人CCR8结合剂制造技术

本发明专利技术涉及人CCR8(hCCR8)结合剂，其中所述hCCR8结合剂与非人灵长类CCR8具有交叉反应性。此类结合剂尤其可用于肿瘤内调节性T细胞的清除和一般的免疫疗法。的清除和一般的免疫疗法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】人CCR8结合剂


[0001]本专利技术涉及人CCR8(hCCR8)结合剂。此类结合剂尤其可用于肿瘤内调节性T细胞的清除和一般的免疫疗法。

技术介绍

[0002]调节性T(Treg)细胞是适应性免疫系统的组成部分之一，它们有助于维持对自身抗原的耐受性并预防自身免疫性疾病。然而，还发现Treg细胞在多种不同癌症的肿瘤微环境中高度富集(Colombo和Piconese，2007；Nishikawa和Sakaguchi，2014；Roychoudhuri等人，2015)。在肿瘤微环境中，Treg细胞通过降低肿瘤相关抗原(TAA)特异性T细胞免疫而有助于免疫逃逸，从而阻止有效的抗肿瘤活性。因此，Treg的高肿瘤浸润性通常与癌症患者的侵入性表型及不良预后相关(Shang等人，2015；Plitas等人，2016)。
[0003]由于认识到肿瘤浸润性Treg细胞的重要性及其在抑制抗肿瘤免疫中的潜在作用，人们提出了多种策略来调节肿瘤微环境中的Treg细胞。多项研究证明，调节Treg可提供显著的治疗益处(Elpek等人，2007)。
[0004]然而，与Treg调节相关的一个主要挑战是系统性去除或抑制Treg细胞可引发自身免疫。因此，为了预防自身免疫，特异性清除肿瘤浸润性Treg细胞同时保留肿瘤反应性效应T细胞和外周Treg细胞(例如，循环血液Treg细胞)至关重要。
[0005]Wang等人(PloSONE 2012,e30793)报道了CCR8在肿瘤浸润性FoxP3+T细胞上的表达增加，并且提示阻断CCR8可以导致抑制Treg迁移到肿瘤中。由于CCR8在肿瘤浸润性Treg上的高且相对特异性的表达，已经提示抗CCR8的中和性单克隆抗体用于在癌症治疗中调节和清除该Treg群体(EP3431105 A1和WO2019/157098A1)。WO2018/181425表明，在小鼠中，中和性抗CCR8 mAb能够通过抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)清除肿瘤组织中的Treg细胞，从而增强肿瘤免疫。通过它们的中和活性，这些抗体抑制Treg迁移到肿瘤中、逆转Treg的抑制功能并清除肿瘤内Treg(WO2019/157098A1)。最近，Wang等人(Cancer Immunol Immonother 2020,https://doi.org/10.1007/s00262
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020
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02583
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y)显示CCR8阻断可能会破坏肿瘤内Treg的稳定性，使其变成脆性表型，伴随抗肿瘤免疫的再激活并增加抗PD
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1治疗益处。
[0006]WO2007044756 A2中描述了针对人CCR8的中和性单克隆抗体，包括优选的抗体433H。EP3616720A1显示了在小鼠模型中使用抗鼠CCR8抗体的ADCC依赖性Treg清除增强了肿瘤免疫。然而，由于该抗体不结合人CCR8，因此不能被开发用于人类癌症治疗。与之相反，来自同一申请人的WO2020138489 A1提供了用于癌症治疗的具有抗人CCR8的ADCC活性的中和性抗体。其人源化抗体结合人CCR8并中和CCL1诱导的钙内流。这表明，与人CCR8的N末端区域结合是发挥中和活性的重要因素。有意思的是，现有技术的阻断性抗CCR8抗体，例如WO2007044756 A2和EP3616720 A1，实际上都结合CCR8的N末端区域。
[0007]需要新的人CCR8结合剂，以便于开发新的癌症治疗方案。

技术实现思路

[0008]专利技术人现已鉴定了新的人CCR8(hCCR8)结合剂。有意思的是，尽管现有技术教导与CCR8的N末端结合是抗CCR8抗体的中和活性所必需的，本专利技术的结合剂确实表现出阻断活性，却结合CCR8的胞外环。此外，已经发现这些结合剂与非人灵长类CCR8具有交叉反应性，从而便于在动物模型中进行体内测试。因此，专利技术人发现可以通过结合CCR8的胞外环而产生交叉反应性中和性结合剂。特别地，已经发现CCR8的胞外环2和3是产生人CCR8结合剂的合适靶标。因此，本专利技术的目的是提供与非人灵长类CCR8具有交叉反应性的阻断性hCCR8结合剂。因此，在第一个实施方案中，本专利技术提供了一种hCCR8结合剂，其中所述hCCR8结合剂与非人灵长类CCR8、优选食蟹猴(Macaca fascicularis)CCR8或恒河猴(Macaca mulatta)CCR8具有交叉反应性。
[0009]优选地，hCCR8结合剂结合hCCR8的胞外环。优选地，hCCR8结合hCCR8的胞外环2。
[0010]在其他实施方案中，hCCR8结合剂包含结合hCCR8的单域抗体部分。
[0011]在另外的实施方案中，结合hCCR8的单域抗体部分包含三个互补决定区(CDR)，即CDR1、CDR2和CDR3，其中CDR3选自：(a)NARARLWSVFDY(SEQ ID NO:10)的氨基酸序列；(b)NAKTVTRTGGVITGSRIEYDY(SEQ ID NO:11)的氨基酸序列；(c)YSKSLIGTSRYEI(SEQ ID NO:12)的氨基酸序列；(d)NVKTIKRTGGILTGSKIEYDY(SEQ ID NO:13)的氨基酸序列；(e)与SEQ ID NO:10、11、12或13具有至少80％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；以及(f)与SEQ ID NO:10、11、12或13具有3、2或1个氨基酸差异的氨基酸序列。
[0012]优选地，CDR1选自：(a)GFSFSSFA(SEQ ID NO:1)的氨基酸序列；(b)
[0013]GRAFSSYN(SEQ ID NO:2)的氨基酸序列；(c)RSIYNVLA(SEQ ID NO:3)的氨基酸序列；(d)RSIYNVRA(SEQ ID NO:4)的氨基酸序列；(e)GSTFSIKS(SEQ ID NO:5)的氨基酸序列；(f)与SEQ ID NO:1、2、3、4或5具有至少80％氨基酸同一性的氨基酸序列；以及(g)与SEQ ID NO:1、2、3、4或5具有3、2、1个氨基酸差异的氨基酸序列；并且CDR2选自：(a)ITTTGAT(SEQ ID NO:6)的氨基酸序列；(b)ISSSGT(SEQ ID NO:7)的氨基酸序列；(c)VWSSGNT(SEQ ID NO:8)的氨基酸序列；(d)ITRGAGI(SEQ ID NO:9)的氨基酸序列；(e)与SEQ ID NO:6、7、8或9具有至少80％氨基酸同一性的氨基酸序列；以及(f)与SEQ ID NO:6、7、8或9具有3、2、1个氨基酸差异的氨基酸序列。
[0014]在另外的实施方案中，单域抗体部分还包含与SEQ ID NO:14至20具有至少50％、优选至少60％、更优选至少70％、还更优选至少80％、更优选至少85％序列同一性的四个框架区(FR)。
[0015]在另外的实施方案中，单域抗体部分包含SEQ ID NO:21或SEQ ID NO:22或SEQ ID NO:23或SEQ ID本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种人CCR8(hCCR8)结合剂，其中所述结合剂包含单域抗体部分，所述单域抗体部分包含三个互补决定区(CDR)，即CDR1、CDR2和CDR3，其中CDR3选自：a)NARARLWSVFDY(SEQ ID NO:10)的氨基酸序列；b)NAKTVTRTGGVITGSRIEYDY(SEQ ID NO:11)的氨基酸序列；c)YSKSLIGTSRYEI(SEQ ID NO:12)的氨基酸序列；d)NVKTIKRTGGILTGSKIEYDY(SEQ ID NO:13)的氨基酸序列；e)与SEQ ID NO:10
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13中的至少一个序列具有至少80％氨基酸同一性的氨基酸序列；以及f)与SEQ ID NO:10
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13中的至少一个序列具有3、2或1个氨基酸差异的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的结合剂，其中所述单域抗体部分包含三个互补决定区(CDR)，即CDR1、CDR2和CDR3，其中CDR1选自：a)GFSFSSFA(SEQ ID NO:1)的氨基酸序列；b)GRAFSSYN(SEQ ID NO:2)的氨基酸序列；c)RSIYNVLA(SEQ ID NO:3)的氨基酸序列；d)RSIYNVRA(SEQ ID NO:4)的氨基酸序列；e)GSTFSIKS(SEQ ID NO:5)的氨基酸序列；f)与SEQ ID NO:1
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5中的至少一个序列具有至少80％氨基酸同一性的氨基酸序列；以及g)与SEQ ID NO:1
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5中的至少一个序列具有3、2、1个氨基酸差异的氨基酸序列；并且CDR2选自：h)ITTTGAT(SEQ ID NO:6)的氨基酸序列；i)ISSSGT(SEQ ID NO:7)的氨基酸序列；j)VWSSGNT(SEQ ID NO:8)的氨基酸序列；k)ITRGAGI(SEQ ID NO:9)的氨基酸序列；l)与SEQ ID NO:6
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9中的至少一个序列具有至少80％氨基酸同一性的氨基酸序列；以及m)与SEQ ID NO:6
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9中的至少一个序列具有3、2、1个氨基酸差异的氨基酸序列；并且CDR3选自：n)NARARLWSVFDY(SEQ ID NO:10)的氨基酸序列；o)NAKTVTRTGGVITGSRIEYDY(SEQ ID NO:11)的氨基酸序列；p)YSKSLIGTSRYEI(SEQ ID NO:12)的氨基酸序列；q)NVKTIKRTGGILTGSKIEYDY(SEQ ID NO:13)的氨基酸序列；r)与SEQ ID NO:10
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13中的至少一个序列具有至少80％氨基酸同一性的氨基酸序列；以及s)与SEQ ID NO:10
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【专利技术属性】
技术研发人员：H，
申请(专利权)人：布鲁塞尔自由大学，
类型：发明
国别省市：