【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】多特异性抗体及其用途
[0001]要求优先权
[0002]本申请要求于2020年11月16日提交的美国临时申请No.63/114,479以及于2021年8月26日提交的美国临时申请No.63/237,526的权益。前述申请的全部内容以引用方式并入本文。
[0003]本公开涉及多特异性抗体或其抗原结合片段。
技术介绍
[0004]多特异性抗体是能够同时与两种或更多种不同的表位结合的人造蛋白质。这开辟了广泛的应用领域，包括使T细胞重定向至肿瘤细胞、同时阻断两种不同的信号传导通路、双重靶向不同的疾病介质，以及将有效载荷递送至靶向位点。对卡妥索单抗(catumaxomab)(抗EpCAM和抗CD3)和博纳吐单抗(blinatumomab)(抗CD19和抗CD3)的批准已成为多特异性抗体发展的重要里程碑。
[0005]由于多特异性抗体具有各种应用，需要继续开发出基于多特异性抗体的各种疗法。
技术实现思路
[0006]本公开涉及抗体或抗原结合片段，其中抗体或抗原结合片段特异性结合cMET和/或EGFR、或它们的组合。在一些实施方案中，本公开涉及cMET/EGFR靶向性双特异性抗体的开发。在一些实施方案中，本文所述的抗体可治疗非小细胞肺癌(NSCLC)。
[0007]在一个方面，本公开涉及一种结合cMET(酪氨酸蛋白激酶Met)的抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段包含：包含互补决定区(CDR)1、2和3的重链抗体可变结构域(VHH)。
[0008]在一些实施方案中，...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种结合cMET(酪氨酸蛋白激酶Met)的抗体或其抗原结合片段，其包含：包含互补决定区(CDR)1、2和3的重链抗体可变结构域(VHH)，其中所述VHH CDR1区包含与选定的VHH CDR1氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列，所述VHH CDR2区包含与选定的VHH CDR2氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列，并且所述VHH CDR3区包含与选定的VHH CDR3氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列；其中所述选定的VHH CDR 1、2和3氨基酸序列是以下之一：(1)所述选定的VHH CDR 1、2、3氨基酸序列分别在SEQ ID NO:1、2和3中示出；(2)所述选定的VHH CDR 1、2、3氨基酸序列分别在SEQ ID NO:4、5和6中示出；(3)所述选定的VHH CDR 1、2、3氨基酸序列分别在SEQ ID NO:7、8和9中示出；以及(4)所述选定的VHH CDR 1、2、3氨基酸序列分别在SEQ ID NO:10、11和12中示出。2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述VHH包含分别具有SEQ ID NO:1、2和3中所示的氨基酸序列的CDR 1、2、3。3.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述VHH包含分别具有SEQ ID NO:4、5和6中所示的氨基酸序列的CDR 1、2、3。4.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述VHH包含分别具有SEQ ID NO:7、8和9中所示的氨基酸序列的CDR 1、2、3。5.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述VHH包含分别具有SEQ ID NO:10、11和12中所示的氨基酸序列的CDR 1、2、3。6.一种结合cMET的抗体或其抗原结合片段，其包含含有与选定的VHH序列至少80％相同的氨基酸序列的重链抗体可变结构域(VHH)，其中所述选定的VHH序列选自SEQ ID NO:19
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22和77
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84。7.根据权利要求6所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述VHH包含SEQ ID NO:19、77、78、79、80、81、或84的序列。8.根据权利要求6所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述VHH包含SEQ ID NO:20的序列。9.根据权利要求6所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述VHH包含SEQ ID NO:21的序列。10.根据权利要求6所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述VHH包含SEQ ID NO:22、82、或83的序列。11.根据权利要求1
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10中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段特异性结合cMET。12.根据权利要求1
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11中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段是人源化抗体或其抗原结合片段。13.一种抗体或其抗原结合片段，其包含根据权利要求1
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12中任一项所述的抗体或其抗原结合片段的所述VHH CDR 1、2、3。14.根据权利要求1
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13中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含人IgG Fc。15.根据权利要求1
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14中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含两个或更多个重链抗体可变结构域。
16.一种抗体或其抗原结合片段，其与根据权利要求1
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15中任一项所述的抗体或其抗原结合片段交叉竞争。17.一种多特异性抗体或其抗原结合片段，其包含特异性结合EGFR的第一抗原结合位点，以及特异性结合cMET的第二抗原结合位点。18.根据权利要求17所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中所述第一抗原结合位点包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中所述VH和所述VL彼此缔合并且特异性结合EGFR，其中所述重链可变区(VH)包含互补决定区(CDR)1、2和3，其中所述VH CDR1区包含与SEQ ID NO:13至少80％相同的氨基酸序列，所述VH CDR2区包含与SEQ ID NO:14至少80％相同的氨基酸序列，并且所述VH CDR3区包含与SEQ ID NO:15至少80％相同的氨基酸序列；并且所述轻链可变区(VL)包含CDR 1、2和3，其中所述VL CDR1区包含与SEQ ID NO:16至少80％相同的氨基酸序列，所述VL CDR2区包含与SEQ ID NO:17至少80％相同的氨基酸序列，并且所述VL CDR3区包含与SEQ ID NO:18至少80％相同的氨基酸序列。19.根据权利要求18所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区(VH)包含与SEQ ID NO:23至少90％相同的氨基酸序列，并且轻链可变区(VL)包含与SEQ ID NO:24至少90％相同的氨基酸序列。20.根据权利要求17
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19中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中所述第二抗原结合位点特异性结合cMET，并且所述第二抗原结合位点包含含有互补决定区(CDR)1、2和3的第一重链抗体可变结构域(VHH1)，其中所述VHH1 CDR1区包含与选定的VHH1 CDR1氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列，所述VHH1 CDR2区包含与选定的VHH1 CDR2氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列，并且所述VHH1 CDR3区包含与选定的VHH1 CDR3氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列；其中所述选定的VHH1 CDR 1、2和3氨基酸序列是以下之一：(1)所述选定的VHH1 CDR 1、2、3氨基酸序列分别在SEQ ID NO:1、2和3中示出；(2)所述选定的VHH1 CDR 1、2、3氨基酸序列分别在SEQ ID NO:4、5和6中示出；(3)所述选定的VHH1 CDR 1、2、3氨基酸序列分别在SEQ ID NO:7、8和9中示出；以及(4)所述选定的VHH1 CDR1、2、3氨基酸序列分别在SEQ ID NO:10、11和12中示出。21.根据权利要求20所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中所述第一重链抗体可变结构域(VHH1)包含与选定的VHH序列至少80％相同的氨基酸序列，其中所述选定的VHH序列选自SEQ ID NO:19
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22和77
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84。22.根据权利要求17
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21中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其还包含特异性结合cMET的第三抗原结合位点。23.根据权利要求22所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中所述第三抗原结合位点特异性结合cMET，并且所述第三抗原结合位点包含含有互补决定区(CDR)1、2和3的第二重链抗体可变结构域(VHH2)，其中所述VHH2 CDR1区包含与选定的VHH2 CDR1氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列，所述VHH2 CDR2区包含与选定的VHH2 CDR2氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列，并且所述VHH2 CDR3区包含与选定的VHH2CDR3氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列；其中所述选定的VHH2 CDR 1、2和3氨基酸序列是以下之一：
(1)所述选定的VHH2 CDR 1、2、3氨基酸序列分别在SEQ ID NO:1、2和3中示出；(2)所述选定的VHH2 CDR 1、2、3氨基酸序列分别在SEQ ID NO:4、5和6中示出；(3)所述选定的VHH2 CDR 1、2、3氨基酸序列分别在SEQ ID NO:7、8和9中示出；以及(4)所述选定的VHH2 CDR1、2、3氨基酸序列分别在SEQ ID NO:10、11和12中示出。24.根据权利要求23所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中所述第二重链抗体可变结构域(VHH2)包含与选定的VHH2序列至少80％相同的氨基酸序列，其中所述选定的VHH2序列选自SEQ ID NO:19
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22和77
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84。25.根据权利要求17
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24中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中所述VH和所述VL通过接头肽序列连接形成scFv。26.根据权利要求25所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中所述接头肽序列包含与SEQ ID NO:37
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42中任一项至少80％相同的序列。27.一种多肽复合物，其包含(a)第一多肽，所述第一多肽从N末端到C末端包含：第一重链抗体可变结构域(VHH)、第一铰链区、第一Fc区；(b)第二多肽，所述第二多肽从N末端到C末端包含：重链可变区(VH)、第二铰链区，以及第二Fc区；以及(c)第三多肽，所述第三多肽包含轻链可变区(VL)；其中所述第一VHH特异性结合cMET，其中所述VH和所述VL彼此缔合并且特异性结合EGFR。28.根据权利要求27所述的多肽复合物，其中所述第一铰链区和/或所述第二铰链区包含与SEQ ID NO:25
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29中任一项至少80％相同的序列。29.根据权利要求27或28所述的多肽复合物，其中所述第一Fc区和/或所述第二Fc区包含与SEQ ID NO:30或31至少80％相同的序列。30.根据权利要求27
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29中任一项所述的多肽复合物，其中所述第一多肽包含与SEQ ID NO:43或44至少80％相同的序列；其中所述第二多肽包含与SEQ ID NO:45或46至少80％相同的序列；并且/或者其中所述第三多肽包含与SEQ ID NO:47至少80％相同的序列。31.根据权利要求27
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30中任一项所述的多肽复合物，其中所述第一多肽还包含特异性结合cMET的第二VHH，其中所述第二VHH经由接头肽序列连接至所述第一VHH的N末端。32.根据权利要求31所述的多肽复合物，其中所述接头肽序列包含与SEQ ID NO:37
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42中任一项至少80％相同的序列。33.根据权利要求31或32所述的多肽复合物，其中所述第一多肽包含与SEQ ID NO:48或49至少80％相同的序列；其中所述第二多肽包含与SEQ ID NO:50或51至少80％相同的序列；并且/或者其中所述第三多肽包含与SEQ ID NO:52至少80％相同的序列。34.根据权利要求27
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33中任一项所述的多肽复合物，其中所述第一Fc区和/或所述第二Fc区包含根据EU编号在第239位处的天冬氨酸(Asp)，和/或根据EU编号在第332位处的谷氨酸(Glu)。35.一种多肽复合物，其包含(a)第一多肽，所述第一多肽从N末端到C末端包含：第一重链抗体可变结构域(VHH)、第一铰链区、第一Fc区；以及
(b)第二多肽，所述第二多肽从N末端到C末端包含：单链可变片段(scFv)、第二铰链区，以及第二Fc区；其中所述第一VHH特异性结合cMET；其中所述scFv包含重链可变区(VH)、第一接头肽序列，以及轻链可变区(VL)；其中所述VH和所述VL彼此缔合并且特异性结合EGFR。36.根据权利要求35所述的多肽复合物，其中所述第一接头肽序列包含与SEQ ID NO:37
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42中任一项至少80％相同的序列。37.根据权利要求35或36所述的多肽复合物，其中所述第一铰链区和/或所述第二铰链区包含与SEQ ID NO:25
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29中任一项至少80％相同的序列。38.根据权利要求35
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37中任一项所述的多肽复合物，其中所述第一Fc区和/或所述第二Fc区包含与SEQ ID NO:30或31至少80％相同的序列。39.根据权利要求35
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38中任一项所述的多肽复合物，其中所述第一多肽包含与SEQ ID NO:53或54至少80％相同的序列；并且/或者其中所述第二多肽包含与SEQ ID NO:55或56至少80％相同的序列。40.根据权利要求35
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39中任一项所述的多肽复合物，其中所述第一多肽还包含特异性结合cMET的第二VHH，其中所述第二VHH经由第二接头肽序列连接至所述第一VHH的N末端。41.根据权利要求40所述的多肽复合物，其中所述第二接头肽序列包含与SEQ ID NO:37
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42中任一项至少80％相同的序列。42.根据权利要求40或41所述的多肽复合物，其中所述第一多肽包含与SEQ ID NO:57或58至少80％相同的序列；并且/或者其中所述第二多肽包含与SEQ ID NO:59或60至少80％相同的序列。43.根据权利要求35
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42中任一项所述的多肽复合物，其中所述第一Fc区和/或所述第二Fc区包含根据EU编号在第239位处的天冬氨酸(Asp)，和/或根据EU编号在第332位处的谷氨酸(Glu)。44.一种多肽复合物，其包含(a)第一多肽，所述第一多肽从N末端到C末端包含：第一重链抗体可变结构域(VHH1)、第一接头肽序列、第一重链可变区(VH1)、第一铰链区，以及第一Fc区；(b)第二多肽，所述第二多肽包含第一轻链可变区(VL1)；(c)第三多肽，所述第三多肽从N末端到C末端包含：第二重链抗体可变结构域(VHH2)、第二接头肽序列、第二重链可变区(VH2)、第二铰链区，以及第二Fc区；以及(d)第四多肽，所述第四多肽包含第二轻链可变区(VL2)；其中所述VHH1和所述VHH2特异性结合cMET；其中所述VH1和所述VL1彼此缔合并且特异性结合EGFR；其中所述VH2和所述VL2彼此缔合并且特异性结合EGFR。45.根据权利要求44所述的多肽复合物，其中所述第一接头肽序列和/或所述第二接头肽序列包含与SEQ ID NO:37
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42中任一项至少80％相同的序列。46.根据权利要求44或45所述的多肽复合物，其中所述第一铰链区和/或所述第二铰链区包含与SEQ ID NO:25
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29中任一项至少80％相同的序列。47.根据权利要求44
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46中任一项所述的多肽复合物，其中所述VHH1和所述VHH2的序列是相同的。48.根据权利要求47所述的多肽复合物，其中所述第一Fc区和/或所述第二Fc区包含与
SEQ ID NO:32至少80％相同的序列。49.根据权利要求47或48所述的多肽复合物，其中所述第一多肽包含与SEQ ID NO:61或62至少80％相同的序列；其中所述第二多肽包含与SEQ ID NO:63至少80％相同的序列；其中所述第三多肽包含与SEQ ID NO:61或62至少80％相同的序列；并且/或者其中所述第四多肽包含与SEQ ID NO:63至少80％相同的序列。50.根据权利要求44
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46中任一项所述的多肽复合物，其中所述VHH1和所述VHH2的序列是不同的。51.根据权利要求50所述的多肽复合物，其中所述第一Fc区和/或所述第二Fc区包含与SEQ ID NO:30或31至少80％相同的序列。52.根据权利要求50或51所述的多肽复合物，其中(1)所述第一多肽包含与SEQ ID NO:64或65至少80％相同的序列；其中所述第二多肽包含与SEQ ID NO:68至少80％相同的序列；其中所述第三多肽包含与SEQ ID NO:66或67至少80％相同的序列；并且/或者其中所述第四多肽包含与SEQ ID NO:68至少80％相同的序列；或者(2)所述第一多肽包含与SEQ ID NO:85至少80％相同的序列；其中所述第二多肽包含与SEQ ID NO:68至少80％相同的序列；其中所述第三多肽包含与SEQ ID NO:86至少80％相同的序列；并且/或者其中所述第四多肽包含与SEQ ID NO:68至少80％相同的序列。53.根据权利要...
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