针对制造技术

提供了包含特异性识别

【技术实现步骤摘要】
针对TIGIT的单域抗体和其变体
[0001]本申请是申请号为
201880088792.9、
申请日为
2018
年
12
月
28
日
、
专利技术名称为“针对
TIGIT
的单域抗体和其变体”的专利技术申请的分案申请
。


[0002]本专利技术涉及包含特异性识别
TIGIT
的单域抗体
(sdAb)
部分的构建体，以及其制备和使用方法
。
[0003]
技术介绍

/
专利技术背景
[0004]具有
Ig
和
ITIM
域的
T
细胞免疫受体
(TIGIT
，也称为
Vstm3
或
WUCAM)
是属于
CD28
家族的免疫受体
。
这种
26KDa
蛋白含有细胞外
IgV
域，
I
型跨膜区，细胞内免疫球蛋白尾酪氨酸
(ITT)
样基序，以及细胞质中基于
C
末端免疫受体酪氨酸的抑制基序
(ITIM)
基序
。
在原生
T
细胞和
NK
细胞中，
TIGIT
在细胞表面几乎检测不到，但在
T
细胞和
NK
细胞活化时上调
。<br/>在肿瘤微环境中，
TIGIT
在调节性
T
细胞
(Treg)、
耗竭的
T
细胞和
NK
细胞上被高度检测到
。TIGIT
具有多种配体，包括
CD155(necl
‑5或脊髓灰质炎病毒受体
(PVR))、CD112(
连接蛋白
‑2或脊髓灰质炎病毒受体相关
2(PVRL2))
和
CD113(
连接蛋白
‑3或
PVRL3)。TIGIT
可以高亲和力结合至
CD155(PVR)
，而以较低的亲和力结合至
CD112
和
CD113。
最近的报道也表明
TIGIT
顺式地与
CD226(PTA1
或
DNAM
‑
1)
相互作用
。
[0005]TIGIT
经由几种机制发挥其抑制性免疫检查点功能
。
首先，在与其主要配体
CD155(PVR)
结合后，随后
TIGIT
在其
ITIM
域中的磷酸化转导抑制信号，从而经由
NF
‑
κ
B
途径来下调
T
细胞和
NK
细胞中的
IFN
‑
γ
表达
。
其次，由于
TIGIT
以比
CD226
更高的亲和力与
PVR
相互作用，因此它与
CD226
竞争并减弱由
CD226
转导的刺激信号
。
第三，
PVR
与树突细胞上的
TIGIT
结合可导致
IL
‑
10
表达的上调和
IL
‑
12
表达的下调，因此损害树突细胞的抗肿瘤免疫应答
。
最后，最近的研究表明，
TIGIT
可以直接顺式地与
CD226
结合，以便抑制
CD226
二聚化，所述二聚化是
T
细胞活化所必需的
。
因此，
TIGIT
在感染和癌症的免疫应答中充当重要的负调节因子，并且已经提出阻断
TIGIT
信号传导作为增强用于癌症治疗的
T
细胞和
NK
细胞免疫的方法
。
[0006]程序性细胞死亡受体
1(PD
‑
1)
是另一种抑制性免疫检查点分子，对
T
细胞功能具有重要的负调节作用
。
当
PD
‑1与调节
T
细胞受体
(TCR)
信号传导的程序性细胞死亡配体
1(PD
‑
L1)
和
/
或程序性细胞死亡配体
2(PD
‑
L2)
结合时，
PD
‑1信号传导可以减弱
T
细胞应答
。
使用靶向
PD
‑1或
PD
‑
L1
的抗体来阻断
PD
‑
1/PD
‑
L1
轴已经证明可促进肿瘤特异性
T
细胞免疫，对癌症患者具有显著的临床益处
。
然而，由于
PD
‑
1/PD
‑
L1
阻断后的抗性或复发，仍然存在巨大的未满足的临床需求
。
[0007]本文所提及的所有出版物
、
专利
、
专利申请和公开专利申请的公开内容特此通过引用整体并入本文
。

技术实现思路

[0008]本专利技术涉及抗
TIGIT
构建体，其包含特异性识别
TIGIT
的
sdAb
部分
(
下文称为“抗
TIGIT sdAb”)
，例如抗
TIGIT sdAb
，抗
TIGIT sdAb
‑
Fc
融合蛋白，其包含与人类免疫球蛋白
G
(IgG)
的结晶片段
(Fc)
片段融合的抗
TIGIT sdAb
，以及多特异性
(
例如双特异性
)
抗原结合蛋白，其包含例如与其它
sdAb
融合或与全长四链抗体融合的抗
TIGIT sdAb
；以及其制备和使用方法
。
[0009]本申请的一个方面提供分离的抗
TIGIT
构建体，其包含特异性识别
TIGIT
的
sdAb
部分，其中所述
sdAb
部分包含
CDR1
，所述
CDR1
包含
SEQ ID NO:36
‑
42、54、56
‑
59、63、65...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种分离的抗
TIGIT
构建体，所述分离的抗
TIGIT
构建体包含特异性识别
TIGIT
的单域抗体
(sdAb)
部分
(“抗
TIGIT
的
sdAb
部分”)
，其中所述抗
TIGIT
的
sdAb
部分包含：氨基酸序列如
SEQ ID NOs:39、63、37、38、40
‑
42
任一项所示的
CDR1
，氨基酸序列如
SEQ ID NOs:109、107、108、110
‑
112
任一项所示的
CDR2
，和氨基酸序列如
SEQ ID NOs:179、177、178、180
‑
182
任一项所示的
CDR3。2.
如权利要求1所述的分离的抗
TIGIT
构建体，其中所述抗
TIGIT
的
sdAb
部分包含以下中的任一项：
(1)
氨基酸序列如
SEQ ID NO:39
或
63
所示的
CDR1
，氨基酸序列如
SEQ ID NO:109
所示的
CDR2
，和氨基酸序列如
SEQ ID NO:179
所示的
CDR3
；
(2)
氨基酸序列如
SEQ ID NO:37
所示的
CDR1
，氨基酸序列如
SEQ ID NO:107
所示的
CDR2
，和氨基酸序列如
SEQ ID NO:177
所示的
CDR3
；
(3)
氨基酸序列如
SEQ ID NO:38
所示的
CDR1
，氨基酸序列如
SEQ ID NO:108
所示的
CDR2
，和氨基酸序列如
SEQ ID NO:178
所示的
CDR3
；
(4)
氨基酸序列如
SEQ ID NO:40
所示的
CDR1
，氨基酸序列如
SEQ ID NO:110
所示的
CDR2
，和氨基酸序列如
SEQ ID NO:180
所示的
CDR3
；
(5)
氨基酸序列如
SEQ ID NO:41
所示的
CDR1
，氨基酸序列如
SEQ ID NO:111
所示的
CDR2
，和氨基酸序列如
SEQ ID NO:181
所示的
CDR3
；或
(6)
氨基酸序列如
SEQ ID NO:42
所示的
CDR1
，氨基酸序列如
SEQ ID NO:112
所示的
CDR2
，和氨基酸序列如
SEQ ID NO:182
所示的
CDR3。3.
如权利要求1或2所述的分离的抗
TIGIT
构建体，其中所述抗
TIGIT
的
sdAb
包含
V
H
H
域，所述
V
H
H
域包含
SEQ ID NOs:256、280、282
‑
284、286、287、254、255、257
‑
259
中的任一项的氨基酸序列
。4.
如权利要求1或2所述的分离的抗
TIGIT
构建体，其中所述抗
TIGIT
的
sdAb
部分是骆驼科的
、
嵌合的
、
人类的
、
部分人源化的或完全人源化的
。5.
如权利要求1或2所述的分离的抗
TIGIT
构建体，其中所述分离的抗
TIGIT
构建体是
sdAb
‑
Fc
融合蛋白；优选地，所述
sdAb
‑
Fc
融合蛋白是单体或二聚的；优选地，所述
Fc
片段是人类
IgG1(hIgG1)Fc、
无效应子
(
惰性
)hIgG1 Fc
或
hIgG4 Fc
；优选地，所述
sdAb
‑
Fc
融合蛋白包含
SEQ ID NOs:291、315、317
‑
319、321、322、289、290
和
292
‑
294
中的任一项的氨基酸序列
。6.
如权利要求1或2所述的分离的抗
TIGIT
构建体，其中所述分离的抗
TIGIT
构建体还包含特异性识别第二表位的第二抗体部分；优选地，所述第二抗体部分是全长抗体
、Fab、Fab'、(Fab')2、Fv、
单链
Fv(scFv)、scFv
‑
scFv、
微抗体
、
双抗体或
sdAb
；优选地，所述抗
TIGIT
构建体是多特异性的；优选地，所述抗
TIGIT
的
sdAb
部分和所述第二抗体部分任选地通过肽接头来连接；优选地，所述肽接头包含
SEQ ID NOs:324
和
370
‑
378
中的任一项的氨基酸序列
。7.
如权利要求6所述的分离的抗
TIGIT
构建体，其中所述第二抗体部分是由两条重链和两条轻链组成的全长抗体；
优选地，所述重链的
Fc
片段可以是
IgG1Fc、
无效应子的
IgG1 Fc、IgG2 Fc
或
IgG4 Fc
；优选地，所述的分离的抗
TIGIT
构建体包含如下任何一种结构：
(i)
其中所述抗
TIGIT
的
sdAb
部分的
N
末端与所述全长抗体的至少一条重链的
C
末端融合；
(ii)
其中所述抗
TIGIT
的
sdAb
部分的
C
末端与所述全长抗体的至少一条重链的
N
末端融合；
(iii)
其中所述抗
TIGIT
的
sdAb
部分的
N
末端与所述全长抗体的至少一条轻链的
C
末端融合；
(iv)
其中所述抗
TIGIT
的
sdAb
部分的
C
末端与所述全长抗体的至少一条轻链的
N
末端融合；
(v)
所述的分离的抗
TIGIT
构建体包含四个抗
TIGIT
的
sdAb
部分，其中每个抗
TIGIT
的
sdAb
部分的
C
末端与所述全长抗体的每一条链的
N
末端融合；或
(vi)
所述的分离的抗
TIGIT
构建体包含四个抗
TIGIT
的
sdAb
部分，其中四个抗
TIGIT
的
sdAb
部分中的每两个抗
TIGIT sdAb
部分融合在一起，并进一步与所述全长抗体的每一条重链的
N
末端融合
。8.
如权利要求7所述的分离的抗
TIGIT
构建体，其中所述全长抗体特异性识别
PD
‑
1(“抗
PD
‑1全长抗体”)
；优选地，所述抗
PD
‑1全长抗体包括以下中的任一项：
(1)(i)
氨基酸序列如
SEQ ID NO:385
所示的重链可变域
(VH)
的三个重链互补决定区
(HC
‑
CDR)
，和氨基酸序列如
SEQ ID NO:386
所示的轻链可变域
(VL)
的三个轻链互补决定区
(LC
‑
CDR)
；或，
(ii)
氨基酸序列如
SEQ ID NO:385
所示的重链可变域
(VH)
，和氨基酸序列如
SEQ ID NO:386
所示的轻链可变域
(VL)
；
(2)(i)
氨基酸序列如
SEQ ID NO:387
所示的重链可变域
(VH)
的三个重链互补决定区
(HC
‑
CDR)
，和氨基酸序列如
SEQ ID NO:388
所示的轻链可变域
(VL)
的三个轻链互补决定区
(LC
‑
CDR)
；或，
(ii)
氨基酸序列如
SEQ ID NO:387
所示的重链可变域
(VH)
，和氨基酸序列如
SEQ ID NO:388
所示的轻链可变域
(VL)
；或
(3)(i)
氨基酸序列如
SEQ ID NO:406
所示的重链可变域
(VH)
的三个重链互补决定区
(HC
‑
CDR)
，和氨基酸序列如
SEQ ID NO:407
所示的轻链可变域
(VL)
的三个轻链互补决定区
(LC
‑
CDR)
；或，
(ii)
氨基酸序列如
SEQ ID NO:406
所示的重链可变域
(VH)
，和氨基酸序列如
SEQ ID NO:407
所示的轻链可变域
(VL)。9.
如权利要求8所述的分离的抗
TIGIT
构建体，其中：
(i)
所述抗
PD
‑1全长抗体包括氨基酸序列如
SEQ ID NO:390
所示的重链和氨基酸序列如
SEQ ID NO:391
所示的轻链，其中所述抗
PD
‑1全长抗体的所述重链中的至少一者与所述抗
TIGIT
的
sdAb
部分融合；或
(ii)
所述抗
PD
‑1全长抗体包括氨基酸序列如
SEQ ID NO:390
所示的重链和氨基酸序列如
SEQ ID NO:391
所示的轻链，其中所述抗
PD
‑1全长抗体的所述轻链中的至少一者与所述抗
TIGIT
的
sdAb
部分融合
。10.
如权利要求7所述的分离的抗
TIGIT
构建体，其中所述全长抗体特异性识别
PD
‑
L1(“抗
PD
‑
L1
全长抗体”)
；
优选地，所述抗
PD
‑
L1
全长抗体包括以下中的任一项：
(1)
氨基酸序列如
SEQ ID NO:349
所示的重链互补决定区
(HC
‑
CDR)1、
氨基酸序列如
SEQ ID NO:350
所示的
HC
‑
CDR2、
氨基酸序列如
SEQ ID NO:351
所示的
HC
‑
CDR3、
氨基酸序列如
SEQ ID NO:352
所示的轻链互补决定区
(LC
‑
CDR)1、
氨基酸序列如
SEQ ID NO:353
所示的
LC
‑
CDR2
和氨基酸序列如
SEQ ID NO:354
所示的
LC
‑
CDR3
；
(2)
氨基酸序列如
SEQ ID NO:339
所示的
VH
，和氨基酸序列如
SEQ ID NO:340
所示的
VL
；
(3)
氨基酸序列如
SEQ ID NO:323
或
327
所示的重链，和氨基酸序列如
SEQ ID NO:328
所示的轻链；
(4)
氨基酸序列如
SEQ ID NO:329
所示的重链，和氨基酸序列如
SEQ ID NO:330
所示的轻链；
(5)(i)
氨基酸序列如
SEQ ID NO:379
所示的
VH
的三个
HC
‑
CDR
，和氨基酸序列如
SEQ ID NO:380
所示的
VL
的三个
LC
‑
CDR
；或，
(ii)
...

【专利技术属性】
技术研发人员：张望，武术，杨帅，潘琦，周传初，
申请(专利权)人：南京传奇生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：