一种同时检测血液中6种药物浓度的方法技术

本发明专利技术公开了一种同时检测血液中6种药物浓度的方法，包括以下步骤：S1、取血液样品，离心，加入甲醇沉淀蛋白；S2、配制系列浓度的校准品溶液、质控样品和内标工作液；S3、向S1制备的上清液1中加入内标工作液，涡旋混合，离心，取上清液2；S4、采用高效液相色谱

【技术实现步骤摘要】
一种同时检测血液中6种药物浓度的方法


[0001]本专利技术属于药物检测
，具体涉及一种同时检测血液中6种药物浓度的方法。

技术介绍

[0002]抑郁症是一种疾病，是一种以持久的抑郁心境为主要临床症状的一种精神障碍，临床表现以情绪低落、焦虑、迟滞和繁多的躯体不适症状为主，对愉快事物的兴趣丢失，有罪恶感或无价值感，甚至严重时产生自杀观念和行为。SSRIs在世界各国均被作为抗抑郁药的首选，其中氟西汀、帕罗西汀、舍曲林、氟伏沙明、西酞普兰、艾司西酞普兰被称为SSRIs六朵金花。SSRIs的作用机制：SSRIs选择性地抑制5
‑
HT回收，间接提升突触间隙5
‑
HT的浓度。对5
‑
HT有高度选择性、对NE、DA、组胺及胆碱能神经影响较小，口服吸收良好，生物利用度较高，耐受性好，依从性佳，适用于各种类型抑郁症。SSRIs的常见副作用，如消化道反应(恶心、呕吐、腹泻等)、中枢神经副作用(焦虑、失眠、头晕等)、性功能障碍、5
‑
HT综合征等。SSRIs类抗抑郁药是目前临床上认为相对安全的药物，但实际临床上发现，SSRIs对某些患者有效，而对其他患者无效，医生常需不断换药方能找到有效药物。如果能提前预测特定药物是否对某个患者有效，将对患者非常有益。血液检测可预测抑郁症患者对抗抑郁药疗效。血药浓度检测能够在患者服药一段时间后准确检测该药物的血药浓度，甚至可以实现针对药物在体内不同代谢成分进行分析，获得定量的检测结果，为治疗窗十分窄的药物(如抗抑郁药物)，进行剂量地调整提供充分的依据。因此，开发出有助于医生进行个体化治疗的血液检测方法具有重要意义。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的是提供一种同时检测血液中6种药物浓度的方法，这6种药物为氟西汀、帕罗西汀、舍曲林、氟伏沙明、西酞普兰、艾司西酞普兰，从不同角度指导临床合理使用抗抑郁药；该检测方法具有样本前处理简单方便、所需样本体积少、灵敏度高、准确度高及通量高的特点。
[0004]为此，本专利技术采用如下技术方案：
[0005]一种同时检测血液中6种药物浓度的方法，包括以下步骤：
[0006]S1、取血液样品，离心，加入甲醇沉淀蛋白，涡旋混合，再次离心，取上清液1；
[0007]S2、配制系列浓度的校准品溶液、质控样品和内标工作液；
[0008]S3、向S1制备的上清液1中加入内标工作液，涡旋混合，离心，取上清液2；
[0009]S4、采用高效液相色谱
‑
串联质谱法对步骤S3得到的上清液2针对所选药物进行检测，以化合物保留时间、两对或三对母离子/子离子进行质谱筛查分析；
[0010]所述药物包括氟西汀、帕罗西汀、舍曲林、氟伏沙明、西酞普兰和艾司西酞普兰中的一种、多种或全部；
[0011]所述液相色谱的分析柱为：Eclipse Plus C18 RRHD 2.1
×
50mm，1.8um；
[0012]所述流动相为；流动相A：0.01％
‑
1％甲酸的水溶液；流动相B：甲醇；
[0013]流速：0.2
‑
1.0ml/min；柱温：25
‑
50℃；进样量：1μl。
[0014]优选地，所述液相色谱的洗脱梯度：流动相A+流动相B＝100％；0～0.5min，流动相A体积保持95％；0.5～1.0min，流动相A体积由95％递减至85％；1.0～3.0min，流动相A体积由85％递减至65％；3.0～5.0min，流动相A体积由65％递减至10％；5.0～7.0min，流动相A体积保持5％；7.0～7.5min，流动相A体积由5％升高至95％；7.5～10min，流动相A体积保持95％；流速：0.2
‑
1.0mL/min；柱温：30℃。
[0015]优选地，所述质谱条件如下：离子源温度：440℃；离子源雾化气：35psi；离子源加热辅助气：35psi；气帘气：20psi；喷雾毛细管电压：4000V；碰撞气：9。
[0016]优选地，所述步骤S1中所述离心条件为：第一次离心为3000
‑
8000rmp离心3
‑
20min，第二次离心为6000
‑
12000rmp离心5
‑
15min。
[0017]优选地，所述内标物包括氟西汀
‑
d6、舍曲林
‑
d4、氟伏沙明
‑
d4、艾司西酞普兰
‑
d4、帕罗西汀
‑
d4、西酞普兰
‑
d4。
[0018]优选地，所述S1中加入甲醇的量为血液样品的5
‑
8倍。
[0019]进一步优选地，所述色谱柱的流速为0.3
‑
0.7mL/min；
[0020]更优选为0.3mL/min。
[0021]优选地，所述校准品溶液是用甲醇配制的系列不同浓度的标准溶液。
[0022]优选地，所述流动相A为含0.1％
‑
0.5％甲酸的水溶液。
[0023]优选地，步骤S3中离心转速为1500
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5000rmp，离心3
‑
10min。
[0024]与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：
[0025]结合临床检测需求，本专利技术通过高效液相色谱串联质谱法对6种药物进行检测，对保留时间，两对母/子离子对等参数确证后，对精神类药物SSRIs在血液中的浓度分析，满足实际检测的时效性要求。同时采用稳定性同位素内标用于校正，可有效避免基质效应。检测准确率高、残留率低。
具体实施方式
[0026]下面结合具体实施方式，对本专利技术的权利要求做进一步的详细说明，但不构成对本专利技术的任何限制，任何人在本专利技术权利要求保护范围内所做的有限次的修改，仍在本专利技术的权利要求保护范围之内。
[0027]实施例1
[0028]本实施例提供了一种标准工作液的制备方法。
[0029](1)配制6种药物标准品储备液
[0030]天平精密称量氟西汀准品于2mL冻存管中，加入2mL甲醇:水＝7:3溶液进行溶解，再加入40μL甲酸，纯度为99.5％，混匀得到浓度为1221.31μg/mL的储备液；
[0031]天平精密称量帕罗西汀标准品于2mL冻存管中，加入0.5mL甲醇溶解，再加入1mL甲醇:水＝1:1溶液，纯度为100.0％，混匀得到浓度为2500.00μg/mL的储备液；
[0032]天平精密称量舍曲林标准品于2mL冻存管中，加入2mL甲醇:水＝7:3溶液进行溶解，再加入40μL甲酸，纯度为92.0％，混匀得到浓度为1627.68μg/mL的储备液；
[0033]天平精密称量氟伏沙明标准品于2mL冻存管中，加入1mL甲醇溶解，再加入0.5mL甲
醇:水＝7:3溶液，纯度本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种同时检测血液中6种药物浓度的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、取血液样品，离心，加入甲醇沉淀蛋白，涡旋混合，再次离心，取上清液1；S2、配制系列浓度的校准品溶液、质控样品和内标工作液；S3、向S1制备的上清液1中加入内标工作液，涡旋混合，离心，取上清液2；S4、采用高效液相色谱
‑
串联质谱法对步骤S3得到的上清液2针对所选药物进行检测，以化合物保留时间、两对或三对母离子/子离子进行质谱筛查分析；所述药物包括氟西汀、帕罗西汀、舍曲林、氟伏沙明、西酞普兰和艾司西酞普兰中的一种、多种或全部；所述液相色谱的分析柱为：Eclipse Plus C18 RRHD 2.1
×
50mm，1.8um；所述流动相为；流动相A：0.01％
‑
1％甲酸的水溶液；流动相B：甲醇；流速：0.2
‑
1.0ml/min；柱温：25
‑
50℃；进样量：1μl。2.根据权利要求1所述的一种同时检测血液中6种药物浓度的方法，其特征在于，所述液相色谱的洗脱梯度：流动相A+流动相B＝100％；0～0.5min，流动相A体积保持95％；0.5～1.0min，流动相A体积由95％递减至85％；1.0～3.0min，流动相A体积由85％递减至65％；3.0～5.0min，流动相A体积由65％递减至10％；5.0～7.0min，流动相A体积保持5％；7.0～7.5min，流动相A体积由5％升高至95％；7.5～10min，流动相A体积保持95％；流速：0.2
‑
1.0mL/min；柱温：30℃。3.根据权利要求1所述的一种同时检测血液中6种药物浓度的方法，其特征在于，所述质谱条件如下：离子源温度：440℃；离子源雾化气：35psi；离子源...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡俊，喻长杰，贾鹏飞，
申请(专利权)人：艾可泰科浙江控股有限公司，
类型：发明
国别省市：