一种枯草芽孢杆菌IOB430发酵后生元粉的制备方法及应用技术

本发明专利技术提供一种枯草芽孢杆菌IOB430发酵后生元粉的制备方法及应用，依据该方法所得到的生物酵技术产品，以及其在制备降尿酸相关药物中的应用，通过实验获得了枯草芽孢杆菌IOB430的最佳活化、培养和发酵的最优条件参数，以小扁豆粉为发酵原料，获得了枯草芽孢杆菌IOB430发酵后生元粉产品，经实验验证，枯草芽孢杆菌IOB430发酵后生元粉产品对高尿酸血症大鼠关节肿胀有显著的改善作用，降低高尿酸血症中的黄嘌呤氧化酶活力效果较为显著，显著降低高尿酸血症大鼠血脂中的TG、TC水平，明显的降低血液中的ALT、AST活力，减轻肝细胞发生损害，有效保护肝细胞，且效果均优于枯草芽孢杆菌IOB430单纯菌粉。杆菌IOB430单纯菌粉。杆菌IOB430单纯菌粉。

【技术实现步骤摘要】
一种枯草芽孢杆菌IOB430发酵后生元粉的制备方法及应用


[0001]本专利技术涉及微生物
，尤其是一种枯草芽孢杆菌IOB430发酵后生元粉的制备方法，以及其在制备降尿酸相关药物中的应用。

技术介绍

[0002]近年来，由于益生菌安全性高、无耐药性及对宿主健康的影响被人们所熟知，已被广泛应用于食品加工和人类健康等多个领域，目前已有研究表明，益生菌具有增强免疫力、改善肠道功能、缓解代谢性疾病等作用。
[0003]高尿酸血症是体内嘌呤代谢紊乱导致血尿酸浓度的异常增高的一种代谢性疾病，特征是血液中尿酸水平异常升高，可引发多种并发症，如慢性肾脏疾病、心血管疾病和痛风等，威胁人体健康。目前使用的抗高尿酸血症的药物主要包括：秋水仙碱、苯溴马隆、别嘌呤醇、黄嘌呤氧化酶（XOD）抑制剂等，对降低血清尿酸有一定的疗效，但是长期使用会存在一定的耐药性和副作用。因此，提供一种具有安全、无副作用，又能缓解高尿酸血症和痛风的产品十分必要。
[0004]因此，随着对益生菌等微生态制剂的研究不断深入，使用益生菌、后生元等微生态制剂调节肠道微生态，提高肠道免疫力，可促进体内尿酸从肠道排出，缓解高尿酸血症，成为了降尿酸的有效、安全手段。
[0005]然而，目前一些关于枯草芽孢杆菌的功能研究主要涉及以下几个方面：改善宿主肠道内的微生物平衡（中国专利申请，CN202111601933 .2，公开日：CN114214241A，公开日：20220322）；应用到抗炎、屏障功能及抵抗肠毒性大肠杆菌对肠道损伤中（中国专利申，CN202111166134 .7，公开号：CN113773997A，公开日：20211210）；枯草芽孢杆菌及其制备具有调节肠道功能的普洱茶方法（中国专利申请，CN201810912284 .X，公开号：CN108998393A，公开日：20181214），并未见有枯草芽孢杆菌在降尿酸方面应用报道。因此，本专利技术提供了一种枯草芽孢杆菌IOB430发酵小扁豆后生元粉的制备方法，以及其在降尿酸方面的应用，对高尿酸血症具有显著的作用效果，带来重要科研和临床应用价值，有利于开发一款能够缓解高尿酸血症病症且不损害人体健康的产品。

技术实现思路

[0006]本专利技术使用的枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）IOB430是自主筛选获得，筛选自发酵大豆酱中，此菌株已经进行了菌株保藏和理化指标的检测，已于2018年6月29日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.16024，于2020年01月08日在中国食品发酵工业研究院有限公司进行了细菌鉴定检测，菌落为浅黄色、圆形、表面干燥、半透明、边缘不整齐的菌落。
[0007]本专利技术提供一种枯草芽孢杆菌IOB430发酵后生元粉的制备方法，依据该方法所得到的生物酵技术产品，以及其在制备降尿酸相关药物中的应用。
[0008]第一方面，本专利技术提供一种枯草芽孢杆菌IOB430发酵后生元粉的制备方法，具体
步骤为：（1）枯草芽孢杆菌IOB430（保藏编号CGMCC No.16024）菌株活化和培养；（2）用所述活化后的枯草芽孢杆菌IOB430发酵，制备其灭活后生元粉；（3）对所述后生元粉进行纳豆激酶活性测定。
[0009]进一步地，所述步骤（1）中，菌株活化方法为使用营养肉汤固态培斜面培养基在36
±
2℃环境中活化，活化时间为14
‑
24h。
[0010]进一步地，所述步骤（1）中，菌株活化时间优选为20h。
[0011]进一步地，所述步骤（1）中，菌株培养方法为使用营养肉汤液体培养基在36
±
2℃环境下，置于摇床中，通气培养，培养时间为4
‑
24h。
[0012]进一步地，所述步骤（1）中，培养时间优选为16
‑
20h。
[0013]进一步地，所述步骤（2）中，发酵原料为小扁豆粉，菌种接种步骤中，料水比范围是1：1.75
‑
2，接种量为1
×
106
‑5×
107 CFU/g，发酵时间为24
‑
36h。
[0014]进一步地，所述步骤（2）中，菌种接种步骤中，料水比优选为1：1.75，接种量优选为5
×
107CFU/g，发酵时间优选为32h。
[0015]进一步地，所述步骤（2）中，发酵反应后将样品进行高温干燥，条件为80
‑
100℃，时间24
‑
48h。
[0016]进一步地，所述步骤（2）中，将所述干燥后的样品进行超微粉碎，粉碎后进行包装，即为枯草芽孢杆菌IOB430发酵小扁豆后生元粉成品。
[0017]进一步地，所述步骤（3）中，采用紫外分光光度计法检测发酵产生的纳豆激酶的活性进行检测。
[0018]进一步地，所述步骤（3）中，样品中纳豆激酶X（FU/g）按以下公式计算为：X=（A
‑
A0）/(0.01
×
60
×
0.1)
×
D，式中：A为样品液吸光度，A0为空白管吸光度，D为样品的稀释率，其计算方法为定容体积（mL）/称样量（g）。
[0019]进一步地，还包括步骤（4），验证枯草芽孢杆菌IOB430发酵小扁豆后生元粉对高尿酸血症的改善作用。
[0020]进一步地，所述步骤（4）中，具体实验操作为：（a）取4
‑
5周龄、体重220
±
5g的SPF级昆明雄性大鼠若干只，随机分成5组：空白组、模型组、实验1组、实验2组、实验3组，每组10只；（b）鼠房控制温度 (22
±
2) ℃，湿度40%
‑
60%，12 h昼夜循环，自由饮食饮水，定期清洗鼠笼，基础饲料适应性饲养5天；（c）5天后模型组、实验1组、实验2组、实验3组每天上午灌胃给予氧嗪酸钾造模，用量为2.5g/kg，按照10 ml/kg 体重的剂量进行灌胃；（d）连续灌胃1周后眼内呲取血用磷钨酸法测定血清尿酸水平。
[0021]（e）制备大鼠高尿酸血症模型后，空白组与模型组灌胃给予10mL/kg生理盐水，实验1组、实验2组、实验3组每天以0.83ml/kg的剂量分别给予未发酵的小扁豆粉、枯草芽孢杆菌IOB430发酵小扁豆后生元粉和枯草芽孢杆菌IOB430菌粉干预4周；（f）在0天、7天、14天、28天进行相关指标的检测。
[0022]进一步地，所述步骤（f）中，检测指标为包括大鼠的体重、毛色、粪便、关节、尿酸。
[0023]进一步地，所述步骤（f）中，体重指标检测时间为每周同一时间，尿酸测定前进行
大鼠隔夜禁食不禁水12h。
[0024]第二方面，本专利技术提供一种利用上述枯草芽孢杆菌IOB430发酵后生元粉的制备方法所得到的枯草芽孢杆菌IOB430发酵后生元粉产品。
[0025]第三方面，本专利技术提供本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1. 一种枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）IOB430发酵后生元粉的制备方法，其特征在于：具体步骤为：步骤（1）枯草芽孢杆菌IOB430（保藏编号CGMCC No.16024）菌株活化和培养；步骤（2）用所述活化后的枯草芽孢杆菌IOB430发酵，制备其灭活后生元粉；步骤（3）对所述后生元粉进行纳豆激酶活性测定。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中，菌株活化方法为：使用营养肉汤固态培斜面培养基在36
±
2℃环境中活化，活化时间为14
‑
24h。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：菌株活化时间为20h。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中，菌株培养方法为：使用营养肉汤液体培养基在36
±
2℃环境下，置于摇床中，通气培养，培养时间为4
‑
24h。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中，培养时间为16
‑
20h。6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中，发酵原料为小扁豆粉，菌种接种步骤中，料水比范围是1：1.75
‑
2，接种量为1
×
106‑5×
107CFU/g，发酵时间为24
‑
36h。7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中，所述步骤（2）中，菌种接种步骤中，料水比为1：1.75，接种量为5
×
107CFU/g，发酵时间为32h。8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中，发酵反应后将样品进行高温干燥，条件为80
‑
100℃，时间24
‑
48h。9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中，将所述干燥后的样品进行超微粉碎，粉碎后进行包装，即为枯草芽孢杆菌IOB430发酵小扁豆后生元粉成品。10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（3）中，采用紫外分光光度计法检测发酵产生的纳豆激酶的活性进行检测。11.根据权利要求10所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（3）中，样品中纳豆激酶X（F...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩雪梅，梁武，王海宽，付田民，孙韵琪，刘晴晴，
申请(专利权)人：天津创源生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：