一种多重PCR检测方法和试剂盒技术

本发明专利技术提供了一种多重PCR检测方法和试剂盒，属于多重基因检测技术领域。在本发明专利技术中，正向引物靠近3

【技术实现步骤摘要】
一种多重PCR检测方法和试剂盒


[0001]本专利技术涉及多重基因检测
，尤其涉及一种多重PCR检测方法和试剂盒。

技术介绍

[0002]多重荧光定量PCR(Multiple fluorescence quantitative PCR)技术是在荧光定量PCR技术的基础上，利用几种不同荧光基团的组合，结合仪器对不同通道荧光的检测能力实现对多个靶标的实时定量检测。TaqMan水解探针（Hydrolysisprobes）是多重荧光PCR体系中常用的一种探针，探针一端标记荧光基团，另一端标记淬灭基团，通过在不同序列末端标记不同荧光基团及相应的淬灭基团，即可形成不同的TaqMan水解探针，将上述探针及相应的扩增引物加至同一反应体系，即可实现对多个靶标的共同检测。目前的多色荧光检测技术为满足多靶标检测的需求，往往需要几组到十几组引物探针，但是探针引物本身易形成二聚体和非特异性扩增，其特异性和灵敏度难以保证。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的在于提供一种简单易行、特异性好、灵敏度高、无需探针的多重PCR检测方法。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种多重PCR检测方法，其特征在于，包括如下步骤：S1.根据待检测的靶标基因序列，分别设计特异性引物，正向引物靠近3
’
端碱基上连接荧光基团，反向引物靠近3
’
端碱基上连接淬灭基团，使扩增获得的对应靶标序列上荧光基团与淬灭基团距离不超过5个碱基；同一荧光通道内，每种靶标基因的Tm差值≥1℃；S2.进行PCR扩增，PCR扩增结束后，在30℃~80℃进行熔解曲线分析；S3.根据荧光通道、熔解峰及靶标序列Tm值判断待测样本中含有的靶标基因序列。2.根据权利要求1所述的多重PCR检测方法，其特征在于，所述特异性引物的Tm值为40℃~65℃。3.根据权利要求1所述的多重PCR检测方法，其特征在于，所述荧光基团选自FAM、HEX、Cy5或ROX基团，所述淬灭基团选自BHQ1或BHQ2基团。4.根据权利要求1所述的多重PCR检测方法，其特征在于，所述待检测的靶标基因序列的种类≥2。5.根据权利要求1所述的多重PCR检测方法，所述荧光基团的连接位点位于正向引物3
’
端第2~5个碱基，所述淬灭基团的连接位点位于反向引物3
’
端第2~5个碱基。6.一种采用多重PCR检测方法检测多个靶标序列的试剂盒，其特征在于，包括以下试剂：a.与待测靶标序列对应的引物组；每组引物包括正向引物和反向引物，所述正向引物连接荧光基团，所述反向引物连接淬灭基团；使扩增获得的对应靶标序列上荧光基团与淬灭基团距离不超过5个碱基；b.DNTP；c.逆转...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈杰，丁少祥，孟寒寒，任凯凯，
申请(专利权)人：果然基因科技山东股份有限公司，
类型：发明
国别省市：