副干酪乳酪杆菌制造技术

本发明专利技术提供副干酪乳酪杆菌

【技术实现步骤摘要】
副干酪乳酪杆菌IOB413后生元粉活性成分的制备方法及应用


[0001]本专利技术涉及微生物
，尤其是副干酪乳酪杆菌（
Lacticaseibacillus paracasei
）
IOB413
后生元粉活性成分的制备和分离方法，以及其在抗幽门螺杆菌方面的用途
。

技术介绍

[0002]幽门螺旋杆菌作为人类的
I
类致癌因子，与消化道溃疡
、
慢性胃炎
、
胃黏膜相关淋巴组织淋巴癌和胃癌等人类常见疾病紧密相关
。
根据
2020
年相关报道，幽门螺旋杆菌全球自然人群感染率超过
50%
，我国平均感染率为
59%
，儿童平均感染率为
40%
，其中，约
10
‑
15%
的感染者可发展为消化性溃疡，约
5%
可发展为胃黏膜萎缩，小于
1%
感染者可发展为胃癌，因此幽门螺旋杆菌目前依然是我国人民生命健康的重要威胁
。
[0003]幽门螺旋杆菌的治疗方法主要有四联抗生素疗法和三联抗生素疗法
。
四联抗生素疗法一般两周
14
天为一疗程，疗程结束后一周内复查，或一个月后复查
。
三联疗法即使用奥美拉唑
、
阿莫西林和克林霉素，三种药物的用量需遵医嘱，且按时按量服用
。
但抗生素的大量使用会导致幽门螺旋杆菌整体耐药性上升，愈后再感染率升高，而且抗生素的大量服用会导致人体正常菌落失衡，多会出现呕吐
、
恶心
、
食欲不振等不良反应，甚至引起其它肠胃疾病的发生
。
[0004]因此，寻找预防治疗幽门螺旋杆菌感染的新方法势在必行，而益生菌和益生菌产品以其温和
、
安全
、
高效等特性已成为目前替代抗生素疗法的一种有效途径和选择
。

技术实现思路

[0005]针对现有技术的不足，本专利技术目的在于提供一种副干酪乳酪杆菌
IOB413
后生元粉活性成分的制备和分离方法，制备得到的活性成分产品以及用途
。
[0006]本专利技术使用的副干酪乳酪杆菌
IOB413
（
Lacticaseibacillus paracasei
）分离自天然发酵酸面团中，于 2018 年 6 月 29 日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（
CGMCC
），保藏地址为北京市朝阳区北辰西路 1 号院 3 号，其保藏编号为 CGMCCNo.16022。
[0007]此菌株已经进行了菌株保藏和理化指标的检测，于
2021
年3月
19
日在中国食品发酵工业研究院有限公司进行了细菌鉴定检测，菌落为白色
、
圆形
、
表面湿润
、
不透明，边缘整齐的菌落
。
[0008]本专利技术的技术方案如下：本专利技术提供一种副干酪乳酪杆菌
IOB413
后生元粉活性成分的制备和分离方法，依据该方法所得到的活性成分产品，以及其在制备抗幽门相关药物中的应用
。
[0009]第一方面，本专利技术提供一种副干酪乳酪杆菌
IOB413
后生元粉活性成分的制备和分离方法，具体步骤为：（1）副干酪乳酪杆菌
IOB413
的培养和发酵后生元粉的制备；
（2）发酵后生元粉活性成分的大孔吸附层析法和阳离子交换法分离；（3）发酵后生元粉活性成分的活性验证；（4）发酵后生元粉活性成分的理化性质分析
。
[0010]优选地，步骤（1）包括：菌种活化和发酵培养，种子的最佳种龄为
20
‑
24h
，料水比为1：
1.5
，接种量为5×
107CFU/mL
，发酵时间为
32h。
[0011]优选地，步骤（1）包括：干燥及粉碎，干燥温度在
55
‑
60℃
，粉碎温度
‑
100℃
，主机转速
50Hz
，风机
38Hz
，进料速度
15Hz
，出料
25Hz
，粉末细度
300
目到
500
目
。
[0012]优选地，步骤（2）中，大孔吸附层析法分离活性物质的操作步骤为：
a.XAD
‑
16N
大孔吸附树脂预处理；
b.
柱子平衡预处理；
c.
将经低温粉碎后的
IOB413
后生元成品与纯净水按1：3混匀，离心取上清液，以
4mL/min
的流速流过
XAD
‑
16N
大孔吸附树脂，去除未吸附的上清液，再依次用2倍柱体积的
10%、20%、40%、60%、80%、100%
的乙醇，以
2mL/min
的流速洗脱大孔树脂上吸附的物质，并收集各梯度的洗脱液
。
[0013]优选地，步骤（2）中使用2倍柱体积的
20%
的乙醇进行洗脱
。
[0014]优选地，步骤（2）中，阳离子交换法分离活性物质的操作步骤为：
d.
从
XAD
‑
16N
大孔吸附树脂中粗分离获得洗脱液；
e.
将阳离子交换填料
SKI
‑
20
（粒径
50
‑
75
µ
m
）预处理后进行湿法装柱并清洗；
f.
缓冲液
(20mM
醋酸钠，
pH4.0)
继续冲大约3‑5个柱体积来平衡层析柱；
g.
平衡后上样品，用缓冲液冲洗掉柱子上未结合杂蛋白，然后用不同梯度的洗脱液进行洗脱：
20mM
醋酸钠
+0.2M
氯化钠
、20mM
醋酸钠
+0.5M
氯化钠
、20mM
醋酸钠
+1.0M
氯化钠，收集各梯度的洗脱液
。
[0015]优选地，步骤（2）中使用
20mM
醋酸钠
+0.2M
氯化钠进行洗脱
。
[0016]优选地，步骤（3）包括副干酪乳酪杆菌
IOB413
后生元粉活性成分的预处理：按
0.5g/
份，称取8份经低温粉碎后的
IOB413
后生元粉，分别加入甲醇
、
乙醇
、
乙本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种副干酪乳酪杆菌
IOB413
后生元粉活性成分的制备方法，其特征是，具体步骤为：（1）副干酪乳酪杆菌
IOB413
的培养和发酵后生元粉的制备；（2）发酵后生元粉活性成分的大孔吸附层析法和阳离子交换法分离；（3）发酵后生元粉活性成分的活性验证；（4）发酵后生元粉活性成分的理化性质分析
。2.
根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤（1）包括：菌种活化和发酵培养，种子的最佳种龄为
20
‑
24h
，料水比为1：
1.75
，接种量为5×
107CFU/mL
，发酵时间为
32h。3.
根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤（1）包括：干燥及粉碎，干燥温度在
55
‑
60℃
，粉碎温度
‑
100℃
，主机转速
50Hz
，风机
38Hz
，进料速度
15Hz
，出料
25Hz
，粉末细度
300
目到
500
目
。4.
根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：步骤（2）中，大孔吸附层析法分离活性物质的操作步骤为：
a.XAD
‑
16N
大孔吸附树脂预处理；
b.
柱子平衡预处理；
c.
将经低温粉碎后的
IOB413
后生元成品与纯净水按1：3混匀，离心取上清液，以
4mL/min
的流速流过
XAD
‑
16N
大孔吸附树脂，去除未吸附的上清液，再依次用2倍柱体积的
10%、20%、40%、60%、80%、100%
的乙醇，以
2mL/min
的流速洗脱大孔树脂上吸附的物质，并收集各梯度的洗脱液
。5.
根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：步骤（2）中使用2倍柱体积的
20%
的乙醇进行洗脱
。6.
根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于：步骤（2）中，阳离子交换法分离活性物质的操作步骤为：
d.
从
XAD
‑
16N
大孔吸附树脂中粗分离获得洗脱液；
e.
将阳离子交换填料
SKI
‑
20
（粒径
50
‑
75
µ
m
）预处理后进行湿法装柱并清洗；
f.
缓冲液
(20mM
醋酸钠，
pH4.0)
继续冲大约3‑5个柱体积来平衡层析柱；
g.
平衡后上样品，用缓冲液冲洗掉柱子上未结合杂蛋白，然后用不同梯度的洗脱液进行洗脱：
20mM
醋酸钠
+0.2M
氯化钠
、20mM
醋酸钠
+0.5M
氯化钠
、20mM
醋酸钠
+1.0M
氯化钠，收集各梯度的洗脱液
。7.
根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于：步骤（2）中使用
20mM
醋酸钠
+0.2M
氯化钠进行洗脱
。8.

【专利技术属性】
技术研发人员：梁武，王海宽，聂金蕊，韩雪梅，张会图，朱振华，
申请(专利权)人：天津创源生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：