【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及疫苗，具体涉及一种猫疱疹病毒i型hr-1毒株重组蛋白的抗原片段、截短体及其在疫苗上的应用。
技术介绍
1、猫疱疹病毒i型(felineherpesvirus-1，fhv-1)是一种线型双链dna包膜病毒，隶属于疱疹病毒科，α-疱疹病毒亚科。fhv-1作为引起猫科动物发生呼吸道及眼部疾病的主要病原体之一，对猫科动物的健康造成了严重危害，尤其是易感动物幼猫，其死亡率高达50％。
2、fhv-1感染幼猫后，在幼猫的鼻、气管及结膜等部位复制，经眼鼻分泌物向外界排毒，可引起幼猫的急性或慢性感染，引发上呼吸道和眼部炎症，眼鼻周围受其脓性分泌物的刺激引发脱毛导致结痂，病情严重的猫甚至会出现鼻甲骨萎缩变形、失明等症状。受感染的猫会建立潜伏期，fhv-1潜伏于康复猫的三叉神经节和视神经节内，在猫舍外界环境因素如种群密度大、周转率高、来源不同的影响下，极易引发反复感染，不利于该病的防控。
3、目前，fhv-1呈世界性流行，我国在多地区也曾分离出该病毒，并在致病机制、流行病学、诊断及检测等方面取得显著进展。疫苗是防控传染病的重要手段。然而到目前为止，鲜有fhv-1疫苗的报道，也无治疗fhv-1病的特效药。
4、疫苗接种为预防fhv-1感染的主要手段。现有研究支持在急性fhv-1感染的猫中使用灭活疫苗或fvrcp疫苗产品。现在市场上可以买到改良活疫苗(mlv)和灭活疫苗，然而疫苗仅减少临床症状，不能防止病毒排出或建立野外病毒潜伏期。
5、gb糖蛋白即病毒感染细胞中的gp143/108，变性条
6、gd蛋白是病毒囊膜的主要成分，存在于感染的细胞膜上，具有高度的保守性和抗原性，能够与细胞表面的分子特异性结合，诱导机体产生细胞免疫和体液免疫，在病毒穿入易感细胞中起重要作用，是宿主细胞免疫和体液免疫反应的主要靶细胞之一。horimoto等使用cona琼脂糖、离子交换和凝胶过滤层析技术，从fhv-1中纯化出大约为59kda的能作为血凝素的gd糖蛋白。核酸序列分析表明，fhv-1病毒基因组长1125bp，由374个氨基酸编码，分子量为43.2kda。fhv-1的gd与其他疱疹病毒的gd基因产物比较发现，组成其二硫键的6个半胱氨酸骨架高度保守。抗gd的单克隆抗体有非依赖补体的病毒中和特性。在其他各类疱疹病毒中，虽然gd基因的生物学功能不同，但他们都是病毒在体内感染和体外复制的非必需基因。
7、ge蛋白是fhv-1重要的囊膜糖蛋白，影响着病毒的释放、在细胞间传递及毒力，因而被作为构建缺失标记疫苗的对象。同时，血清中ge抗体就成为免疫猫中是否存在fhv-1感染的可靠标志。
8、gc是一种多功能糖蛋白，尽管不是病毒增殖所必需的，但是在病毒的吸附、病毒粒子的释放、决定病毒的毒力以及影响病毒的稳定性等方面起着十分重要的作用。此外，gc还参与体液免疫、细胞免疫和病毒的免疫逃避机制等。
9、传统疫苗中，采用gb、gd蛋白制作疫苗，但该类疫苗效果一般，没有实现商业化。本专利技术采用gc、gd、ge三种蛋白的截短体作为新的重组蛋白，得到的疫苗不仅效果更佳，成本更低，同时，还易于实现商业化应用。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提出一种猫疱疹病毒i型hr-1毒株重组蛋白的抗原片段、截短体及其在疫苗上的应用，在靶点的选择上，挑选了涉及病毒入侵宿主细胞非常关键的包膜糖蛋白gd，两个与病毒免疫逃脱有关的蛋白，gc和ge，选择了gd，gc和ge三个靶点，分析结构并进行试验，将三个蛋白进行截短，组合得到了一种重组蛋白，做成了三价疫苗，能够提供高保护效率。疫苗质量优良，免疫效力高，免疫效果稳定，成本低、在较短的时间内产生免疫保护等优点。
2、本专利技术的技术方案是这样实现的：
3、本专利技术提供如下1)、2)或3)所示的蛋白质或其截短体，所述截短体为如下任一所示：
4、1)猫疱疹病毒苗i型入侵宿主细胞的包膜糖蛋白gd自n端起第25-288位氨基酸，其氨基酸序列如seq id no.1所示；
5、2)猫疱疹病毒苗i型免疫逃脱相关蛋白gc自n端起第29-487位氨基酸，其氨基酸序列如seq id no.2所示；
6、3)猫疱疹病毒苗i型免疫逃脱相关蛋白ge自n端起第20-365位氨基酸，其氨基酸序列如seq id no.3所示；
7、所述蛋白质为gd、gc和ge至少一种。
8、本专利技术进一步保护一种编码上述1)、2)或3)所示的蛋白质的基因，编码1)猫疱疹病毒苗i型入侵宿主细胞的包膜糖蛋白gd截短体的基因的核苷酸序列如seq id no.4所示；编码2)猫疱疹病毒苗i型免疫逃脱相关蛋白gc截短体的基因的核苷酸序列如seq id no.5所示；编码3)猫疱疹病毒苗i型免疫逃脱相关蛋白ge截短体的基因的核苷酸序列如seq idno.6所示。
9、本专利技术中，所述hr-1毒株与c-27毒株的氨基酸和核酸序列具有高度的相似性，文献“feline herpesvirus 1us3 blocks the type i interferon signal pathway bytargeting interferon regulatory factor 3dimerization in a kinase-independentmanner."中提到c-27株orf序列进行比较，hr-1的大部分orf是保守的，只有ul2、ul39、ul50和v1 orf出现一定的突变；文献猫疱疹病毒1型hr-1毒株的分离鉴定及致病性分析中提到hr-1毒株与c-27毒株gd基因的相似性达到100％，本专利技术也通过测序证实此结论，c-27毒株的gd、gc、ge原始序列与hr-1的等同。
10、本专利技术进一步保护一种表达载体，包括上述的基因。
11、本专利技术进一步保护一种宿主细胞，其特征在于，含有上述的载体。
12、本专利技术进一步保护一种制备上述蛋白质的方法，包括诱导上述的宿主细胞进行蛋白表达的步骤。
13、作为本专利技术的进一步改进，所述表达载体为pcdna3.1(+)；所述宿主细胞为大肠杆菌。
14、本专利技术进一步保护一种用于预防猫疱疹病毒苗i型相关疾本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.如下1)、2)或3)所示的蛋白质或其截短体，所述截短体为如下任一所示：
2.一种编码权利要求1所述1)、2)或3)所示的蛋白质的基因，其特征在于，编码1)猫疱疹病毒苗I型入侵宿主细胞的包膜糖蛋白gD截短体的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；编码2)猫疱疹病毒I型免疫逃脱相关蛋白gC截短体的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；编码3)猫疱疹病毒I型免疫逃脱相关蛋白gE截短体的基因的核苷酸序列如SEQ IDNO.6所示。
3.一种表达载体，其特征在于，包括权利要求2所述的基因。
4.一种宿主细胞，其特征在于，含有权利要求3所述的表达载体。
5.一种制备权利要求1所述蛋白质的方法，其特征在于，包括诱导权利要求4所述的宿主细胞进行蛋白表达的步骤。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述表达载体为pcDNA3.1(+)；所述宿主细胞为大肠杆菌。
7.一种用于预防猫疱疹病毒苗I型相关疾病的疫苗，其包含权利要求1所述的蛋白质及医学上可接受的载体。
8.权利要求1所述蛋白质或其截
9.权利要求1所述蛋白质或其截短体和/或权利要求2所述编码基因和/或权利要求3所述表达载体和/或权利要求4所述宿主细胞在如下a1)-a6)中任一种中的应用：
10.一种产品，其活性成分为权利要求1所述蛋白质或其截短体；
11.一种多抗，是以权利要求1所述蛋白质或其截短体为免疫原制备得到的。
...【技术特征摘要】
1.如下1)、2)或3)所示的蛋白质或其截短体，所述截短体为如下任一所示：
2.一种编码权利要求1所述1)、2)或3)所示的蛋白质的基因，其特征在于，编码1)猫疱疹病毒苗i型入侵宿主细胞的包膜糖蛋白gd截短体的基因的核苷酸序列如seq id no.4所示；编码2)猫疱疹病毒i型免疫逃脱相关蛋白gc截短体的基因的核苷酸序列如seq id no.5所示；编码3)猫疱疹病毒i型免疫逃脱相关蛋白ge截短体的基因的核苷酸序列如seq idno.6所示。
3.一种表达载体，其特征在于，包括权利要求2所述的基因。
4.一种宿主细胞，其特征在于，含有权利要求3所述的表达载体。
5.一种制备权利要求1所述蛋白质的方法，其特征在于，包括诱导权利要求4所述的宿主细胞进行蛋白表达的步骤。
<...【专利技术属性】
技术研发人员：查丽莎，郑琪，黄茜，
申请(专利权)人：深圳赫兹生命科学技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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