猫细小病毒检测试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及生物检测技术领域，具体涉及猫细小病毒检测试剂盒。本发明专利技术提供了双抗体夹心酶联免疫法的检测猫泛白细胞减少症病毒的试剂。本发明专利技术通过构建噬菌体展示文库筛选出猫泛白细胞减少症病毒的特异性抗体，并将其用于FPV的检测，具有特异性高、灵敏度高和稳定性好等优势。等优势。

【技术实现步骤摘要】
猫细小病毒检测试剂盒


[0001]本专利技术涉及生物检测
，具体涉及猫细小病毒检测试剂盒。

技术介绍

[0002]猫细小病毒，又称猫泛白细胞减少症病毒(Feline panleukopenia virus，FPV)、猫瘟病毒，猫传染性肠炎病毒，属于细小病毒科，细小病毒属，是一种单链线状DNA病毒。猫泛白细胞减少症病毒(FPV)引起的传染病以高热、呕吐、白细胞严重减少和肠炎为特征。
[0003]FPV不仅能引起猫、水貂明显的临床症状和很高的死亡率，而且能感染几乎所有的猫科动物。血清学调查结果表明，许多这类动物的血清中，含有抗本病毒的特异性抗体，表明在自然情况下病毒在这些动物间的广泛存在和传播。
[0004]猫泛白细胞减少症给宠物业造成巨大的损失。其主要侵害幼猫，潜伏期2～9天，平均4天。本病的临床表现甚为多样，分为特急性型、急性型、亚急性型和不显型。特急性型不待发现临床症状即突然死亡，畜主往往怀疑为中毒。急性型可于24小时内死亡。亚急性型可持续数日到一周，呈双相热。第一期发热时病畜体温升高40℃左右，持续约一天，发热平息后数天第二次发热，体温40℃以上，同时出现厌食、呕吐、沉郁、出血性肠炎和脱水等症状，病猫多于5～6天死亡，死亡率一般为60％～70％。在严重流行时幼猫几乎全部死亡。病程超过6天以上的猫，有可能经过较长时间的恢复期后痊愈。
[0005]猫泛白细胞减少症的治疗方法主要应用干扰素结合高免血清进行特异性治疗，同时配合对症治疗，就可以取得很好的治疗效果。因此，对于FPV的尽早诊断和检测，对于减少宠物业的损失，具有重要的意义。

技术实现思路

[0006]有鉴于此，本专利技术要解决的技术问题在于提供检测猫细小病毒检测试剂盒，该试剂盒基于双抗体夹心酶联免疫法设计，能够具有良好的灵敏性、特异性和稳定性。
[0007]本专利技术提供的猫细小病毒的检测试剂中包括捕获抗体和检测抗体。
[0008]其中，捕获抗体或检测抗体可以相同也可以不同。
[0009]所述捕获抗体：
[0010](1)其轻链三个CDR区分别具有如SEQ ID NO:1～18中任一项所示的氨基酸序列；其重链三个CDR区分别具有如SEQ ID NO:19～36中任一项所示的氨基酸序列；
[0011](2)与(1)所示的氨基酸序列中经过氨基酸的取代、添加或缺失一个或多个，但与(1)所示氨基酸功能相同或相似的氨基酸序列；或
[0012](3)与(1)或(2)所示的氨基酸序列具备至少80％同源性的氨基酸序列。
[0013]所述捕获抗体：
[0014]Ⅰ、其重链的四个FR区分别具有如SEQ ID NO:37～60中任一项所示的氨基酸序列；其轻链的四个FR分别具有如SEQ ID NO:61～84中任一项所示的氨基酸序列；
[0015]Ⅱ、与Ⅰ所示的氨基酸序列中经过氨基酸的取代、添加或缺失一个或多个，但与Ⅰ所
示氨基酸功能相同或相似的氨基酸序列；或
[0016]Ⅲ、与Ⅰ或Ⅱ所示的氨基酸序列具备至少80％同源性的氨基酸序列。
[0017]所述检测抗体：
[0018](1)其轻链三个CDR区分别具有如SEQ ID NO:1～18中任一项所示的氨基酸序列；其重链三个CDR区分别具有如SEQ ID NO:19～36中任一项所示的氨基酸序列；
[0019](2)与(1)所示的氨基酸序列中经过氨基酸的取代、添加或缺失一个或多个，但与(1)所示氨基酸功能相同或相似的氨基酸序列；或
[0020](3)与(1)或(2)所示的氨基酸序列具备至少80％同源性的氨基酸序列。
[0021]所述检测抗体：
[0022]Ⅰ、其重链的四个FR区分别具有如SEQ ID NO:37～60中任一项所示的氨基酸序列；其轻链的四个FR分别具有如SEQ ID NO:61～84中任一项所示的氨基酸序列；
[0023]Ⅱ、与Ⅰ所示的氨基酸序列中经过氨基酸的取代、添加或缺失一个或多个，但与Ⅰ所示氨基酸功能相同或相似的氨基酸序列；或
[0024]Ⅲ、与Ⅰ或Ⅱ所示的氨基酸序列具备至少80％同源性的氨基酸序列。
[0025]本专利技术中，所述具有至少80％同源性的序列为在原序列的基础上，经取代、添加或缺失一个或多个氨基酸获得的氨基酸序列中，所述多个为2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个、30个、31个、32个、33个、34个、35个或36个。
[0026]一些实施例中，
[0027]所述检测抗体的轻链三个CDR区分别具有如SEQ ID NO:22～23中任一项所示的氨基酸序列；重链三个CDR区分别具有如SEQ ID NO:4～6中任一项所示的氨基酸序列；
[0028]所述捕获抗体的轻链三个CDR区分别具有如SEQ ID NO:24～26中任一项所示的氨基酸序列；重链三个CDR区分别具有如SEQ ID NO:7～9中任一项所示的氨基酸序列。
[0029]一些实施例中，
[0030]所述检测抗体重链的四个FR区分别具有如SEQ ID NO:41～44中任一项所示的氨基酸序列；轻链的四个FR分别具有如SEQ ID NO:65～68中任一项所示的氨基酸序列；
[0031]所述捕获抗体重链的四个FR区分别具有如SEQ ID NO:45～48中任一项所示的氨基酸序列；轻链的四个FR分别具有如SEQ ID NO:69～72中任一项所示的氨基酸序列；。
[0032]更具体的，
[0033]所述检测抗体重链可变区如SEQ ID NO:86所示，恒定区为IgGH；轻链如SEQ ID NO:92所示，恒定区为κ型；
[0034]所述捕获抗体重链可变区如SEQ ID NO:87所示，恒定区为IgGH；轻链如SEQ ID NO:93所示，恒定区为κ型。
[0035]一些实施例中，所述检测抗体或捕获抗体的重链和轻链的连接肽linker具有如SEQ ID NO:97所示的氨基酸序列。
[0036]一些实施例中，所述猫泛白细胞减少症病毒的抗体还包括恒定区，所述重链的恒定区为IgGH，所述轻链的恒定区为κ链。
[0037]本专利技术中，所述捕获抗体包被于固相介质，所述检测抗体标记有化学标记或生物标记。
VP2的SDS
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PAGE结果，M：Marker，1：Ab
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2，3：Ab
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5，6：Ab
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.猫细小病毒的检测试剂，其特征在于，包括捕获抗体和检测抗体；所述检测抗体的轻链三个CDR区分别具有如SEQ ID NO:1～18中任一项所示的氨基酸序列；重链三个CDR区分别具有如SEQ ID NO:19～36中任一项所示的氨基酸序列；所述捕获抗体的轻链三个CDR区分别具有如SEQ ID NO:1～18中任一项所示的氨基酸序列；重链三个CDR区分别具有如SEQ ID NO:19～36中任一项所示的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，所述检测抗体的轻链三个CDR区分别具有如SEQ ID NO:22～24中任一项所示的氨基酸序列；重链三个CDR区分别具有如SEQ ID NO:4～6中任一项所示的氨基酸序列；所述捕获抗体的轻链三个CDR区分别具有如SEQ ID NO:24～26中任一项所示的氨基酸序列；重链三个CDR区分别具有如SEQ ID NO:7～9中任一项所示的氨基酸序列。3.根据权利要求2所述的检测试剂，其特征在于，所述检测抗体重链的四个FR区分别具有如SEQ ID NO:41～44中任一项所示的氨基酸序列；轻链的四个FR分别具有如SEQ ID NO:65～68中任一项所示的氨基酸序列；所述捕获抗体重链的四个FR区分别具有如SEQ ID NO:45～48中任一项所示的氨基酸序列；轻链的四个FR分别具有如SEQ ID NO:69～72中任一项所示的氨基酸序列。4....

【专利技术属性】
技术研发人员：查丽莎，张宇航，周宇杭，郑琪，黄茜，
申请(专利权)人：深圳赫兹生命科学技术有限公司，
类型：发明
国别省市：