一种乳及乳制品中氨基酸含量检测的回收实验方法，所述氨基酸含量检测的方法包括： １）制备多个不同浓度的氨基酸的混合标准溶液，并对其分别检测，根据所测得的数据，绘制各种氨基酸含量与检测结果之间的标准曲线图； ２）将样品水解后用与步骤 １）同样的方法进行检测，得到检测结果Ａ； ３）将步骤２）中的检测结果Ａ与所述的标准曲线图比对，得到样品中各种氨基酸含量； ４）上述步骤中使用的检测设备为氨基酸自动分析仪； 其特征在于，所述回收实验方法包括： 将蛋白质 纯品或标准小麦营养粉用与步骤２）中样品相同的方法水解和检测，得到蛋白质纯品或标准小麦营养粉的检测结果Ｂ，将检测结果Ｂ与所述标准曲线图比对，得到蛋白质纯品或标准小麦营养粉中各种氨基酸含量的实测值，所述实测值与所述蛋白质纯品中各种氨基酸标准含量的比值即为各种氨基酸检测的回收率。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种乳及乳制品的检测方法，尤其涉及一种乳及乳制品中氨 基酸含量检测的回收实验方法，属于分析
技术介绍
自1958年氨基酸自动分析方法出现，经过40多年的发展，氨基酸的分 析方法得到不断的改进和完善，由最初的阳离子交换色谱分离——柱后茚三 酮衍生化方法中茚三酮的不稳定，到目前的试剂由氮气作为保护气，延长了 茚三酮溶液与茚三酮缓冲液的稳定周期，氨基酸组成分析在生物化学、食品 科学、微生物学、临床诊断等领域有广泛的应用。蛋白质的氨基酸组成分析是一个相对复杂的分析过程，它包括两个步骤: 即多肽的完全水解并游离出所有的氨基酸残基以及游离氨基酸定性和定量色 谱分析。研究表明，水解操作的不正确是测定结果错误的主要原因。虽然多 肽的氨基酸组成分析向更灵敏、更精确、更快速以及自动化方向发展的技术 改进已有一些报道，但还没有一种单独适用于所有残基的，并且能在水解液 中定量回收的水解方法出现，所以水解仍然是整个分析中最难控制的步骤。 温度、时间、水解试剂及添加剂等对水解的完全程度均有影响。多肽水解可 以是化学方法也可以是酶解方法。化学水解又包括酸性水解和碱性水解。回收率是衡量检测方法和操作准确度的一个重要指标，其越接近100%， 即表明实验方法的准确度越好。对于乳品中氨基酸检测，运用传统的加标回 收的方式，即在一定量的样品中加入己知的不同浓度的标准溶液(一般加入 标准物质的量为待测样品量的0.5-2.0倍)，通过(实测加标值-样品实测值) 与理论值(即标样值)的比值来表示回收率的状况，不能成功。因为标样中 部分游离氨基酸在高温及酸(碱)的作用下会破坏、分解而损失。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种乳及乳制品中氨基酸含量检测的回4收实验方法，其克服了传统加标回收实验方法无法检验上述氨基酸检测方法 的回收率的困难。为解决上述技术问题，本专利技术提供了一种乳及乳制品中氨基酸含量检测 的回收实验方法，所述氨基酸含量检测以外标法检测，具体来说包括1) 制备多个不同浓度的氨基酸的混合标准溶液，并对其分别检测，根据 所测得的数据，绘制各种氨基酸含量与检测结果之间的标准曲线2) 将样品水解后用与步骤l)同样的方法进行检测，得到检测结果A;3) 将步骤2)中的检测结果A与所述的标准曲线图比对，得到样品中各 种氨基酸含量；4) 上述步骤中使用的检测设备为氨基酸自动分析仪。 其中，所述回收实验方法包括将蛋白质纯品或小麦营养粉用与步骤2)中样品相同的方法水解和检测， 得到蛋白质纯品或标准小麦营养粉的检测结果B，将检测结果B与所述标准 曲线图比对，得到蛋白质纯品或标准小麦营养粉中各种氨基酸含量的实测值， 所述实测值与所述蛋白质纯品中各种氨基酸标准含量的比值即为各种氨基酸 检测的回收率。蛋白质含量大于90%的一类单纯蛋白质，称为蛋白质纯品。优选的，蛋白质纯品选自牛血清蛋白、溶菌酶、酪蛋白、核糖核酸酶中 的一种。本专利技术中，氨基酸混合标准溶液中的氨基酸选自天门冬氨酸、苏氨酸、 丝氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、胱氨酸、缀氨酸、蛋氨酸、异 亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、赖氨酸和精氨酸中的一种或 几种。优选的，上述氨基酸混合标准溶液中，脯氨酸的浓度为4nmol/20uL， 其它氨基酸的浓度为2 n mol/20uL。优选的，上述样品水解的方法为酸水解，特别是盐酸水解，具体的说， 其水解方法为取牛奶样品1.0g左右或奶粉30 50mg于水解管中，加入 10 15ml浓度为6mol/l的盐酸后，用漩涡混合器混合，使样品溶解；置于液 氮或干冰中冷冻3 5min，然后抽真空至7Pa ($5xl0-2mm汞柱，指盛放样品 的耐压水解管内大气压强)或充氮气后封口，再将水解管置于108-ll(TC下 恒温干燥箱内水解22-24小时。样品水解后进一步还经过如下处理:冷却后开管、用高纯水定容至50 ml、过滤、取1 ml的滤液置于旋转蒸发器或浓縮器中赶酸，用0.02mo1/1盐酸稀 释、利用超声波混合均匀，经0.22pm滤膜过滤，即得到待测溶液。优选的，赶酸的方法为在50 8(TC,优选6(TC下挥发赶酸，必要时可加 水反复2 3次。上述用0.02mo1/1盐酸稀释为，对于牛奶样品制备的滤液，稀释4 5倍， 对于奶粉样品制备的滤液，稀释2倍。上述氨基酸分析仪利用在弱酸性溶液中，茚三酮与氨基酸反应生成蓝紫 色化合物(茚二酮胺)在570nm处有最大吸收，脯氨酸与茚三酮反应生成黄 色物质，在440nm处有最大吸收，茚三酮与氨基酸反应后的颜色变化来检测 氨基酸的含量。氨基酸检测利用无机酸水解时，常使用盐酸为催化剂，盐酸水解的优点 是水解彻底，除了色氨酸遭到破坏外，几乎能使全部氨基酸以L-型形式存在， 不引起外消旋作用。在水解过程中，蛋白质的分子是逐步降解的，巨大的胶 性高分子变成游离氨基酸需要有一定的时间，当绝大部分蛋白质水解成氨基 酸及少量的小肽时，此时水解率达到最高峰。但对于酸水解而言，水解率在 达到高峰后，继续延长水解时间，水解率则下降，这是由于已生成的部分氨 基酸在高温及酸的破坏下分解所致。如果采用传统的加标回收方法，在样品 中直接加入游离的氨基酸标准溶液，则在样品中的蛋白质水解率达到高峰之 前，部分所加入的氨基酸就会在高温及酸的破坏下分解，因而不能得出正确 的回收率。蛋白质含量大于90%的一类单纯蛋白质，称谓蛋白质纯品。蛋白 质纯品本身蛋白质含量高，而乳及乳制品中蛋白质含量在3.0%-3.5%，从蛋 白质的结构、性质上来说，两者没有区别，蛋白质本身是巨大胶性蛋白高分 子，所以在检测乳样样品和蛋白质纯品处理(水解、赶酸、上机测定)过程 相同，不会向传统加标回收方法那样因部分氨基酸被破坏而影响回收率结果。本专利技术的氨基酸含量检测的回收实验的方法具有如下优点1) 运用传统的酸水解方法，通过衍生化的间接分析法，操作简单、结果 准确和可靠，重现性好，能同时分析17中氨基酸的含量，包括8种必需氨基 酸、4种半必需氨基酸和5种非必需氨基酸。2) 灵敏度高。检出限仅为3pmol/iil能够满足国际及国内对氨基酸含 量的检测要求。2)解决了用传统加标回收方法无法进行验证该类方法的一大难题，既满足了实验要求，也验证了方法的可行性。 附图说明以下附图仅旨在于对本专利技术做示意性说明和解释，并不限定本专利技术的范 围。其中-图1是本专利技术的实施例中的17种氨基酸标准样品的色谱图，其横坐标表 示时间(min)，纵坐标表示电压响应信号强度，单位为mv。图2是本专利技术的实施例1中纯牛奶的17种氨基酸的色谱图，其横坐标表 示时间(min)，纵坐标表示电压响应信号强度，单位为mv。图3是本专利技术的实施例2中婴幼儿配方奶粉的17种氨基酸的色谱图，其 横坐标表示时间(min)，纵坐标表示电压响应信号强度，单位为mv。图4是本专利技术的实施例1中酪蛋白粉的17种氨基酸的色谱图，其横坐标 表示时间(min)，纵坐标表示电压响应信号强度，单位为mv。具体实施例方式为了对本专利技术的技术特征、目的和效果有更加清楚的理解，现对照附图 说明本专利技术的具体实施方式。实施例1检测纯牛奶中17种氨基酸的含量及回收实验。l.纯牛奶中氨基酸含量的检测(1) 制备氨基酸混合标准溶液。取氨基酸混合标液0本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种乳及乳制品中氨基酸含量检测的回收实验方法，所述氨基酸含量检测的方法包括： １）制备多个不同浓度的氨基酸的混合标准溶液，并对其分别检测，根据所测得的数据，绘制各种氨基酸含量与检测结果之间的标准曲线图； ２）将样品水解后用与步骤 １）同样的方法进行检测，得到检测结果Ａ； ３）将步骤２）中的检测结果Ａ与所述的标准曲线图比对，得到样品中各种氨基酸含量； ４）上述步骤中使用的检测设备为氨基酸自动分析仪； 其特征在于，所述回收实验方法包括： 将蛋白质 纯品或标准小麦营养粉用与步骤２）中样品相同的方法水解和检测，得到蛋白质纯品或标准小麦营养粉的检测结果Ｂ，将检测结果Ｂ与所述标准曲线图比对，得到蛋白质纯品或标准小麦营养粉中各种氨基酸含量的实测值，所述实测值与所述蛋白质纯品中各种氨基酸标准含量的比值即为各种氨基酸检测的回收率。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：徐向峰，常建军，刘卫星，
申请(专利权)人：内蒙古蒙牛乳业集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：15
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