一种抗人PLA2R的抗体及其抗原结合片段及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种抗人PLA2R的抗体及其抗原结合片段及其应用，涉及生物工程技术领域。该抗体及其抗原结合片段与PLA2R具有较高的亲和力，可以特异性结合PLA2R蛋白，且能靶向PLA2R的包含CysR、FnII、CTLD1这三个结构域的片段。因此，可应用于免疫组织化学(IHC)、间接ELISA、免疫印记(Western blotting)、抗体芯片制备、流式细胞术等检测与筛查领域；也可用于开发膜性肾病检测、诊断、预后、疗效评估或复发监测产品。监测产品。监测产品。

【技术实现步骤摘要】
一种抗人PLA2R的抗体及其抗原结合片段及其应用


[0001]本专利技术涉及抗体
，具体而言，涉及一种抗人PLA2R的抗体及其抗原结合片段及其应用。

技术介绍

[0002]膜性肾病（membranous nephropathy, MN）即膜性肾小球肾炎，具体是指免疫复合物在肾小球毛细血管中过度沉积导致的肾病综合征，是成人肾病综合征中最常见的病理类型之一。临床上MN主要表现为大量蛋白尿、低蛋白血症、水肿及高脂血症。
[0003]根据病因的不同，MN可分为特发性膜性肾病(idiopathic membranous nephropathy, IMN)与继发性膜性肾病(secondary membranous nephropathy, SMN)。其中，IMN是MN的主要类型，占比约70%～80%，其病因尚不明确，又名原发性膜性肾病（primary membranous nephropathy, PMN）。大多数学者认为PMN是一种抗体介导的自身免疫性肾小球疾病，位于足细胞的靶抗原被自身抗体识别，并与之结合形成免疫复合物沉积于基底膜足细胞下，激活补体系统引起足细胞损伤脱落，导致基底膜通透性增加，进而出现大量蛋白尿。
[0004]2009年Beck等首次报道磷脂酶A2受体(phospholipase A2 receptor, PLA2R)是导致PMN发生的主要抗原之一，在70%的PMN患者血液和肾组织洗脱液中可检测出抗磷脂酶A2受体抗体(phospholipase
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A2 receptor antibody, PLA2R
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Ab)，这引起了医学界对PLA2R的广泛关注。PLA2R
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Ab能够特异性地与肾脏组织中足细胞上的靶抗原(即PLA2R)结合，可在70%～80%的PMN患者血清中表达(Bobart SA, De Vriese AS, Pawar AS, et al. Kidney Int. 2019; 95(2): 429
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438)，而在健康人群、SMN及其他肾小球疾病患者的血清中PLA2R
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Ab抗体阳性表达率极低，故PLA2R
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Ab诊断MN的特异性较高。最新的一项Meta分析显示(练明建, 卢榕, 张加勤, 等. 临床检验杂志, 2017, 35 (7)：545
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549)，血清PLA2R
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Ab检测对诊断PMN的总敏感度为69%，总特异度为97%，进一步说明血清PLA2R
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Ab对PMN有较好的敏感性和很高的特异性，可以作为诊断PMN的特异性生物标志物。
[0005]PLA2R由多个结构域构成（图1），研究显示导致PLA2R
‑
Ab产生的结构域主要包括CysR, FnII, CTLD1这三个结构域（Liyo Kao, Vinson Lam, et al. J Am Soc Nephrol. 2015 Feb; 26(2): 291
‑
301）。因此，靶向这三个结构域的单克隆抗体对于PLA2R型膜性肾病的细胞及动物模型建立、机制研究、诊断以及药物开发具有重要意义。然而，目前没有商品化小鼠单克隆抗体可靶向这三个结构域。
[0006]鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的在于提供一种抗人PLA2R的抗体及其抗原结合片段以解决上述技术问题。本专利技术提供的抗人PLA2R单克隆抗体可靶向PLA2R 的包含CysR、FnII、CTLD1这三个结构域的片段，可应用于免疫组织化学(IHC)、间接ELISA、免疫印记(Western blotting)、抗
体芯片制备、流式细胞术等检测与筛查领域。本专利技术还提供了编码抗人PLA2R抗体及其抗原结合片段的核酸分子、重组载体及该抗体在PLA2R蛋白检测方法或产品中的应用。
[0008]本专利技术是这样实现的：第一方面，本专利技术提供了一种抗人PLA2R的抗体及其抗原结合片段，其包括重链互补决定区和轻链互补决定区；重链互补决定区包括氨基酸序列分别为SEQ ID NO.3
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5所示的CDR
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H1、CDR
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H2和CDR
‑
H3；轻链互补决定区包括氨基酸序列为SEQ ID NO.6所示的CDR
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L1、氨基酸序列为WAS的CDR
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L2和氨基酸序列为SEQ ID NO.7所示的CDR
‑
L3。
[0009]CDR
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H1的氨基酸序列SEQ ID NO.3为GYSFTGYY；CDR
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H2的氨基酸序列SEQ ID NO.4为FNPYNGAT；CDR
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H3的氨基酸序列SEQ ID NO.5为AKEGPYYGNYGYFDY；CDR
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L1的氨基酸序列SEQ ID NO.6为QSLLNSRTRKNY；CDR
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L2的氨基酸序列为WAS；CDR
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L3的氨基酸序列SEQ ID NO.7为KQSYNLYT。
[0010]经过筛选，发现具有特定重链互补决定区和轻链互补决定区的抗体及其抗原结合片段与PLA2R具有较高的亲和力，可以特异性结合PLA2R蛋白，且能靶向PLA2R 的包含CysR、FnII、CTLD1这三个结构域的片段。因此，可应用于免疫组织化学(IHC)、间接ELISA、免疫印记(Western blotting)、抗体芯片制备、流式细胞术等检测与筛查领域；也可用于开发膜性肾病检测、诊断、预后、疗效评估或复发监测产品。
[0011]本专利技术中，“PLA2R”，“磷脂酶A2受体”均为指代相同的含义。
[0012]在本专利技术应用较佳的实施方式中，抗体及其抗原结合片段还包括重链骨架区和/或轻链骨架区，重链骨架区包括依次如SEQ ID NO.17
‑
20所示的FR
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VH1、FR
‑
VH2、FR
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VH3和FR
‑
VH4；和/或；轻链骨架区包括依次如SEQ ID NO.21
‑
24所示的FR
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VL1、FR
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VL2、FR
‑
VL3和FR
‑
VL4。
[0013]其重链可变区+重链骨架区的结构为：FR
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VH1
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CDR1
‑
FR
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VH2
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CDR2
‑
FR
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VH3
‑
CDR3
‑
FR
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VH4。
[0014]其轻链可变区+轻链骨架区的结构为：FR
‑
VL1
‑
CDR1
‑
FR...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗人PLA2R的抗体及其抗原结合片段，其特征在于，其包括重链互补决定区和轻链互补决定区；所述重链互补决定区包括氨基酸序列分别为SEQ ID NO.3
‑
5所示的CDR
‑
H1、CDR
‑
H2和CDR
‑
H3；所述轻链互补决定区包括氨基酸序列为SEQ ID NO.6所示的CDR
‑
L1、氨基酸序列为WAS的CDR
‑
L2和氨基酸序列为SEQ ID NO.7所示的CDR
‑
L3。2.根据权利要求1所述的抗人PLA2R的抗体及其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体及其抗原结合片段还包括重链骨架区和/或轻链骨架区，所述重链骨架区包括依次如SEQ ID NO.17
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20所示的FR
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VH1、FR
‑
VH2、FR
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VH3和FR
‑
VH4；和/或；所述轻链骨架区包括依次如SEQ ID NO.21
‑
24所示的FR
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VL1、FR
‑
VL2、FR
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VL3和FR
‑
VL4。3.根据权利要求2所述的抗人PLA2R的抗体及其抗原结合片段，其特征在于，所述抗原结合片段选自所述抗体的Fab
’
、Fab、F(ab
’
)2、scFv和Fv中的任意一种。4.根据权利要求2所述的抗人PLA2R的抗体及其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段还包括恒定区，所述恒定区包括轻链恒定区和重链恒定区，所述轻链恒定区的类型为κ型或λ型轻链恒定区；所述重链恒定区的类型...

【专利技术属性】
技术研发人员：李贵森，周洲，吴姝焜，李怡，熊琳，
申请(专利权)人：四川省医学科学院，
类型：发明
国别省市：