程序性死亡受体1（PD-1）抗体的组合物以及获得所述组合物的方法技术

本发明专利技术提供了在CDRH3重链区中Met105的氧化小于或等于约3.0％的抗PD

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】程序性死亡受体1(PD
‑
1)抗体的组合物以及获得所述组合物的方法
专利

[0001]本专利技术提供了在
CDRH3
重链区中
Met105
的氧化小于或等于约
3.0
％的抗
PD
‑1抗体或其抗原结合片段或约
1.0
‑
12.0
％酸性物质的纯化的组合物，以及获得本专利技术的纯化的组合物的方法
。
[0002]对电子提交的序列表的参考
[0003]本申请的序列表通过
EFS
‑
Web
以电子方式提交，作为
ASCII
格式的序列表，文件名为
25195
‑
WO
‑
PCT_SEQLIST
‑
20JAN2022.txt
，创建日期为
2022
年1月
20
日，大小为
30kb。
通过
EFS
‑
Web
提交的该序列表是本说明书的一部分，并且其全部内容通过引用并入本文
。
[0004]专利技术背景
[0005]针对程序性死亡受体
‑
1(PD
‑
1)
轴的免疫检查点疗法在多种人类癌症的临床应答中取得了突破性的改善
(Brahmer
等，
N Engl J Med 2012,366:2455
‑
65
；
Garon
等，
N Engl J Med 2015,372:2018
‑
28
；
Hamid
等，
N Engl J Med 2013,369:134
‑
44
；
Robert
等，
Lancet 2014,384:1109
‑
17
；
Robert
等，
N Engl J Med 2015,372:2521
‑
32
；
Robert
等，
N Engl J Med 2015,372:320
‑
30
；
Topalian
等，
N Engl J Med 2012,366:2443
‑
54
；
Topalian
等，
J Clin Oncol 2014,32:1020
‑
30
；
Wolchok
等，
N Engl J Med 2013,369:122
‑
33)。T
细胞上的
PD
‑1受体与其配体
PD
‑
L1
和
PD
‑
L2
在肿瘤和免疫浸润细胞上的相互作用调节
T
细胞介导的免疫应答，并且可能在人类肿瘤的免疫逃逸中发挥作用
(Pardoll DM.Nat Rev Cancer 2012,12:252
‑
64)。PD
‑1与其任一配体的结合导致向
T
细胞递送抑制性刺激
。
靶向
PD
‑1轴的免疫疗法包括针对
PD
‑1受体的单克隆抗体
(KEYTRUDA
TM
(
派姆单抗
)
，
Merck and Co.,Inc.,Kenilworth,NJ
；和
OPDIVO
TM
(
纳武单抗
)
，
Bristol
‑
Myers Squibb,Princeton,NJ)
；以及结合至
PD
‑
L1
配体的抗体
(MPDL3280A
；
TECENTRIQ
TM
(
阿特珠单抗
)
，
Genentech,San Francisco,CA)。
这两种疗法均已在很多癌症类型中显示出抗肿瘤作用
。
[0006]甲硫氨酸的氧化是很多蛋白药物的主要降解途径之一
。
蛋白中的甲硫氨酸残基易被氧化，导致形成甲硫氨酸亚砜，在极端条件下形成砜
。
暴露的甲硫氨酸残基或抗体
CDR
中的甲硫酸钠残基具有通过氧化影响抗体的生物活性的潜力
。
派姆单抗的主要降解途径包括暴露于光或氧化应激时重链
CDR
和
Fc
甲硫氨酸残基中甲硫氨酸
105(Met105)
的氧化
。
获得具有低氧化性的派姆单抗组合物是理想的，特别是在
Met105
位
。
[0007]天冬酰胺残基的脱酰胺作用可导致琥珀酰亚胺的形成，然后可以转化为天冬氨酸或异天冬氨酸
。
抗体中的脱酰胺，特别是
CDR
区中的脱酰胺，具有影响抗体的生物活性的潜力
。
因此，获得具有低脱酰胺变体的派姆单抗组合物也是理想的
。

技术实现思路

[0008]本专利技术提供了在
CDRH3
重链区中
Met105
的氧化小于或等于约
3.0
％的抗
PD
‑1抗体或其抗原结合片段的组合物
。
本专利技术还提供了一种组合物，其包含抗人
PD
‑1抗体主要物质以及抗人
PD
‑1抗体主要物质的酸性物质，所述抗人
PD
‑1抗体的主要物质包含由两条重链和
两条轻链组成的抗体，每条重链由
SEQ ID NO:11
的氨基酸序列组成和每条轻链由
SEQ ID NO:5
的氨基酸序列组成，其中酸性物质的量是约
1.0
‑
12.0
％
。
本专利技术还提供了一种组合物，其包含抗人
PD
‑1抗体主要物质以及抗人
PD
‑1抗体主要物质的酸性物质和碱性物质，所述抗人
PD
‑1抗体的主要物质包含由两条重链和两条轻链组成的抗体，每条重链由
SEQ ID NO:11
的氨基酸序列组成和每条轻链由
SEQ ID NO:5
的氨基酸序列组成，其中所述主要物质的量是约
65
‑
85
％
。
令人吃惊的是，与通过分批补料工艺生产的派姆单抗相比，连续灌注上游工艺提供了具有更低
Met105
氧化％
、<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.
一种组合物，其包含抗人
PD
‑1抗体或其抗原结合片段，其中所述抗人
PD
‑1抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含三个轻链
CDR
，所述轻链
CDR
包括
SEQ ID NO:1
的
CDRL1、SEQ ID NO:2
的
CDRL2
和
SEQ ID NO:3
的
CDRL3
，所述重链可变区包含
SEQ ID NO:6
的
CDRH1、SEQ ID NO:7
的
CDRH2
和
SEQ ID NO:8
的
CDRH3
的三个重链
CDR
，其中所述抗体或其抗原结合片段的甲硫氨酸
105
的氧化小于或等于约
3.0
％
。2.
根据权利要求1所述的组合物，其中所述抗人
PD
‑1抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含
SEQ ID NO:4
中所示的氨基酸序列，所述重链可变区包含
SEQ ID NO:9
中所示的氨基酸序列
。3.
根据权利要求1所述的组合物，其中所述抗人
PD
‑1抗体包含轻链和重链，所述轻链包含
SEQ ID NO:5
中所示的氨基酸序列，所述重链包含
SEQ ID NO:10
中所示的氨基酸序列
。4.
根据权利要求1所述的组合物，其中所述抗人
PD
‑1抗体由两条轻链和两条重链组成，其中所述两条轻链由
SEQ ID NO:5
中所示的氨基酸序列组成，其中所述两条重链由
SEQ ID NO:10
‑
15
中任一个所示的氨基酸序列或其组合组成
。5.
根据权利要求1所述的组合物，其中所述抗人
PD
‑1抗体由两条轻链和两条重链组成，其中所述两条轻链由
SEQ ID NO:5
中所示的氨基酸序列组成，其中所述两条重链由
SEQ ID NO:11
中所示的氨基酸序列组成
。6.
根据权利要求1所述的组合物，其中所述抗体是派姆单抗
。7.
根据权利要求1所述的组合物，其中所述抗体是派姆单抗变体
。8.
根据权利要求1至7中任一项所述的组合物，其中所述甲硫氨酸
105
的氧化是约
0.2
‑
3.0
％
。9.
根据权利要求1至7中任一项所述的组合物，其中所述甲硫氨酸
105
的氧化是约
0.5
‑
3.0
％，其通过还原肽作图
、
液相色谱和质谱测量
。10.
根据权利要求1至7中任一项所述的组合物，其中所述甲硫氨酸
105
的氧化是
0.5
‑
3.0
％
。11.
一种组合物，其包含抗人
PD
‑1抗体主要物质以及所述抗人
PD
‑1抗体主要物质的酸性物质，所述抗人
PD
‑1抗体主要物质包含由两条重链和两条轻链组成的抗体，每条重链由
SEQ ID NO:11
的氨基酸序列组成，和每条轻链由
SEQ ID NO:5
的氨基酸序列组成，其中所述酸性物质的量是
1.0
‑
12.0
％
。12.
一种组合物，其包含从中国卵巢细胞产生的抗人
PD
‑1抗体主要物质以及所述抗人
PD
‑1抗体主要物质的酸性物质，所述中国卵巢细胞包含编码轻链的多核苷酸和编码重链的多核苷酸，或者编码轻链和重链的多核苷酸，其中所述重链由
SEQ ID NO:10、13
或
15
的氨基酸序列组成，和所述轻链由
SEQ ID NO:5
的氨基酸序列组成，其中所述酸性物质的量是
1.0
‑
12.0
％
。13.
一种包含抗人
PD
‑1抗体主要物质以及所述抗人
PD
‑1抗体主要物质的酸性和碱性物质的组合物，所述抗人
PD
‑1抗体主要物质包含由两条重链和两条轻链组成的抗体，每条重链由
SEQ ID NO:11
的氨基酸序列组成，和每条轻链由
SEQ ID NO:5
的氨基酸序列组成，其中所述主要物质的量是
65
‑
85
％
。14.
根据权利要求
11
至
13
中任一项所述的组合物，其中所述酸性物质的量是约6‑
10
％
。15.
根据权利要求
11
‑
14
中任一项所述的组合物，其包含约1‑4％的酸性1物质
。
16.
根据权利要求
11
‑
15
中任一项所述的组合物，其包含约1‑5％的酸性变体物质
。17.
根据权利要求
11
‑
16
中任一项所述的组合物，其中所述主要物质的量是约
65
‑
80
％
。18.
根据权利要求
11
‑
16
中任一项所述的组合物，其中所述主要物质的量是约
70
‑
80
％
。19.
根据权利要求
12
‑
18
中任一项所述的组合物，其中所述碱性物质是约
12
‑
27
％
。20.
根据权利要求1‑
19
中任一项所述的组合物，其中所述抗人
PD
‑1抗体是从哺乳动物宿主细胞产生的，以及所述组合物是收获的细胞培养液
。21.
根据权利要求
11
‑
20
中任一项所述的组合物，其中所述主要物质
、
酸性
、
酸性
1、
酸性变体或碱性物质通过阳离子交换色谱法和任选地随后通过质谱法鉴定
。22.
根据权利要求
21
所述的组合物，其中使用阳离子交换柱
ProPac WCX
‑
10、Sepax Proteomix WCX
‑
NP1.7、Thermo MAbPac SCX
‑
10G
或
Thermo MAbPac SCX50G。23.
根据权利要求
21
所述的组合物，其中使用具有羧酸酯官能团的弱阳离子交换柱
。24.
根据权利要求
23
所述的组合物，其中所述主要物质
、
酸性
、
酸性
1、
酸性变体或碱性物质通过
ProPac WCX
‑
10
确定，流动相
(A)
是
24mM MES pH 6.1
和4％乙腈，以及流动相
(B)
是
20mM
磷酸钠
、95mM NaClpH 8.0
和4％乙腈，柱温
35℃
，应用梯...

【专利技术属性】
技术研发人员：M，
申请(专利权)人：默沙东有限责任公司，
类型：发明
国别省市：