的ＩｇＡ型抗体，在干燥综合征得诊断中具有很高的敏感性和特异性。
【技术实现步骤摘要】
抗α-胞衬蛋白多肽IgA抗体测定在干燥综合征诊断中的应用本专利技术涉及α-胞衬蛋白多肽作为抗原在检测干燥综合征及其它免疫疾病中的 应用。
技术介绍
干燥综合征(Sjogren's Syndrome, SS)是一种以侵及泪腺和唾液腺等外分泌腺为 特征的全身性自身免疫疾病。该病最常见的临床表现为眼干、口干，并可累及肺、肾脏、淋巴 系统、血管及肝脏等器官。此病无明显的地区分布差异，可发生于任何年龄，以40-60岁， 特别是绝经后的女性居多，男女之比为1 9。在我国的患病率为0.77%，在老年人群中 的患病率高达4%，全国有近1000万患者。干燥综合征可分为原发性干燥综合征(Primary Sjogren，s syndrome)禾口继发性干燥综合征(Secondary Sjogren，s syndrome)两类。该 病单独发生时，称为原发性干燥综合征；与其它诊断明确的自身免疫性疾病如类风湿关节 炎(rheumatoid arthritis，RA)、系统性红斑狼疫(systemic lupus erythematosus, SLE) 等合并存在时，称为继发性干燥综合征。近年来，人们对干燥综合征的病因及发病机理进行了大量研究，但至今无突破性 进展。目前在临床上尚未发现理想的血清学诊断方法，除临床症状外，主要靠唇腺活检及 腮腺造影等有创检查明确诊断，由于患者的医从性差，常常延误诊断，并丧失最佳的治疗时 机。因此，寻找一种敏感性强、特异性高而又简便易行的检测方法，对干燥综合征的早期诊 断及治疗具有重要意义。为此，本专利技术人经过多年研究发现了可以用于干燥综合征早期诊 断的血清学特异性抗原多肽——α-胞衬蛋白多肽(为α-胞衬蛋白的抗原表位)，该多肽 可以特异性的识别干燥综合征患者血清中IgA型的特异性抗体——抗IgA型α-胞衬蛋白 多肽抗体，该抗体可通过一些较为简便的免疫学检测方法(如酶联免疫吸附法)检测出 来。并且具有很高的敏感性和特异性。专利技术_既述本专利技术的目的之一是提供能够有效检测干燥综合征的特异性抗原——α -胞衬蛋 白多肽。本专利技术的另一目的是提供所述的α-胞衬蛋白多肽在诊断干燥综合征中的用途。最后，本专利技术提供了一种改良的ELISA方法利用所述的α _胞衬蛋白多肽作为抗 原用于检测干燥综合征。本专利技术所用术语“ α -胞衬蛋白多肽”指具有共同序列RQKLEDSYRFXFFRDEEL(即A rg-Gln-Lys-Leu-Glu-Asp-Ser-Tyr-Arg-Phe-X-Phe-Phe-Arg-Asp-Glu-Glu-Leu)的氨基酸 或多肽。X可以为Gly (甘氨酸)、Ala (丙氨酸)、Val (缬氨酸)、Leu (亮氨酸)、IIe (异亮 氨酸)、Phe (苯丙氨酸)、Trp (色氨酸)、Tyr (酪氨酸)、Asp (天冬氨酸)、His (组氨酸)、 Asn (天冬酰胺)、Glu (谷氨酸)、Lys (赖氨酸)、Gln (谷氨酰胺)、Met (甲硫氨酸)、Arg (精 氨酸)、Ser (丝氨酸)、Thr (苏氨酸)、Cys (半胱氨酸)、Pro (脯氨酸)。F0drin(又称胞衬蛋白)最早在神经细胞的胞浆内被发现，主要聚集在神经细胞3和淋巴细胞的浆膜下，与浆膜平行呈板状分布。它是真核细胞膜骨架的主要组成部分，类似 圆柱体结构，含有α和β两个亚单位。前者的分子量为240KD，后者为235KD。α、β亚 单位以边对边的形式形成异二聚体，其间以二硫键相连。这种异二聚体进一步以尾对尾的 形式形成四联体，并与肌钙蛋白相连，成为膜骨架的基本结构，参与细胞的运动及维持细胞 的连接和形态，可能与周围神经，脑，肾脏，肝脏及全身性自身免疫病的发生有关⑴。1997年日本德岛大学医学院的Haneji等人从干燥综合征模型NFS/sld小鼠的腮 腺组织中分离出一种分子量为120kD的抗原，并发现该抗原在干燥综合征患者的唇腺组织 中有大量表达，而在正常人中并未检出；同时还发现该抗原能够刺激干燥综合征患者外周 血中的T淋巴细胞增殖；为了鉴定该抗原，Haneji等人将其氨基端的序列进行测定，结果发 现该抗原即为非红细胞膜谱蛋白(nonerythroid α-spectrin) α -胞衬蛋白。该小组人员 继而用基因工程的方法，用GST融合蛋白表达系统构建了带有编码α-胞衬蛋白氨基端序 列cDNA的融合蛋白表达系统——pGEX-2T/JS-l，(JS-1为编码α -胞衬蛋白氨基端序列的 碱基序列，该段序列共1784个碱基)，该表达系统表达出的α-胞衬蛋白融合蛋白分子量 约为97.4kD。将纯化出的α-胞衬蛋白融合蛋白做为抗原，用免疫印迹(Western blot) 的方法检测了 43例原发性干燥综合征(pSS)、8例继发干燥综合征、21例系统性红斑狼疮 (SLE)、14例类风湿关节炎(RA)患者和15例正常献血者，结果显示该蛋白在原发性干燥综 合征中的阳性率为95.3%，继发干燥综合征中为50%，而在SLE、RA和正常人中未检测到该 抗体⑵。然而，Watanabc等人的用重组的98kD的α -胞衬蛋白做为抗原，用Western blot 的方法在不同疾病中检测的阳性率为原发性干燥综合征78% (7/9)，LE继发SS:60% (9/15)，LE 7% (3/44)⑶。Witte等人用ELISA的方法，将重组的93kD的α -胞衬蛋白做为 抗原检测出的原发干燥综合征患者阳性率为55% (47/85)，SLE继发SS的为40% (6/15)， RA 继发 SS 的为 43% (3/7)，RA 为 41. 6% (5/12)，SLE 为 20% (1/50)，正常人组为 1. 9% (3/160)⑷。基于以上研究，本专利技术人经过序列分析及对抗原多肽的筛选，发现α-胞衬蛋白 中有一段氨基酸，序列与鼠非红细胞膜谱蛋白序列同源，同时该序列中具有四个保守或较 保守的氨基酸，可能与该蛋白的抗原特性有关，并在干燥综合征的发病中发挥重要作用，该 序列为 RQKLEDSYRFXFFRDEEL (即 Arg-Gln-Lys-Leu-Glu-Asp-Ser-Tyr-Arg-Phe-X-Phe-Phe -Arg-Asp-Glu-Glu-Leu)，称为α-胞衬蛋白多肽⑸。本专利技术人利用戊二醛偶联法将α-胞 衬蛋白多肽连接于牛血清白蛋白BSA形成BSA-G- α -胞衬蛋白多肽复合物，将该复合物作 为抗原，用ELISA的方法检测干燥综合征、类风湿关节炎、系统性红斑狼疮及正常人血清中 的IgA型的α-胞衬蛋白多肽抗体，结果发现该多肽对干燥综合征的诊断具有较高的敏感 性和特异性，可以用于干燥综合征的诊断，从而达到通过血清学的方法诊断干燥综合征的 目的，为干燥综合征的临床诊断提供客观的实验室依据。本专利技术的抗IgA型的α-胞衬蛋白多肽的检测可通过多种方法(例如酶联免疫 吸附法、免疫印迹法、金标记法等)对干燥综合征患者进行检测，其检测方法为本领域技术 人员所熟知的。本专利技术所述的α-胞衬蛋白多肽可以通过多种方法得到，例如固相合成法、基因 工程表达纯化法等。附图说明 图1.首先利用戊二醛偶联法将α-胞衬蛋白多肽连接于牛血清白蛋白BSA，形成 BSA-G- α -胞衬蛋白多肽复合物，将该复合本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：栗占国，何菁，李英妮，
申请(专利权)人：北京大学人民医院，
类型：发明
国别省市：11
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。