Wnt信号传递激动剂分子制造技术

本申请涉及新型治疗剂，特别是涉及能够激活(GPR)124/RECK/Frizzled/脂蛋白受体相关蛋白(LRP)介导的Wnt信号传递的试剂，其中所述试剂在不存在RECK和/或GPR124的情况下不激活Frizzled/LRP介导的Wnt信号传递。本发明专利技术的试剂对于预防或治疗神经血管疾病或包括神经血管功能障碍的中枢神经系统(CNS)疾病特别有用。用。

【技术实现步骤摘要】
Wnt信号传递激动剂分子
[0001]本案为申请人为布鲁塞尔自由大学、申请日为2019年3月22日、申请号为201980021129.1的分案申请。


[0002]本专利技术广泛地涉及医学领域，并且更确切地涉及神经血管疾病或包括神经血管功能障碍的中枢神经系统(CNS)疾病的治疗。本专利技术提供了可用于神经血管疾病或包括神经血管功能障碍的CNS疾病的疗法(therapy)，特别是可用于神经血管疾病或包括神经血管功能障碍的CNS疾病的治疗(treatment)的新型Wnt信号传递(Wnt signaling)激动剂分子，以及相关的产品，方法和用途。

技术介绍

[0003]Wnt蛋白构成了一个大的高度保守的分泌型脂质修饰的蛋白质家族，其在动物发育和成体组织内环境稳定中介导细胞间通讯。它们通过调节细胞增殖、分化、迁移、凋亡、极性和遗传稳定性来发挥多效功能。失调的Wnt信号传递水平与大范围的人类病理相关，包括癌症和中枢神经系统疾病如神经变性。
[0004]卷曲蛋白(Frizzled)(Fz)家族的十个成员是七次跨膜蛋白，充当Wnt蛋白的受体。Wnt/Fz结合关系是混杂的，其中多个Wnt竞争与单个Fz的结合，而多个Fz能够响应给定的Wnt，这极大地造成了Wnt信号传递的复杂性。最近的晶体学研究证实，Wnt/Fz相互作用化学与明确的Wnt和Fz配对不相容，Wnt和Fz之间的两个接触位点均由严格或化学上保守的残基控制(dominated)(Janda等，Science 2012，第337卷，第59
‑
64页)。这些观察提出了一个问题，即细胞如何解释来自多个Wnt配体的同时以及有时冲突的信号传递输入的混合表达模式。在一些生物学环境中，细胞可以无差别地整合所有信号输入并通过考虑它们总的净平衡以及功能上相互关联的细胞内信号传递级联的协调解译，触发适当的响应。然而，尽管Wnt/Fz表达环境(landscapes)复杂，其他生物学过程仍显示出令人惊讶的严格Wnt配体选择性。
[0005]哺乳动物前脑和腹侧脊髓的脑血管发育在Wnt7a和Wnt7b的排他(exclusive)控制下运行，因此充当高度选择性Wnt响应过程的范例。为了响应神经祖细胞衍生的Wnt7并激活Wnt/β
‑
联蛋白(β
‑
catenin)信号传递，脑内皮细胞必须表达Gpr124，Gpr124是G蛋白偶联受体和GPI锚定糖蛋白Reck的粘附类别的孤儿成员(Vanhollebeke等人，Elife，2015年，第4卷，第1
‑
25页)。此外，当在培养的细胞中表达时，Gpr124和Reck物理上相互作用并协同刺激Wnt7特异性应答(同上)。
[0006]重要的是，内皮Wnt/β
‑
联蛋白信号传递是血脑屏障(BBB)生理的重要调节，控制胚胎发生过程中CNS血管网络的扩张和成熟，并有助于成体BBB的维持。尽管BBB功能障碍长期以来与多种神经系统疾病有关，但最近的证据表明，在功能障碍的BBB处的Wnt/β
‑
联蛋白信号传递的纯粹刺激足以显著改善小鼠的缺血性中风和脑癌。因此，能够刺激脑内皮细胞中的Wnt/β
‑
联蛋白信号传递且基本上不与其他Frizzled途径交叉反应的疗法对于各种神经
系统疾病的治疗将是非常有利的。
[0007]专利技术概述
[0008]本专利技术至少部分地基于细胞用于选择性响应Wnt7配体的第一个“Wnt解码模块(Wnt decoding module)”的发现和表征。特别地，在本文中表征的Wnt解码模块中，通过RECK赋予选择性，RECK以独立于Frizzled的方式介导Wnt7特异性结合。Frizzled信号传递对Wnt7的可获得性取决于GPR124，所述GPR124是一种RECK结合配偶体，其充当RECK结合的Wnt7和细胞内Disheveled(Dvl)支架之间的信号传递缺陷的跨膜连接物(tether)。通过桥接Frizzled和GPR124，Dvl聚合物组装了配体特异性RECK/Gpr124/Frizzled/LRP信号体(signalosome)。因此，本专利技术人提出了这样的模型，其中通过使Dvl聚合物同时结合Frizzled和GPR124以及Wnt7与RECK的特异性结合，在配体特异性Wnt信号体内形成更高阶的RECK/GPR124/Frizzled/LRP受体复合物。
[0009]在发现了这种新机制后，进一步的研究出乎意料地揭示，可以设计能够在表达RECK和GPR124的细胞中选择性激活Wnt信号传递的新型激动剂，这样的激动剂可用作治疗剂，例如特别用于治疗具有神经血管并发症(neurovascular implications)的CNS疾病，尤其包括中风、多发性硬化症、脑癌、癫痫和神经退行性疾病。
[0010]因此，一方面提供了能够激活GPR124/RECK/Frizzled/LRP介导的Wnt信号传递的试剂，其中所述试剂在不存在RECK和/或GPR124的情况下不激活Frizzled/LRP介导的Wnt信号传递。
[0011]在某些实施方式中，所述试剂可以是蛋白质、多肽或肽。因此，另一方面提供了编码所述试剂的核酸，其中所述试剂是蛋白质、多肽或肽。
[0012]进一步的方面提供了核酸表达盒，其包含与启动子和/或转录和翻译调控信号可操作地连接的所述核酸。还提供了包含所述核酸或核酸表达盒的载体(vector)。
[0013]另一方面提供了药物组合物，其包含所述试剂、所述核酸或核酸表达盒或所述载体以及药学上可接受的载体(carrier)。
[0014]进一步的方面提供了用作药物的所述试剂、所述核酸或核酸表达盒、所述载体或所述药物组合物。
[0015]还提供了用于预防或治疗神经血管疾病或包括神经血管功能障碍的中枢神经系统(CNS)疾病的所述试剂、所述核酸或核酸表达盒、所述载体或所述药物组合物。
[0016]另一个方面提供了用于鉴定可用作治疗剂的试剂的体外方法，所述治疗剂例如特别用于预防或治疗神经血管疾病或包括神经血管功能障碍的CNS疾病，所述方法包括确定测试试剂是否激活GPR124/RECK/Frizzled/LRP介导的Wnt信号传递而在不存在RECK和/或GPR124的情况下不激活Frizzled/LRP介导的Wnt信号传递。
[0017]在以下各节和所附权利要求中描述了本专利技术的这些和其他方面以及优选实施方式。所附权利要求的主题在此具体地并入本说明书中。
附图说明
[0018]图1说明了(A)在未透化的WT、FZ1‑
10
‑
/
‑
,LRP5
‑
/
‑
；LRP6
‑
/
‑
和GPR124
‑
/
‑
；RECK
‑
/
‑
细胞中瞬时表达的Wnt7a
‑...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种包含治疗有效剂量的多肽或编码所述多肽的核酸的药物组合物，其中所述多肽包含Wnt7a或Wnt7b多肽的N端结构域(NTD)，
‑
所述NTD与如SEQ ID No.24或SEQ ID No.25所示的氨基酸序列具有至少80％的序列同一性，或者
‑
其中所述多肽是Wnt7a或Wnt7b多肽的NTD片段，所述片段包括如SEQ ID No.24或SEQ ID No.25所示的氨基酸序列的至少225个连续氨基酸。2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述多肽具有如SEQ ID No.24或SEQ ID No.25所示的氨基酸序列。3.根据权利要求1或2所述的药物组合物，其中所述多肽的N端之前具有如SEQ ID No.26或SEQ ID No.27所示的氨基酸序列的信号...

【专利技术属性】
技术研发人员：B，
申请(专利权)人：布鲁塞尔自由大学，
类型：发明
国别省市：