一种包含IgG类Fc区变体的抗体及其用途制造技术

本发明专利技术涉及生物医药领域，尤其涉及一种包含IgG类Fc区变体的抗体及其用途。包含IgG类Fc区变体的抗体为双特异性或多特异性抗体，所述抗体包含第一全长抗体和第二全长抗体，所述第一全长抗体包括第一抗原结合区及修饰的第一变体Fc区多肽，所述第二全长抗体包括第二抗原结合区及修饰的第二变体Fc区多肽。本发明专利技术还涉及编码抗体的多核苷酸及包含其的宿主细胞、制备抗体的方法。本发明专利技术制备的抗体纯度高，且结合人FCγRⅢa的亲和力与hIgG相当，具有较强的ADCC功能，能用于癌症的治疗。能用于癌症的治疗。能用于癌症的治疗。

【技术实现步骤摘要】
一种包含IgG类Fc区变体的抗体及其用途


[0001]本申请涉及生物医药领域，尤其涉及一种包含IgG类Fc区变体的抗体及其用途。

技术介绍

[0002]人存在IgG、IgM、IgD、IgA和IgE五种类型免疫球蛋白。最常见的同种型是IgG，其由两条完全相同的重链多肽和两条完全相同的轻链多肽组成。两条重链之间通过二硫键彼此共价连接，每条轻链通过一个二硫键与一条重链连接。每条重链含有四个明显的结构域，通常称作可变结构域(VH)、重链恒定结构域1(CH1)、重链恒定结构域2(CH2)和重链恒定结构域3(CH3)。CH1和CH2结构域由赋予Ig柔性的铰链区(结构域间部分)连接。重链恒定结构域(主要是CH2和CH3)参与非抗原结合性功能。该区域通常称作Fc区，具有许多重要功能。例如Fc区结合补体，这可启动吞噬作用或补体依赖性细胞毒作用(CDC)。Fc区还结合Fc受体，可启动吞噬作用或抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用(ADCC)。抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用(ADCC)是指细胞毒性形式，其中分泌的IgG结合到某些细胞毒性细胞(例如，自然杀伤(NK)细胞、中性粒细胞和巨噬细胞)上存在的Fc受体(FcR)上，使得这些细胞毒性效应子细胞能够特异性结合到携带抗原的靶细胞，并且随后利用细胞毒素杀死靶细胞。Fc区还具有辅助维持循环中免疫球蛋白的作用以及与常用于纯化免疫球蛋白的A蛋白相互作用。
[0003]近年来人们致力于提高抗体的免疫原性品质和抗原结合特征。例如，已开发了用于免疫治疗的单克隆抗体、双特异性抗体以及单域抗体等等。随着生物药的不断发展，治疗性抗体已经成为癌症、自身免疫、炎症和各种其他疾病患者的主要选择药物。其中，单克隆抗体所针对的都是单一的靶标，很多患者不能充分响应单一的疗法，病人可能产生耐药性或无应答。癌症和其他疾病不同，其是多因素疾病，有多种信号通路参与疾病发生，单一靶点的免疫疗法似乎并不足以摧毁癌细胞，因此，近年来处于研发热度较高的双特异抗体逐渐被认可。
[0004]双特异性抗体(bisspecific antibody,BsAb)由两个物理连接的抗原结合部分组成，可以同时与同一抗原或不同抗原上的不同抗原表位相互作用，发挥的协同效应比单克隆抗体具有更多优势，同时还可介导多种特定生物学效应的发生。比如：
①
桥联免疫细胞与肿瘤细胞，通过招募和激活免疫细胞杀伤肿瘤细胞；
②
抑制或激发多个信号通路，发挥协调效应；
③
借助抗体双价结构，介导蛋白复合物形成，发挥生物学效应等。BsAb在自然条件下并不存在，而是通过细胞融合或重组DNA技术制备实现的。由于其特异性和双功能性，现已成为抗体工程领域的研究热点，在肿瘤治疗及自身免疫病等领域中具有广阔的应用前景。
[0005]急性白血病是一类造血干细胞的恶性克隆性疾病，因白血病细胞自我更新增强、增殖失控、分化障碍、凋亡受阻，而停滞在细胞发育的不同阶段，在骨髓和其他造血组织中，白血病细胞大量增生累积，使正常造血受抑制并浸润其他器官和组织。在成人急性白血病患者当中，急性髓系白血病(AML)是最常见的、死亡率最高的一类白血病。在过去的40年里，尽管人们对于AML的认识更加深入，但是与其他血液肿瘤相比，AML的治疗并没有明显的变化，目前60岁及60岁以下AML患者的治愈率为35％～40％，而60岁以上老年AML患者治愈率
仅5％～15％。地西他滨和阿扎胞苷是一类靶向表观遗传机制的用于AML治疗的小分子药物。除了小分子药物以外，抗体类药物和细胞免疫治疗也是靶向治疗的重要手段。
[0006]CD33是67KD糖基化跨膜蛋白，属于Siglec家族。在交联或者配体结合后激活，介导抑制信号，调节细胞内钙动员、细胞粘附、白血病细胞凋亡、髓系细胞成熟和细胞因子的产生等。在分化过程中，成熟粒细胞上CD33降低，但在巨噬细胞、单核细胞和树突状细胞上保留。CD33在非造血组织中的表达有限，但在AML细胞中高表达。此外，现已证实在白血病祖细胞也表达CD33，使该分子成为一个非常有潜力的AML的治疗靶点。Gentuzumabozogamicin是人IgG4 CD33单克隆抗体(pH 67.6)偶联calicheamicin衍生物，DAR为2
‑
3，包含约50％裸抗。2017年9月被FDA批准用于成人新确诊的CD33阳性急性髓细胞白血病(AML)、成人复发或难治性AML和2岁及儿科患者的AML。IMGN779(ImmunoGen,Inc.,Waltham,Massachusetts)，由CD33单克隆抗体偶联indolinobenzodiazeprinepseudodimers(烷化剂)。进行了一项临床研究(NCT02674763)，研究表明已有50例患者接受IMGN779，没有剂量限制毒性(DLT)。治疗不良事件包括发热性中性粒细胞减少，鼻出血，恶心，腹泻，疲劳，腹痛和低钾血症。总的来说，24例可测量的循环blasts患者中有19例(79％)的blasts计数减少，初步结果安全有效。BI 836858全人IgG1抗CD33抗体，增强与FCγRIIIa的结合，以增强其ADCC活性。Phase1b的初步结果报告了31例接受BI836858治疗的结果，五例患者获得CR/完全反应另有4例达到形态无白血病状态。AMG330(Amgen)是一种CD33/CD3双特异性T细胞接合(BiTE)抗体结构，将细胞毒性T细胞导向到CD33表达的AML细胞，杀死靶细胞。临床前显示有效，目前在1期临床(NCT02520427)。强生的BiTE JNJ
‑
67371244也在1期临床(NCT03915379).161533TriKE(GT Biopharma)(CD16/IL
‑
15/CD33)通过靶向CD33阳性的恶性细胞以及CD33髓系衍生抑制细胞(MDSC)，增强自然杀伤细胞功能，诱导靶向CD33的抗肿瘤反应。目前正在进行1/2期临床研究，NCT03214666，GTB
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3550(CD16/IL
‑
15/CD33)Tri
‑
Specific Killer Engager(TriKE
TM
)for High Risk Heme Malignancies。AML是一种恶性程度高的血液肿瘤，高表达CD33。目前单抗，双抗，三抗，ADC均有企业布局，Mylotarg已经被FDA批准。虽然和所有药物开发类似，困难重重，但是CD33依旧是AML最具潜力的开发靶点。
[0007]CD123是一种包含360个氨基酸的糖蛋白，它也是IL
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3受体(interleukin
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3receptor,IL
‑
3R)α链，与IL
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3Rβ(CD131)一起构成高亲和力的IL
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3R。IL
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3R特异性识别并结合IL
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3后，能促进细胞的生长和增殖，与肿瘤本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
区多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO：46，或10）修饰的第一变体 Fc 区多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO：10，和修饰的第二变体 Fc 区多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO：47，或11）修饰的第一变体 Fc 区多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO：11，和修饰的第二变体 Fc 区多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO：48，或12）修饰的第一变体 Fc 区多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO：12，和修饰的第二变体 Fc 区多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO：49，或13）修饰的第一变体 Fc 区多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO：13，和修饰的第二变体 Fc 区多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO：50，或14）修饰的第一变体 Fc 区多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO：14，和修饰的第二变体 Fc 区多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO：51，或15）修饰的第一变体 Fc 区多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO：15，和修饰的第二变体 Fc 区多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO：52，或16）修饰的第一变体 Fc 区多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO：16，和修饰的第二变体 Fc 区多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO：53，或17）修饰的第一变体 Fc 区多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO：17，和修饰的第二变体 Fc 区多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO：54，或18）修饰的第一变体 Fc 区多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO：18，和修饰的第二变体 Fc 区多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO：55，或19）修饰的第一变体 Fc 区多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO：19，和修饰的第二变体 Fc 区多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO：56，或20）修饰的第一变体 Fc 区多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO：20，和修饰的第二变体 Fc 区多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO：57，或21）修饰的第一变体 Fc 区多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO：21，和修饰的第二变体 Fc 区多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO：58，或22）修饰的第一变体 Fc 区多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO：22，和修饰的第二变体 Fc 区多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO：59，或23）修饰的第一变体 Fc 区多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO：23，和修饰的第二变体 Fc 区多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO：60，或24）修饰的第一变体 Fc 区多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO：24，和修饰的第二变体 Fc 区多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO：61，或25）修饰的第一变体 Fc 区多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO：25，和修饰的第二变体 Fc 区多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO：62，或26）修饰的第一变体 Fc 区多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO：26，和修饰的第二变体 Fc 区多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO：63，或27）修饰的第一变体 Fc 区多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO：27，和修饰的第二变体 Fc 区多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO：64，或28）修饰的第一变体 Fc 区多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO：28，和修饰的第二变体 Fc 区多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO：65，或
29）修饰的第一变体 Fc 区多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO：29，和修饰的第二变体 Fc 区多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO：66，或30）修饰的第一变体 Fc 区多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO：30，和修饰的第二变体 Fc 区多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO：67，或31）修饰的第一变体 Fc 区多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO：31，和修饰的第二变体 Fc 区多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO：68，或32）修饰的第一变体 Fc 区多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO：3...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏志鹏，孟巾果，张妍，谢维，
申请(专利权)人：南京融捷康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：