一种呼吸道病毒抗原四联检快速检测试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及一种呼吸道病毒抗原四联检快速检测试剂盒，涉及生物免疫技术领域，包括检测卡，检测卡包括上盖、下盖和两个检测试纸条，两个检测试纸条分别位于下盖的两端且平行设置，两个检测试纸条结构相同，两个检测试纸条均包括样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和PVC板，本发明专利技术提供一种可同时检测新型冠状病毒(SARS

【技术实现步骤摘要】
一种呼吸道病毒抗原四联检快速检测试剂盒


[0001]本专利技术涉及生物免疫
，具体地说，涉及一种呼吸道病毒抗原四联检快速检测试剂盒。

技术介绍

[0002]目前，呼吸道病毒主要包括新型冠状病毒(SARS
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2)、甲型流感病毒(Flu A)、乙型流感病毒（Flu B）和呼吸道合胞病毒（RSV），冠状病毒的主要传播方式是近距离呼吸道飞沫传播，其他途径如接触、粪口（消化道）等途径存在极大可能。
[0003]流感病毒分为甲（A）型、乙（B）型和丙（C）型，人类大部分感染的是甲、乙型病毒。其中甲型流感病毒最常见，在世界各地常会有周期性流行。甲型流感病毒较容易发生变异，流感大流行就是甲型流感病毒出现新亚型或旧亚型重现而引起的，另外甲型流感病毒的多种亚型也可感染动物。乙型流感病毒感染基本限于人类且很少引起流行病。
[0004]呼吸道合胞病毒（RSV）属于副粘病毒科，是婴幼儿、老年人及免疫缺陷病人下呼吸道感染（细支气管炎和肺炎）最常见的病毒，几乎所有儿童至2岁时均感染过RSV，但由于免疫力不完全，儿童和成人可被反复感染。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种呼吸道病毒抗原四联检快速检测试剂盒，该制备方法可明显改善现有胶体金制备技术中的颗粒形貌及粒径不均一、胶体金不稳定等问题，提升胃幽门螺旋杆菌IgG抗体检测试纸条的灵敏度和特异性。
[0006]为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：一种呼吸道病毒抗原四联检快速检测试剂盒，包括检测卡，检测卡包括上盖、下盖和两个检测试纸条，两个检测试纸条分别位于下盖的两端且平行设置，两个检测试纸条结构相同，两个检测试纸条均包括样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和PVC板，胶体金垫的制备方法，包括如下步骤：1）、胶体金溶液制备：将5%～20%V/V的柠檬酸钠与HAuCl4加热到130℃，并维持5～25分钟，直至溶液颜色变为完全透明的紫红色后，维持沸腾15分钟，后冷却到室温，此时胶体金溶液呈现为紫红色；2）、纳米花胶体金制备：使用纯化水将步骤1的胶体金溶液稀释50～120倍后，加入13～44%V/V的氢醌溶液，在55℃～85℃条件下加热13～19分钟，静置30分钟后吸取沉淀物，得到纳米花胶体金溶液；3）、链霉亲和素标记：在浓度为0.05～0.1wt％ pH值8.2～11.5的步骤2的胶体金纳米花溶液中加入链霉亲和素和BSA，涡旋混匀后在6000rpm离心5分钟，吸取底部沉淀物得到链霉亲和素标记后的胶体金。
[0007]作为一种优化方案，其中一个检测试纸条的胶体金垫的制备方法，还包括如下步骤：4）、抗原标记抗体：使用磷酸盐缓冲液将新型冠状病毒(SARS
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2)和呼吸道合
胞病毒（RSV）抗原标记的抗体稀释至0.5～2mg/mL，加入到8mL步骤3的链霉亲和素标记的胶体金溶液中，再加入碳酸氢钾溶液0.2mol/L，搅拌15～25min，6000rpm离心10分钟，吸取沉淀物为新型冠状病毒(SARS
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2)和呼吸道合胞病毒（RSV）抗原标记的抗体溶液。
[0008]作为一种优化方案，其中一个检测试纸条的胶体金垫的制备方法，还包括如下步骤：5）、胶体金垫的制备：使用磷酸盐缓冲液将新型冠状病毒(SARS
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2)和呼吸道合胞病毒（RSV）抗原标记的抗体溶液浓度调整到10～20％，采用喷金仪均匀喷至玻璃纤维膜，在烘箱内干燥1小时，得到胶体金垫。
[0009]作为一种优化方案，另一个检测试纸条的胶体金垫的制备方法，还包括如下步骤：4）、抗原标记抗体：使用磷酸盐缓冲液将甲型流感病毒(Flu A)、乙型流感病毒（Flu B）稀释至0.5～2mg/mL，加入到8mL步骤3的链霉亲和素标记的胶体金溶液中，再加入碳酸氢钾溶液0.2mol/L，搅拌15～25min，6000rpm离心10分钟，吸取沉淀物为甲型流感病毒(Flu A)、乙型流感病毒（Flu B）抗原标记的抗体溶液；作为一种优化方案，另一个检测试纸条的胶体金垫的制备方法，还包括如下步骤：5）、胶体金垫的制备：使用磷酸盐缓冲液将甲型流感病毒(Flu A)、乙型流感病毒（Flu B）浓度调整到10～20％，采用喷金仪将工作液均匀喷至玻璃纤维膜，在烘箱内干燥1小时，得到胶体金垫。
[0010]作为一种优化方案， 其中一个检测试纸条的硝酸纤维素膜的制备方法，包括如下步骤：将新型冠状病毒(SARS
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2)、呼吸道合胞病毒（RSV）抗原捕获抗体和质控分子捕获抗体分别用0.1mol/L的磷酸盐缓冲液稀释到1～3mg/mL、0.1～2mg/mL后依次划线于硝酸纤维素膜的检测T1线、检测T2线和质控C线处，将划好线的硝酸纤维素膜放入恒温箱干燥，干燥温度37℃，干燥时长60min，得处理好的硝酸纤维素膜。
[0011]作为一种优化方案，另一个检测试纸条的硝酸纤维素膜的制备方法，包括如下步骤：将甲型流感病毒(Flu A)、乙型流感病毒（Flu B）抗原捕获抗体和质控分子捕获抗体分别用0.1mol/L的磷酸盐缓冲液稀释到1～3mg/mL、0.1～2mg/mL后依次划线于硝酸纤维素膜的检测T1线、检测T2线和质控C线处，将划好线的硝酸纤维素膜放入恒温箱干燥，干燥温度37℃，干燥时长60min，得处理好的硝酸纤维素膜。
[0012]作为一种优化方案，所述硝酸纤维素膜粘贴在PVC板上，硝酸纤维素膜的两端分别搭接胶体金垫和吸水纸，胶体金垫远离硝酸纤维素膜的一端搭接样品垫。
[0013]作为一种优化方案，所述上盖和下盖相互卡扣连接，上盖上设有一个加样孔和两个观察窗，加样孔设置在上盖的中心位置，两个检测试纸条的样品垫设置在加样孔的下方。
[0014]作为一种优化方案，一种呼吸道病毒抗原四联检快速检测试剂盒，还包括样本裂解液。
[0015]本专利技术采取以上技术方案，具有以下优点：本专利技术提供一种可同时检测新型冠状病毒(SARS
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2)、甲型流感病毒(Flu A)、乙型流感病毒（Flu B）和呼吸道合胞病毒（RSV）的抗原四联检测试剂盒，综合监测呼吸道病毒从而节省检测资源，检测方法简单快捷，检测结果准确度高，试剂盒稳定性好且特异性强。
[0016]下面结合附图和具体实施方式对本专利技术作进一步说明。
附图说明
[0017]图1为本专利技术一种呼吸道病毒抗原四联检快速检测试剂盒的检测卡内部的结构示意图；图2为本专利技术一种呼吸道病毒抗原四联检快速检测试剂盒的检测卡的结构示意图；图3为本专利技术一种呼吸道病毒抗原四联检快速检测试剂盒的检测试纸条的结构示意图。
[0018]图中，1
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上盖，2
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下盖，3
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检测试纸条，4
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样品垫，5
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种呼吸道病毒抗原四联检快速检测试剂盒，其特征在于：包括检测卡，检测卡包括上盖（1）、下盖（2）和两个检测试纸条（3），两个检测试纸条（3）分别位于下盖（2）的两端且平行设置，两个检测试纸条（3）结构相同，两个检测试纸条（3）均包括样品垫（4）、胶体金垫（5）、硝酸纤维素膜（6）、吸水垫（7）和PVC板（8），胶体金垫（5）的制备方法，包括如下步骤：1）、胶体金溶液制备：将5%～20%V/V的柠檬酸钠与HAuCl4加热到130℃，并维持5～25分钟，直至溶液颜色变为完全透明的紫红色后，维持沸腾15分钟，后冷却到室温，此时胶体金溶液呈现为紫红色；2）、纳米花胶体金制备：使用纯化水将步骤1的胶体金溶液稀释50～120倍后，加入13～44%V/V的氢醌溶液，在55℃～85℃条件下加热13～19分钟，静置30分钟后吸取沉淀物，得到纳米花胶体金溶液；3）、链霉亲和素标记：在浓度为0.05～0.1wt％pH值8.2～11.5的步骤2的胶体金纳米花溶液中加入链霉亲和素和BSA，涡旋混匀后在6000rpm离心5分钟，吸取底部沉淀物得到链霉亲和素标记后的胶体金。2.根据权利要求1所述的呼吸道病毒抗原四联检快速检测试剂盒，其特征在于：其中一个检测试纸条的胶体金垫（5）的制备方法，还包括如下步骤：4）、抗原标记抗体：使用磷酸盐缓冲液将新型冠状病毒(SARS
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2)和呼吸道合胞病毒（RSV）抗原标记的抗体稀释至0.5～2mg/mL，加入到8mL步骤3的链霉亲和素标记的胶体金溶液中，再加入碳酸氢钾溶液0.2mol/L，搅拌15～25min，6000rpm离心10分钟，吸取沉淀物为新型冠状病毒(SARS
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2)和呼吸道合胞病毒（RSV）抗原标记的抗体溶液。3.根据权利要求2所述的呼吸道病毒抗原四联检快速检测试剂盒，其特征在于：其中一个检测试纸条的胶体金垫（5）的制备方法，还包括如下步骤：5）、胶体金垫的制备：使用磷酸盐缓冲液将新型冠状病毒(SARS
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2)和呼吸道合胞病毒（RSV）抗原标记的抗体溶液浓度调整到10～20％，采用喷金仪均匀喷至玻璃纤维膜，在烘箱内干燥1小时，得到胶体金垫（5）。4.根据权利要求1所述的呼吸道病毒抗原四联检快速检测试剂盒，其特征在于：另一个检测试纸条的胶体金垫（5）的制备方法，还包括如下步骤：4）、抗原标记抗体：使用磷酸盐缓冲液将甲型流感病毒(Flu A)、乙型流感病毒（Flu B）稀释至0.5...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨帆，刘向祎，王含，田永帅，刘嘉男，朱青，
申请(专利权)人：青岛汉唐生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：