同时检测水产品中11种药物及代谢物残留量的方法技术

本发明专利技术实施例公开了一种同时检测水产品中11种药物及代谢物残留量的方法。所述方法：以氨化乙酸乙酯为提取溶剂，得到试样溶液，用液相色谱串联质谱对试样溶液进行测定，之后进行定性和定量分析，获得水产品中11种药物及代谢物残留量。本发明专利技术将11种药物及代谢物同时进行提取，节省了试剂使用量、人员劳动量，缩短了检测周期，通过优化仪器条件、流动相比例，实现了11种药物同时在超高效液相色谱—串联质谱仪ESI源正负离子同时扫描，提高了仪器使用效率，同时还具有灵敏度高，线性范围宽、相关系数高，回收率高，精密度较好的优点。精密度较好的优点。精密度较好的优点。

【技术实现步骤摘要】
同时检测水产品中11种药物及代谢物残留量的方法


[0001]本专利技术实施例涉及检测分析
，具体涉及一种同时检测水产品中11种药物及代谢物残留量的方法。

技术介绍

[0002]近几十年来，我国水产养殖业蓬勃发展，产量连创新高，生产方式也向着高密度、多品种、集约化的方向发展。在养殖过程中，部分兽药被用于渔病的防治，一些养殖单位为了减少损失，盲目用药或者随意加大用药量，甚至使用禁用药或人用药。同时，为了减少鱼类在运输和销售过程中受伤或死亡，部分从业人员违规使用地西泮等药物降低鱼类应激反应。而这些药物的不当使用甚至滥用，使环境中的病原微生物耐药性增强，兽药残留随着食物链进入人体内，给人体健康带来诸如：致癌、致畸、致突变或者损伤人体器官等不利影响。
[0003]为了限制兽药在水产养殖中的滥用现象，我国制订了农业农村部公告第250号、GB 31650等系列公告和标准，其中农业农村部第250号公告中规定氯霉素、替硝唑和洛硝达唑在食品动物中禁止使用，GB 31650中规定甲硝唑、地美硝唑和地西泮为允许作治疗用但不得在动物性食品中检出，甲砜霉素、氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺在水产品中的最大残留限量分别规定为50μg/kg和1000μg/kg。
[0004]近年来，随着水产养殖用药种类不断增加，监管部门将监测参数从最开始的氯霉素、孔雀石绿、硝基呋喃类代谢物等少量禁用药逐步向更多的禁限用药拓展。自2018年起，国家市场监管总局开始对水产品中部分硝基咪唑类药物和地西泮进行监测，自2021年起农业农村部也开始将地西泮纳入国家农产品质量安全例行监测，2022年农业农村部将地西泮纳入国家产地水产品兽药残留监控计划。目前，地西泮已成为水产品质量安全重要的风险隐患药物，在各部门各级抽检中因地西泮产生的不合格现象时有报道。
[0005]由于检测方法的限制，目前水产品中酰胺醇类、硝基咪唑类和地西泮药物及其代谢物的检测需要使用GB/T 20756、GB/T 21318、SN/T 3235和SN/T 1865等不同的检测标准，至少需要进行4次前处理，不仅浪费了大量的试剂、时间、人力和财政资金，也不利于提高监管效率，且存在替硝唑没有现行有效检测标准，地西泮和氟苯尼考胺现有检测方法基质效应大、重复性较差等问题。为了解决这些难题，本专利技术建立了一种高通量同时测定水产品中酰胺醇类(氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺)、硝基咪唑类(洛硝达唑、替硝唑、甲硝唑、地美硝唑及其代谢物羟基甲硝唑、羟基甲硝咪唑)和地西泮共计11种药物及代谢物的分析方法。

技术实现思路

[0006]为此，本专利技术实施例提供一种同时检测水产品中11种药物及代谢物残留量的方法。
[0007]为了实现上述目的，本专利技术实施例提供如下技术方案：
[0008]本专利技术提供一种同时检测水产品中11种药物及代谢物残留量的方法，以氨化乙酸
乙酯为提取溶剂，得到试样溶液，用液相色谱串联质谱对试样溶液进行测定，之后进行定性和定量分析，获得水产品中11种药物及代谢物残留量；其中，所述氨化乙酸乙酯为氨水和乙酸乙酯的混合溶液；所述11种药物及代谢物为：氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、氟苯尼考胺、甲硝唑、替硝唑、地美硝唑、洛硝达唑、羟基甲硝唑、羟基甲硝咪唑、地西泮。
[0009]本专利技术对样品的提取溶剂进行大量研究，发现氨化乙酸乙酯能高效提取目标待测物，减少待测物损失，同时降低杂质含量，尽量除去干扰物的影响。相比于其他提取溶剂如乙酸乙酯、乙腈等，有利于充分提取组织中的氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺，从而保证检测方法的准确性；与氨化乙腈相比，在保证最大限定提取上述11种药物及代谢物的同时，能够大大降低杂质含量，有利于提高检测方法的灵敏度。
[0010]进一步地，所述试样溶液的制备具体包括：向试样中加入第一氨化乙酸乙酯，涡旋、超声、离心，收集上清液，向残渣中加入第二氨化乙酸乙酯，涡旋、超声、离心，合并上清液，之后进行浓缩，所得浓缩液经净化与定溶，得到试样溶液；其中，所述第一氨化乙酸乙酯或第二氨化乙酸乙酯中氨水的体积浓度为0.1％
‑
2％；所述试样与第一氨化乙酸乙酯、第二氨化乙酸乙酯的重量体积比为5
±
0.05g：12.5
‑
17.5mL：7.5
‑
12.5mL。
[0011]本专利技术进一步对试样溶液的提取方法进行研究，发现在上述提取条件下，所提供的方法在同时检测11种药物及代谢物时，操作简便、快捷且准确，适用于大批量样品检测；同时，检测所需试剂种类少、用量小，有利于降低成本，且更加环保。
[0012]进一步地，所述涡旋在1500
‑
3000r/min下进行5
‑
10min；所述超声在频率30
‑
50KHz下进行5
‑
15min；所述离心在3000
‑
6000r/min下进行5
‑
10min。
[0013]进一步地，所述净化具体包括：用体积分数为5
‑
30％的甲醇水溶液溶解所述浓缩液，于3000
‑
6000r/min、0
‑
8℃冷冻离心10
‑
20min，吸取下层清液用水相针式过滤器过滤至进样小瓶。
[0014]进一步地，液相色谱条件：ACQUITYUPLC BEH C18色谱柱；流动相梯度洗脱条件：第0.0～0.5min，5％流动相B；第0.5～3.0min，5％～95％流动相B，第3.0～4.0min，95％流动相B；第4.0～4.5min，95％～5％流动相B，第4.5～5.0min，5％流动相B；其中，流动相A：10mmol/L甲酸铵水溶液，pH调节至7.0～7.5，流动相B：甲醇。
[0015]本专利技术对液相色谱条件进行大量研究，流动相的类型显著影响HPLC峰形及信号响应，如流动相A为水，流动相B为甲醇时，氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、替硝唑、甲硝唑、洛硝达唑、地美硝唑、羟基甲硝唑、地西泮的峰型较好，但氟苯尼考胺和羟基甲硝唑峰型较差；如流动相A使用体积分数为0.1％甲酸水溶液，流动性B为甲醇时，氟苯尼考胺和羟基甲硝唑峰型变好，但氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考在负离子扫描模式下信号响应受到抑制。研究发现，在上述的液相色谱条件下，通过同时兼顾11种药物及代谢物的峰型与信号响应。
[0016]进一步地，所述色谱柱的规格为：50mm
×
2.1mm，粒径1.7μm。
[0017]进一步地，所述液相色谱条件还包括：柱温：35
‑
45℃；流速：0.20
‑
0.50mL/min；进样量：5.0
‑
10.0μL
[0018]进一步地，质谱条件为：电离方式：电喷雾离子源(ESI)，多反应监测正离子/负离子扫描模式(MRM)；脱溶剂气温度：400℃；脱溶剂气流量：1000L/h；碰撞气流速：0.18mL/min，锥本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种同时检测水产品中11种药物及代谢物残留量的方法，其特征在于，以氨化乙酸乙酯为提取溶剂，得到试样溶液，用液相色谱串联质谱对试样溶液进行测定，之后进行定性和定量分析，获得水产品中11种药物及代谢物残留量；其中，所述氨化乙酸乙酯为氨水和乙酸乙酯的混合溶液；所述11种药物及代谢物为：氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、氟苯尼考胺、甲硝唑、替硝唑、地美硝唑、洛硝达唑、羟基甲硝唑、羟基甲硝咪唑、地西泮。2.根据权利要求1所述的同时检测水产品中11种药物及代谢物残留量的方法，其特征在于，所述试样溶液的制备具体包括：向试样中加入第一氨化乙酸乙酯，涡旋、超声、离心，收集上清液，向残渣中加入第二氨化乙酸乙酯，涡旋、超声、离心，合并上清液，浓缩，所得浓缩液经净化与定溶，得到试样溶液；其中，所述第一氨化乙酸乙酯或第二氨化乙酸乙酯中氨水的体积浓度为0.1％
‑
2％；所述试样与第一氨化乙酸乙酯、第二氨化乙酸乙酯的重量体积比为5
±
0.05g：12.5
‑
17.5mL：7.5
‑
12.5mL。3.根据权利要求2所述的同时检测水产品中11种药物及代谢物残留量的方法，其特征在于，所述涡旋在1500
‑
3000r/min下进行5
‑
10min；所述超声在频率30
‑
50KHZ下进行5
‑
15min；所述离心在3000
‑
6000r/min下进行5
‑
10min。4.根据权利要求2所述的同时检测水产品中11种药物及代谢物残留量的方法，其特征在于，所述净化具体包括：用体积分数为5
‑
30％的甲醇水溶液溶解所述浓缩液，于3000
‑
6000r/min、0
‑
8℃冷冻离心10
‑
20min，吸取下层清液用水相针式过滤器过滤至进样小瓶。5.根据权利要求1所述的同时检测水产品中11种药物及代谢物残留量的方法，其特征在于，液相色谱条件：ACQUITYUPLC BEH C18色谱柱；流动相梯度洗脱条件：第0.0～0.5min，5％流动相B；第0.5～3...

【专利技术属性】
技术研发人员：李英，沈媛，孙娟，杨静，吴仑，贾晨，陈翔，于寒冰，方芳，
申请(专利权)人：北京市农产品质量安全中心，
类型：发明
国别省市：