延长治疗剂在家畜动物中的半衰期的组合物和使用方法技术

提供了用于延长一种或多种多肽在家畜动物中的半衰期的组合物及其使用方法。所述组合物包括变体IgG Fc区。Fc区。Fc区。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】延长治疗剂在家畜动物中的半衰期的组合物和使用方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2020年12月7日提交的美国临时申请号63/122,365的优先权，该临时申请的内容全文以引用方式并入。


[0003]本公开总体上涉及与其野生型对应物相比在家畜动物中具有延长的半衰期的多肽(例如，融合多肽，诸如多肽
‑
Fc区融合物；或者结合分子，诸如抗体、或受体
‑
Fc融合物的配体结合部分)。
[0004]经由EFS
‑
WEB提交的序列表
[0005]在MPEP
§
1730II.B.2(a)中授权和阐述的经由USPTO EFS
‑
WEB服务器电子提交的以下序列表的全部内容全文以引用方式并入本文以用于所有目的。序列表在如下标识的电子提交文本文件中：
[0006]文件名：47406
‑
0017WO1_Sequence_Listing.txt
[0007]创建日期：2021年12月1日
[0008]大小(字节)：64,960字节

技术介绍

[0009]抗体的Fc区起许多功能作用，包括但不限于保护抗体免于通过溶酶体途径降解和介导抗体效应子功能。随着抗体在家畜动物中作为治疗剂的用途的增加，不仅选择最佳的Fab，而且将其与适当的Fc组合以获得期望的半衰期和效应子功能的关注已经增加。
[0010]本领域几乎没有关于延长用于家畜动物的多肽治疗剂(例如，抗体)的半衰期的指导。本公开通过提供改善多肽(例如，抗体)在家畜动物中的血清持久性的Fc区变体来补救该缺失。

技术实现思路

[0011]本文提供了可用于治疗性多肽的家畜动物的Fc(例如，IgG Fc区变体)或其FcRn结合片段。本公开的特征在于与对照多肽(例如，野生型对应物IgG Fc区)相比与家畜动物FcRn的结合增加的多肽。在一些情况下，在pH 5.5、pH 6.0和/或pH 6.5下，对照多肽相比，这些多肽与FcRn家畜动物的结合增加。在一些情况下，与在中性pH(例如，pH 7.0、7.1、7.2、7.3、7.4或7.5)下相比，这些多肽可以例如在酸性pH(例如，pH 5.5、pH 6.0或pH 6.5)下以更高的水平结合家畜动物FcRn。在一些情况下，与在pH 7.4下相比，这些多肽在pH 5.5和/或6.0下以更高的水平结合家畜动物FcRn。本公开部分地涉及与其野生型对应物相比在家畜动物中具有延长的半衰期的多肽。例如，提供了结合分子(例如，抗体或受体的配体结合部分)，其相对于本文所公开的不与Fc区或其FcRn结合区连接的这些结合分子的型式具有延长的半衰期。还提供了酶
‑
Fc区融合物、配体
‑
Fc区融合物、纳米抗体
‑
Fc融合物和肽
‑
Fc区融合物，其中所述融合物与其野生型对应物相比具有延长的半衰期。除了具有延长半衰期
的一个或多个取代(相对于相同物种的家畜动物的野生型Fc区)之外，Fc区还可包括其他取代，例如增加效应子功能、降低效应子功能、增加与蛋白A的结合和/或降低多肽的异质性(例如，通过去除Fc区中的一个或多个翻译后修饰)。家畜动物的Fc区序列可以来自家畜动物的任何抗体。在一些情况下，家畜动物的Fc区序列来自IgG，其亚类在本文别处描述。
[0012]本公开的特征在于重组蛋白，该重组蛋白包含(1)特异性结合配体或蛋白质表位的结合结构域或其片段，其中结合结构域连接至(2)如本文所公开的包含家畜动物的Fc区(CH2+CH3区)或其FcRn结合区的结构域。在一些情况下，结合结构域包含(i)例如家畜动物或人/人源化抗体的六个互补决定区(CDR)；(ii)纳米抗体；(iii)结合配体或其配体结合片段的可溶性受体结合结构域，以及(iv)家畜动物受体蛋白的细胞外结构域。
[0013]本公开还提供了一种组合物，该组合物包含：(1)包含第一Fc区(例如，CH2结构域、CH3结构域、CH2+CH3结构域)的第一多肽，所述第一Fc区包含本文所述的家畜动物IgG Fc区变体；以及(2)包含第二Fc区的第二多肽，所述第二Fc区包含本文所述的家畜动物IgG Fc区变体。所述第一多肽和所述第二多肽可以通过所述第一Fc区和所述第二Fc区缔合。在一些情况下，所述第一Fc区和所述第二Fc区的氨基酸序列是相同的。在其他情况下，所述第一Fc区和所述第二Fc区的氨基酸序列是不同的(例如，有1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个或25个氨基酸不同)。
[0014]在一些实施方案中，Fc区变体是选自由IgG1a、IgG1b、IgG2a、IgG2b、IgG3、IgG4a、IgG4b、IgG5a、IgG5b、IgG6a和IgG6b组成的组的猪IgG的Fc变体。
[0015]在一些实施方案中，Fc区变体是选自由IgG1、IgG2和IgG3组成的组的牛IgG的Fc变体。
[0016]在一些实施方案中，Fc区变体是选自由IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgG5、IgG6和IgG7组成的组的马IgG的Fc变体。
[0017]在一些实施方案中，Fc区变体是选自由IgG1、IgG2和IgG3组成的组的绵羊IgG的Fc变体。
[0018]在一些实施方案中，Fc区变体是选自由IgG1、IgG2和IgG3组成的组的山羊IgG的Fc变体。
[0019]还公开了包含本文所公开的家畜动物IgG Fc区变体和多肽的融合分子。在一些情况下，家畜动物IgG Fc区变体与多肽共价连接(例如，通过铰链区或接头)。在一些情况下，所述多肽是家畜动物受体蛋白的配体结合结构域、家畜动物受体蛋白的细胞外结构域或抗原结合结构域。在一些情况下，所述多肽选自IL
‑
13Rα1或IL
‑
13Rα2、家畜动物红细胞生成素(EPO)、家畜动物CTLA4、家畜动物LFA3、家畜动物VEGFR1/VEGFR3、家畜动物IL
‑
1R、家畜动物GLP
‑
1受体激动剂和家畜动物血小板生成素结合肽的配体结合结构域或细胞外结构域。在一些情况下，所述多肽是scFv、纳米抗体或单结构域抗体。在一些情况下，IgG Fc区变体是家畜动物IgG1a抗体Fc区的变体。在一些情况下，IgG Fc区变体是家畜动物IgG1b抗体Fc区的变体。在一些情况下，IgG Fc区变体是家畜动物IgG2抗体Fc区的变体。
[0020]在一些方面，本公开提供了包含家畜动物的IgG Fc区变体或其FcRn结合区的多肽，其中该多肽包含在选自由以下组成的组的至少一个位置处的氨基酸取代：
[0021](i)与所述家畜动物的野生型IgG的氨基酸位置250对应的位置，其中所述氨基酸
取代选自由S250本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种多肽，所述多肽包含家畜动物的IgG Fc区变体或其FcRn结合区，其中所述多肽包含在选自由以下组成的组的至少一个位置处的氨基酸取代：(i)与所述家畜动物的野生型IgG的氨基酸位置250对应的位置，其中所述氨基酸取代选自由S250Q、S250E、T250Q、T250E、I250Q、I250E、A250Q、A250E、V250Q和V250E组成的组；(ii)与所述家畜动物的野生型IgG的氨基酸位置252对应的位置，其中所述氨基酸取代选自由M252Y、M252W、M252F、T252Y、T252W、T252F、K252Y、K252W和K252F组成的组；(iii)与所述家畜动物的野生型IgG的氨基酸位置254对应的位置，其中所述氨基酸取代选自由S254T、S254R、S254K、S254H、T254R、T254K和T254H组成的组；(iv)与所述家畜动物的野生型IgG的氨基酸位置256对应的位置，其中所述氨基酸取代选自由T256A、T256D、T256E、M256A、M256D、M256E、K256A、K256D和K256E组成的组；(v)与所述家畜动物的野生型IgG的氨基酸位置286对应的位置，其中所述氨基酸取代选自由S286Y、S286F、S286W、S286L、S286D、S286E、T286Y、T286F、T286W、T286L、T286D和T286E组成的组；(vi)与所述家畜动物的野生型IgG的氨基酸位置309对应的位置，其中所述氨基酸取代选自由Q309V、Q309D和Q309E组成的组；(vii)与所述家畜动物的野生型IgG的氨基酸位置311对应的位置，其中所述氨基酸取代选自由Q311V、Q311K、Q311R、Q311L、Q311H、E311V、E311K、E311R、E311L、E311H、K311V、K311R、K311L、K311H、D311V、D311K、D311R、D311L和D311H组成的组；(viii)与所述家畜动物的野生型IgG的氨基酸位置426对应的位置，其中所述氨基酸取代选自由A426Y、A426F、A426H、V426Y、V426F、V426H、G426Y、G426F和G426H组成的组；(ix)与所述家畜动物的野生型IgG的氨基酸位置428对应的位置，其中所述氨基酸取代选自由M428L、M428Y、M428F、H428L、H428Y和H428F组成的组；(x)与所述家畜动物的野生型IgG的氨基酸位置434对应的位置，其中所述氨基酸取代选自由N434A、N434H、N434F、N434S、N434W、N434Y、H434A、H434F、H434S、H434W和H434Y组成的组；以及(xi)与所述家畜动物的野生型IgG的氨基酸位置436对应的位置，其中所述氨基酸取代选自由Y436H、T436H、F436H和V436H组成的组；其中所述氨基酸位置基于EU编号，并且其中当与所述野生型IgG的Fc结构域相比时，所述多肽对所述家畜动物FcRn的结合亲和力增加。2.如权利要求1所述的多肽，其中所述家畜动物是猪。3.如权利要求2所述的多肽，其中所述多肽包含在选自由以下组成的组的至少一个位置处的氨基酸取代：(i)与所述家畜动物的野生型IgG的氨基酸位置250对应的位置，其中所述氨基酸取代选自由T250Q、T250E、I250Q和I250E组成的组；(ii)与所述家畜动物的野生型IgG的氨基酸位置252对应的位置，其中所述氨基酸取代选自由M252Y、M252W和M252F组成的组；(iii)与所述家畜动物的野生型IgG的氨基酸位置254对应的位置，其中所述氨基酸取代选自由S254T、S254R、S254K和S254H组成的组；(iv)与所述家畜动物的野生型IgG的氨基酸位置256对应的位置，其中所述氨基酸取代
选自由T256A、T256D和T256E组成的组；(v)与所述家畜动物的野生型IgG的氨基酸位置286对应的位置，其中所述氨基酸取代选自由T286Y、T286F、T286W、T286L、T286D和T286E组成的组；(vi)与所述家畜动物的野生型IgG的氨基酸位置309对应的位置，其中所述氨基酸取代选自由Q309V、Q309D和Q309E组成的组；(vii)与所述家畜动物的野生型IgG的氨基酸位置311对应的位置，其中所述氨基酸取代选自由Q311V、Q311K、Q311R、Q311L、Q311H、E311V、E311K、E311R、E311L和E311H组成的组；(viii)与所述家畜动物的野生型IgG的氨基酸位置426对应的位置，其中所述氨基酸取代选自由A426Y、A426F、A426H、V426Y、V426F和V426H组成的组；(ix)与所述家畜动物的野生型IgG的氨基酸位置428对应的位置，其中所述氨基酸取代选自由M428L、M428Y、M428F、H428L、H428Y和H428F组成的组；(x)与所述家畜动物的野生型IgG的氨基酸位置434对应的位置，其中所述氨基酸取代选自由N434A、N434H、N434F、N434S、N434W、N434Y、H434A、H434F、H434S、H434W和H434Y组成的组；以及(xi)与所述家畜动物的野生型IgG的氨基酸位置436对应的位置，其中所述氨基酸取代选自由Y436H和T436H组成的组。4.如权利要求3所述的多肽，其中所述多肽包含在选自由以下组成的组的至少一个位置处的氨基酸取代：(i)与所述家畜动物的野生型IgG的氨基酸位置252对应的位置，其中所述氨基酸取代是M252Y；(ii)与所述家畜动物的野生型IgG的氨基酸位置286对应的位置，其中所述氨基酸取代是T286E；(iii)与所述家畜动物的野生型IgG的氨基酸位置309对应的位置，其中所述氨基酸取代是Q309D或Q309V；(iv)与所述家畜动物的野生型IgG的氨基酸位置311对应的位置，其中所述氨基酸取代是Q311V；(v)与所述家畜动物的野生型IgG的氨基酸位置426对应的位置，其中所述氨基酸取代是A426Y；(vi)与所述家畜动物的野生型IgG的氨基酸位置428对应的位置，其中所述氨基酸取代是M428Y；以及(vii)与所述家畜动物的野生型IgG的氨基酸位置434对应的位置，其中所述氨基酸取代选自由N434Y组成的组。5.如权利要求2
‑
4中任一项所述的多肽，其中所述野生型IgG Fc是包含选自由SEQ ID NO:1至11组成的组的氨基酸序列的猪IgG Fc。6.如权利要求1所述的多肽，其中所述家畜动物是牛。7.如权利要求6所述的多肽，其中所述多肽包含在选自由以下组成的组的至少一个位置处的氨基酸取代：(i)与所述家畜动物的野生型IgG的氨基酸位置250对应的位置，其中所述氨基酸取代选自由T250Q和T250E组成的组；
(ii)与所述家畜动物的野生型IgG的氨基酸位置252对应的位置，其中所述氨基酸取代选自由M252Y、M252W、M252F、T252Y、T252W和T252F组成的组；(iii)与所述家畜动物的野生型IgG的氨基酸位置254对应的位置，其中所述氨基酸取代选自由S254T、S254R、S254K、S254H、T254R、T254K和T254H组成的组；(iv)与所述家畜动物的野生型IgG的氨基酸位置256对应的位置，其中所述氨基酸取代选自由T256A、T256D和T256E组成的组；(v)与所述家畜动物的野生型IgG的氨基酸位置286对应的位置，其中所述氨基酸取代选自由T286Y、T286F、T286W、T286L、T286D和T286E组成的组；(vi)与所述家畜动物的野生型IgG的氨基酸位置309对应的位置，其中所述氨基酸取代选自由Q309V、Q309D和Q309E组成的组；(vii)与所述家畜动物的野生型IgG的氨基酸位置311对应的位置，其中所述氨基酸取代选自由Q311V、Q311K、Q311R、Q311L和Q311H组成的组；(viii)与所述家畜动物的野生型IgG的氨基酸位置426对应的位置，其中所述氨基酸取代选自由A426Y、A426F、A426H、V426Y、V426F和V426H组成的组；(ix)与所述家畜动物的野生型IgG的氨基酸位置434对应的位置，其中所述氨基酸取代选自由N434A、N434H、N434F、N434S、N434W和N434Y组成的组；以及(x)与所述家畜动物的野生型IgG的氨基酸位置436对应的位置，其中所述氨基酸取代是Y436H。8.如权利要求7所述的多肽，其中所述多肽包含在选自由以下组成的组的至少一个位置处的氨基酸取代：(i)与所述家畜动物的野生型IgG的氨基酸位置252对应的位置，其中所述氨基酸取代是T252Y；(ii)与所述家畜动物的野生型IgG的氨基酸位置309对应的位置，其中所述氨基酸取代是Q309V；(iii)与所述家畜动物的野生型IgG的氨基酸位置311对应的位置，其中所述氨基酸取代是Q311V；(iv)与所述家畜动物的野生型IgG的氨基酸位置434对应的位置，其中所述氨基酸取代选自由N434Y组成的组；以及(v)与所述家畜动物的野生型IgG的氨基酸位置436对应的位置，其中所述氨基酸取代选自由Y436H组成的组。9.如权利要求6
‑
8中任一项所述的多肽，其中所述野生型IgG Fc是包含选自由SEQ ID NO:12至14组成的组的氨基酸序列的牛IgG Fc。10.如权利要求1所述的多肽，其中所述家畜动物是马。11.如权利要求10所述的多肽，其中所述多肽包含在选自由以下组成的组的至少一个位置处的氨基酸取代：(i)与所述家畜动物的野生型IgG的氨基酸位置250对应的位置，其中所述氨基酸取代选自由T250Q、T250E、A250Q、A250E、V250Q和V250E组成的组；(ii)与所述家畜动物的野生型IgG的氨基酸位置252对应的位置，其中所述氨基酸取代选自由M252Y、M252W、M252F、K252Y、K252W和K252F组成的组；
(iii)与所述家畜动物的野生型IgG的氨基酸位置254对应的位置，其中所述氨基酸取代选自由S254T、S254R、S254K、S254H、T254R、T254K和T254H组成的组；(iv)与所述家畜动物的野生型IgG的氨基酸位置256对应的位置，其中所述氨基酸取代选自由T256A、T256D、T256E、M256A、M256D、M256E、K256A、K256D和K256E组成的组；(v)与所述家畜动物的野生型IgG的氨基酸位置286对应的位置，其中所述氨基酸取代选自由S286Y、S286F、S286W、S286L、S286D、S286E、T286Y、T286F、T286W、T286L、T286D和T286E组成的组；(vi)与所述家畜动物的野生型IgG的氨基酸位置309对应的位置，其中所述氨基酸取代选自由Q309V、Q309D和Q309E组成的组；(vii)与所述家畜动物的野生型IgG的氨基酸位置311对应的位置，其中所述氨基酸取代选自由Q311V、Q311K、Q311R、Q311L、Q311H、K311V、K311R、K311L和K311H组成的组；(viii)与所述家畜动物的野生型IgG的氨基酸位置426对应的...

【专利技术属性】
技术研发人员：W，
申请(专利权)人：因外泰克斯公司，
类型：发明
国别省市：