本发明专利技术属于免疫学领域，涉及β－胞衬蛋白抗原表位多肽的筛选，得到具有诊断意义的最佳β－胞衬蛋白多肽对应的氨基酸序列。本发明专利技术所述的β－胞衬蛋白抗原表位多肽，包括如下（ａ）或（ｂ）的多肽：（ａ）由ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１所示的氨基酸序列组成的多肽；（ｂ）在（ａ）中的氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有抗原表位功能的由（ａ）衍生的多肽。所述的β－胞衬蛋白表位多肽可以特异性地检测干燥综合征患者血清中的抗β－胞衬蛋白多肽ＩｇＧ抗体，完全符合临床诊断的需要。本发明专利技术还提供了检测患者血清中β－胞衬蛋白多肽ＩｇＧ抗体的免疫学方法，以及将其作为抗原在制备诊断干燥综合征的药物中的应用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于免疫学领域，涉及抗原表位多肽的筛选、免疫学方法的建立以及临床诊断试剂的应用，尤其是涉及β-胞衬蛋白抗原表位多肽的筛选，得到具有诊断意义的最佳β-胞衬蛋白表位多肽对应的氨基酸序列，以及建立检测患者血清中β-胞衬蛋白表位多肽IgG抗体的免疫学方法，以及将其作为抗原在制备诊断干燥综合征的药物中的应用。
技术介绍
干燥综合征(Sjgren Syndrome，SS)是一种以口、眼干燥为主，并累及全身多个系统和器官的全身性自身免疫病，分为原发性和继发性干燥综合征。本病主要表现为唾液腺、泪腺及消化道等外分泌腺的炎性细胞浸润及破坏，导致进行性口干、眼干及内脏受累。由于唾液、泪腺分泌减少或停止，出现口、眼干燥难忍、口唇破裂、龋齿猖獗或反复角膜炎、结膜炎、腮腺肿大及血管炎等(Fox RI，Stern M，Michelson P，Update insjgren’s syndrome.Curr Opin Rheumatol，2002，Sep12(5)319-8.)。流行病学调查发现，我国干燥综合征的患病率为0.77％，而在50岁以上人群中的患病率达5％，甚至明显高于糖尿病(0.67％)、风湿性心脏病(0.19％)及肺源性心脏病(0.47％)的患病率。总患病人数逾800万，然而，在临床上，绝大部份(97％)的干燥综合征患者未得到及时的诊断和治疗，52％的患者被误诊为肺间质纤维化、免疫性肝炎及肾炎等，而未能得到正规的治疗或误治，甚至出现因误治出现的器官损害。本病为慢性全身性自身免疫病，未经正确治疗的患者多逐渐出现器官功能异常、衰竭，甚至死亡。淋巴瘤、骨髓瘤等恶性肿瘤在干燥综合征的发生率可高达正常人的40倍(Fox RI，Stern M，Michelson P，Update in Sjgren’s syndrome.Curr Opin Rheumatol，2002，Sep12(5)319-8.)。目前，本病的早期诊断是困扰临床医师多年的最大问题。临床诊断上主要靠症状、体征、唇腺活检及非特异的抗核抗体等指标。其中唇腺活检属创伤性检查，且敏感性差，大多数患者不能接受。而抗核抗体、SSA抗、SSB抗体则特异性较差，敏感性也不理想(Reichlin M.Antibodies to Ro and La.Ann Med Interne(Paris)，1998，14934-41.)。大部分患者在确诊时已属于中、晚期，往往病情严重，并有多个脏器受损或并发症，治疗上已十分困难。胞衬蛋白(Fodrin)属于谱蛋白超家族，和红细胞谱蛋白具有同源性，均为重要的细胞膜骨架蛋白。胞衬蛋白广泛分布于神经元、淋巴细胞、肾上腺细胞、肝细胞、上皮细胞等非红细胞细浆膜下，与浆膜平行呈板状分布。胞衬蛋白由α和β两个亚单位组成，分子量分别为240kD和235kD。α和β亚单位以边对边的形式反向平行分布，形成松散的异二聚体，这两个异二聚体进一步以头对头的形式形成圆柱状的四聚体，与肌动蛋白相交连形成肌动蛋白胶体，参与构成细胞膜骨架，维持细胞的形态(Glenney JR Jr，Glenney P，Fodrin is the general spectrin-like protein found in most cells whereas spectrin andthe TW protein have a restricted distribution.Cell，1983，34(2)503-12.Bennett V，Gilligan DM，et al，The spectrin-based membrane skeleton and micron-scale organization of theplasma-membrane.Annu Rev Cell Biol，1993，927-66.)。研究表明，胞衬蛋白可参与细胞的运动及维持细胞的连接和形态，可能与周围神经，脑，肾脏，肝脏及全身性自身免疫病的发生有关。近几年来，国外及本专利技术专利技术人的前期研究发现干燥综合征相关的α-胞衬蛋白抗体在本病的发病机制及诊断中有一定意义。本专利技术人运用重叠蛋白片段表达筛选得到了一条干燥综合征相关的α-胞衬蛋白抗原表位多肽，虽然其敏感性、特异性相比抗核抗体、SSA抗、SSB抗体有所提高，但最终因筛选方法中运用原核表达重叠重组蛋白结合免疫检测分析，局限了抗原表位多肽的独立检测价值，加上国外许多研究中病例样本小等，该抗体在干燥综合征诊断中的特异性、敏感性仍不尽如人意(Rieko A.，Naozumi I.，IchiroS.，Yoshio H.et al，Development of Autoimmune Exocrinopathy Resembling sjogren’ssyndrome in Adoptively Transferred Mice With autoreactive CD4+ T cells.Arthiritis ＆Rheum，2003，DEC 48(12)3603-3609.何菁，李晶，栗占国，陈巧林.抗α-胞衬蛋白表位多肽抗体在干燥综合征诊断中的意义，中华风湿病学杂志，2003，7(10)600-603.He Jing，Chen Qiaolin，Li Zhanguo，Antibodies to α-fodrin-derived peptide in sjogren’s Syndrome.Annals of Rheumatic Diseases，2006，65(4)549-550.陈巧林，朴海燕，何菁，李晶，栗占国.干燥综合征抗原α-胞衬蛋白抗原表位的筛选与鉴定，中国免疫学杂志，2005，11(21)864-872.Fox RI，Konttinen Yi.，Fisher A，Use of Muscarinic Agonists in the Treatment ofsjogren’s syndrome.Clin Immunol.2001，101(3)249-263.)。国外学者Masataka等人通过对胞衬蛋白(Fodrin)的β-亚单位β-胞衬蛋白进行研究，选取β-fodrin全长cDNA 7561bp中的298-2158bp对应的共计616aa为对象，用得到的重组表达的616aa蛋白为检测抗原，结果显示抗β-胞衬蛋白抗体在原发性干燥综合征、继发性干燥综合征患者血清中的阳性率为51％和84％，而在红斑狼疮患者、系统性硬化病及正常人血清中的阳性率仅为6％、19％和4％。但由于研究中选择的不是在人体内表达的β-胞衬蛋白全长蛋白序列为对象，而且血清标本的例数不充分，加上检测抗原为重组表达蛋白，每批来源不稳定，使得该抗体的阳性率没有得到真正的提高，在临床上一直没有得到应用(Masataka K，Tetsuroh O，Yoko O，Junichi K，and Yutaka K，Autoantibodiesto the Amino-Terminal Fragment of β-Fodrin Expressed in Glandular Epithelial Cells inPatients with sjogren’s Syndrome.The Joumal of 本文档来自技高网...
【技术保护点】
β－胞衬蛋白抗原表位多肽，其特征在于，包括如下（ａ）或（ｂ）的多肽；（ａ）由ＳＥＱＩＤＮＯ．１所示的氨基酸序列组成的多肽；（ｂ）在（ａ）中的氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有抗原表位功能的由（ａ）衍 生的多肽。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：陈巧林，
申请(专利权)人：中国科学院广州生物医药与健康研究院，
类型：发明
国别省市：81[中国|广州]
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