一种TrkA的抗原表位肽及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种TrkA的抗原表位肽及其应用，该抗原表位肽包含SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列。本发明专利技术通过氢氘交换质谱测定得到TrkA抗原的优势抗原表位，与其特异性结合的抗TrkA抗体能够阻断TrkA受体与其配体NGF的结合，抑制或减弱TrkA所参与的NGF/TrKA信号传递，从而有效缓解疼痛和痛觉过敏。有效缓解疼痛和痛觉过敏。有效缓解疼痛和痛觉过敏。

【技术实现步骤摘要】
一种TrkA的抗原表位肽及其应用


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及一种TrkA的抗原表位肽及其应用。

技术介绍

[0002]当前临床上使用的用于慢性疼痛治疗的药物主要包括非甾体类抗炎药、抗惊厥药、阿片类药物等，然而这些药物有很多的不足，其中，非甾体抗炎药的疗效有限，并且具有包括消化道出血和肾脏毒性等副作用；而阿片类药物具有成瘾等副作用。NGF/TrkA作为开发新型镇痛药物的有效靶点，为解决以上难题提供了一种可能。
[0003]原肌球蛋白受体激酶A(Tropomyosin Receptor Kinase，TrkA,也称为high affinity nerve growth factor receptor，neurotrophic tyrosine kinase receptor type 1，或TRK1 transforming tyrosine kinase protein)属于原肌球蛋白受体激酶(Trk)家族一员。Trk受体是跨膜受体，由含配体结合区的胞外区、跨膜区、含酪氨酸激酶区的胞内区组成。TrkA主要在神经嵴神经元、交感神经神经元以及基底前脑和纹状体的胆碱能神经元中表达，在包括B淋巴细胞在内的一些非神经元组织和细胞中也有表达。
[0004]神经生长因子(Nerve Growth Factor，NGF)参与疼痛的病理生理过程，主要通过结合TrkA受体激活NGF/TrKA信号通路，影响炎症介质的释放、离子通道的开放以及促进神经纤维的生长，从而参与疼痛的发生，传导以及增敏过程。研究表明，阻断NGF
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TrkA信号通路可以有效的缓解疼痛和痛觉过敏，NGF
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TrkA信号通路是开发新型镇痛药物的有效靶点。
[0005]对于NGF
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TrkA靶点镇痛药物的开发，筛选能够阻断NGF和TrKA的结合的抗TrKA单克隆抗体是有效手段之一。通常情况下，可通过全长的TrKA受体或TrKA受体的胞外区免疫动物筛选抗TrKA单克隆抗体，但是筛选得到的抗TrKA单克隆抗体大多都不能够阻断NGF和TrKA结合。TrKA的优势抗原表位的发现能够指导设计合适的免疫原制备能特异性阻断TrKA受体与其配体NGF结合的抗TrKA单克隆抗体，提高阻断活性TrKA单克隆抗体药物发现的效率和成功率。然而，目前仍鲜见相关报道。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供一种TrkA的抗原表位肽及其应用，特异性结合该抗原表位的抗体可以有效阻断TrkA受体与其配体NGF的结合，抑制或减弱TrkA所参与的NGF/TrKA信号传递，从而有效缓解疼痛和痛觉过敏。
[0007]为此，第一方面，本专利技术提供一种TrkA的抗原表位肽，其包含SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列。
[0008]在一些实施方案中，所述TrkA的抗原表位肽的氨基酸序列为SEQ ID NO：4。
[0009]在一些实施方式中，所述TrkA的抗原表位肽为以SEQ ID NO：4为核心区域，且基于TrkA胞外区的氨基酸序列向SEQ ID NO：4的氨基端、羧基端或氨基端和羧基端两端延伸的多肽。
[0010]其中，所述TrkA胞外区的氨基酸序列为SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、或SEQ ID NO：
3。
[0011]在一些实施方式中，所述TrkA的抗原表位肽为以SEQ NO：4为核心区，且基于SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、或SEQ ID NO：3向SEQ ID NO：4的氨基端、羧基端或氨基端和羧基端两端延伸的多肽。
[0012]进一步，所述向SEQ ID NO：4的氨基端、羧基端或氨基端和羧基端两端延伸的氨基酸的数量各自独立地选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15。
[0013]在一些实施方式中，所述TrkA的抗原表位肽为以SEQ NO：4为核心区，且基于SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、或SEQ ID NO：3向SEQ ID NO：4的氨基端延伸m个氨基酸的多肽，所述m选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15。
[0014]在一些实施方式中，所述TrkA的抗原表位肽为以SEQ NO：4为核心区，且基于SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、或SEQ ID NO：3向SEQ ID NO：4的羧基端延伸n个氨基酸的多肽，所述n选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15。
[0015]在一些实施方式中，所述TrkA的抗原表位肽为以SEQ NO：4为核心区，且基于SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、或SEQ ID NO：3向SEQ ID NO：4的氨基酸延伸p个氨基酸且向羧基端延q个氨基酸的多肽，所述q和q各自独立地选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15。
[0016]在一些实施方式中，所述TrkA的抗原表位肽的氨基酸序列为SEQ ID NO：5
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18任一项所示。
[0017]本专利技术的第二方面，提供一种融合蛋白，所述融合蛋白由本专利技术所述的抗原表位肽与载体蛋白融合所形成。
[0018]进一步，所述载体蛋白选自钥孔血蓝蛋白(KLH)、牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)、甲状腺球蛋白、人血清白蛋白中的一种。
[0019]本专利技术的第三方面，提供一种核酸分子，其编码本专利技术所述的抗原表位肽或本专利技术所述的融合蛋白。
[0020]本专利技术的第四方面，提供一种载体，其包含本专利技术所述的核酸分子。
[0021]本专利技术的第五方面，提供一种宿主细胞，其表达本专利技术所述的抗原表位肽，和/或表达本专利技术所述的融合蛋白，和/或含有本专利技术所述的核酸分子，和/或含有本专利技术所述的载体。
[0022]本专利技术的第六方面，提供本专利技术所述的抗原表位肽、和/或本专利技术所述的融合蛋白、和/或本专利技术所述的核酸分子、和/或本专利技术所述的载体、和/或本专利技术所述的宿主细胞在以下(a)、(b)、(c)、(d)或(e)方面的用途：
[0023](a)用于制备抗TrkA抗体；
[0024](b)用于制备针对TrkA的核酸适配体、疫苗、纳米粒子；
[0025](c)用于制备预防和/或治疗与TrkA相关的疾病的药物；
[0026](d)用于制备抑制或减弱TrkA所参与的信号传递的药物；
[0027](e)用于制备镇痛药物。
[0028]本专利技术的第七方面，提供一种抗体，其识别并结合本专利技术所述的抗原表位肽。
[0029]进一步，所述抗体能够抑制或减弱TrkA所参与的信号传递。
[0030]进一步，所述抗体为单克隆抗体或多克隆抗体，种属来源可以为人、鼠、兔、猴、牛、羊或羊驼等哺乳动物。
[0031]本专利技术的第八方面，提供一种抗TrkA抗体的制备方法，其包括：(1)用本专利技术所述的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种TrkA的抗原表位肽，其特征在于，其包含SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列。2.如权利要求1所述的抗原表位肽，其特征在于，所述TrkA的抗原表位肽的氨基酸序列为：SEQ ID NO：4；或者以SEQ ID NO：4为核心区域，且基于TrkA胞外区的氨基酸序列向SEQ ID NO：4的氨基端、羧基端或氨基端和羧基端两端延伸的多肽；优选地，所述TrkA胞外区的氨基酸序列为SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、或SEQ ID NO：3。3.如权利要求2所述的抗原表位肽，其特征在于，所述向SEQ ID NO：4的氨基端、羧基端或氨基端和羧基端两端延伸的氨基酸的数量各自独立地选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15。4.如权利要求2或3所述的抗原表位肽，其特征在于，所述TrkA的抗原表位肽的氨基酸序列为SEQ ID NO：5
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18任一项所示。5.一种融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白由权利要求1
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4任一项所述的抗原表位肽与载体蛋白融合所形成。6.如权利要求5所述的融合蛋白，其特征在于，所述载体蛋白选自钥孔血蓝蛋白、牛血清白蛋白、卵清蛋白、甲状腺球蛋白、人血清白蛋白中的一种。7.一种核酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：任志衡，董军纪，危喜玲，李想，林树珊，贾兴繁，张阔，李利佳，许玉丽，陈立模，李文佳，
申请(专利权)人：广东东阳光药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：