一种检测乳中抗生素和/或抗生素拮抗剂的方法技术

本发明专利技术涉及一种检测乳中抗生素和／或抗生素拮抗剂的方法，包括如下步骤：取待测乳加入抗生素，制成有抗待测乳；另取待测乳，与所述有抗待测乳同等条件下放置；分别检测所述有抗待测乳以及所述待测乳中的抗生素；根据检测结果来间接判定待测乳是否含有抗生素和拮抗剂。本发明专利技术还可以进一步的取不含抗生素及抗生素拮抗剂的乳，加入抗生素，制成阳性对照乳，与上述有抗待测乳和待测乳在相同条件下放置后检测抗生素含量。本发明专利技术的方法具有快速、简便、准确的优点，便于企业规模化应用。本发明专利技术的方法可以使用一份待测乳同时检测抗生素和抗生素拮抗剂。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及，特别涉及利 用酶联免疫法检测乳中抗生素和/或抗生素拮抗剂的方法。
技术介绍
牛乳及乳制品是老少皆宜的营养品。随着抗生素在乳畜词养业中的广泛 应用，牛乳及乳制品中抗生素残留问题日益受到重视。长期饮用含有抗生素 的牛乳，对消费者来说无疑是等于长期服用小剂量的抗生素，残留的抗生素 会抑制肠道内的正常菌群，引发菌群失调症。通过细菌之间的质粒传递，敏 感菌可以与耐药菌株接触获得耐药性使人成为耐药菌株的宿主，从而给临床 治疗带来麻烦。对抗生素有过敏体质的人服用含有残留抗生素的乳后会发生 过敏反应。此外，牛乳中的残留抗生素会影响乳制品的品质，比如酸奶、奶 酪等乳品发酵不能正常进行。我国规定，乳及乳制品中不能检出抗生素。所 以国际上和国内乳品行业拒收抗生素阳性的原料乳，乳制品企业均对原料乳 中的抗生素含量均进行严格的检查。然而，如果向含有抗生素的原料乳中添加抗生素的拮抗剂，降解乳中的 抗生素，会使得抗生素的浓度降低。在乳品企业收购原料乳时，为确保原料 质量，需要检测抗生素，然而如果人为地向原料乳中添加抗生素的拮抗剂， 会导致目前大规模使用的一般初筛试剂盒不能检出实际的抗生素含量，掩饰 了原料乳原有的质量情况，因此需要一种能够检测乳中抗生素拮抗剂的方 法。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种快速、准确的乳中抗生素和/或抗生素拮抗剂的 检测方法，其简便易行并且适用于规模化初筛原料乳。本专利技术提供了，包括如下步骤1) 取待测乳加入抗生素，制成有抗待测乳；2) 另取待测乳，与上述有抗待测乳同等条件下放置；3) 分别检测上述有抗待测乳以及上述待测乳中的抗生素；4) 按照如下方法判定待测乳检测结果4.1) 待测乳中检测出抗生素，则判定待测乳中含有抗生素；4.2) 待测乳中未检测出抗生素，并且，上述有抗待测乳中未检 测出抗生素，则待测乳中含有抗生素和抗生素拮抗剂；4.3) 待测乳中未检测出抗生素，并且，所述有抗待测乳中检测 出抗生素，则待测乳中不含抗生素和拮抗剂。优选的，本专利技术的方法还进一步包括如下步骤取不含抗生素及抗生素拮抗剂的乳(可以是原料乳或复原乳)加入与步骤 1)等量的抗生素，制成阳性对照乳；将阳性对照乳在与步骤2)相同的条件 下放置；用与步骤3)相同的方法检测阳性对照乳中的抗生素；阳性对照乳中 检测出抗生素时，按照如下方法判定检测结果a) 所述待测乳B中检测出抗生素，则所述待测乳B中含有抗生 素；b) 所述待测乳B中未检测出抗生素，并且，所述有抗待测乳A中 未检测出抗生素或者所述有抗待测乳A中检测出的抗生素含量 相对所述阳性对照乳C中检测出的抗生素含量降低20%以上 的，则所述待测乳B中含有抗生素和抗生素拮抗剂；c) 所述待测乳B中未检测出抗生素，并且，所述有抗待测乳A中 检测出的抗生素含量相对所述阳性对照乳C中检测出的抗生素 含量相差在所述阳性对照乳C中检测出的抗生素含量的20%以 内的，则所述待测乳B中不含抗生素和拮抗剂。优选的，所述有抗待测乳、待测乳和/或阳性对照乳的放置条件为置于 37'C孵育箱或水浴箱孵育2-2.5小时。如没有37"C孵育设备，也可置于25°C 以上3小时，使抗生素拮抗剂降解抗生素。优选的，本专利技术的方法可以检测beta-内酰胺类抗生素，其相应的抗生素 拮抗剂为beta-内酰胺酶。也可以检测四环素类抗生素，其相应的抗生素拮抗 剂为四环素酶。本专利技术的方法步骤3)中，可以采用任何一种现有的检测抗生素的方法， 优选的，采用快速检测抗生素试剂盒，如西班牙的利普斯50(ECLIPSE50)、 比利时的TWIN SENSOR、美国的CHARM和美国的SNAP等。本专利技术的方法具有快速、简便、准确的优点，可以在短时间内检测大量 样品，便于企业规模化应用。此外，本专利技术的方法可以采用一份待测乳样品 同时检测抗生素和抗生素拮抗剂，而不必采用不同的方法分别检测，使用简 单的判别方法即可获得检测结果。具体实施方式下面将结合具体实施方案对本专利技术的方法做详细的说明。本领域技术人 员应当理解，下述实施例均用于对本专利技术所要求保护的范围进行示例的描 述，以此概括本专利技术的范围，可以检测所有有针对性添加的抗生素/拮抗剂， 因而不能将之理解为对本专利技术的一种具体限制。实施例l检测原料乳中的beta-内酰胺类抗生素及拮抗剂beta-内酰胺酶是beta-内酰胺类抗生素的拮抗剂。根据经验，18ml的 beta-内酰胺酶37'C下2-2.5小时，或25°。以上3小时条件下能将1吨原奶内 含有的10ppb的beta-内酰胺类抗生素(如青霉素钠)完全降解。取待测原料乳，按照如下步骤检测其中是否含有抗生素青霉素钠及其拮 抗剂beta-内酰胺酶1、 取lml待测原料乳样品，加入10ullppm青霉素钠水溶液，使青霉素 钠的最终浓度为10ppb，制备成有抗待测乳A。2、 另外再取lml待测乳B不加入任何物质。3、 取1克不含抗生素及抗生素拮抗剂的乳粉溶解于9ml蒸馏水(温度 45-60°C)制成无抗复原乳，振荡混均，温度降至室温后使用。取lml无抗复 原乳，也可以使用lml不含抗生素和抗生素拮抗剂的原料乳，加入10ullppm 青霉素钠水溶液，使青霉素钠的最终浓度为10ppb，制备成阳性对照乳C。4、 将上述有抗待测乳A、待测乳B和阳性对照乳C置于37'C孵育箱或 水浴箱孵育2-2.5小时。如没有37'C孵育设备，也可将上述有抗待测乳A、待 测乳B和阳性对照乳C置于室温(25。C以上)3小时。5、 检测孵育好的有抗待测乳A、待测乳B和阳性对照乳C中的青霉素钠，可以采用任何一种检测抗生素的方法进行检测，优选采用快速检测抗生素的试剂盒，如西班牙的利普斯50 (ECLIPSE50)、比利时的TWIN SENSOR、美国的CHARM和美国的SNAP等试剂盒。6、有抗待测乳A、待测乳B和阳性对照乳C中检测出青霉素钠，则记为 阳性(+)，未检测出青霉素钠则记为阴性(_)。在阳性对照乳C的检测结 果为阳性的情况下(若阳性对照乳C的检测结果为阴性，则可能意味着其中 添加的青霉素钠是无效的，整个试验的结果就是不准确的，需要重新进行试'，按照如下规则判定待测乳B的检观抗生素检测结果 有抗待测乳A 待测乳B待测乳B的 判定结果待测乳 是否合格+或- +含有抗生素待测乳不合格— —含有拮抗剂 含有抗生素待测乳不合格+ —不含拮抗剂 不含抗生素待测乳合格此外，在阳性对照乳C的检测结果为阳性的情况下，如果有抗待测乳A 经检测后虽然是阳性结果的，但有抗待测乳A中检测出的青霉素钠含量相对 阳性对照乳C中检测出的青霉素钠含量降低了，且降低的幅度超过阳性对照 乳C中检测出的青霉素钠含量的20%的，也可判定待测乳B中含有拮抗剂。在待测乳B的检测结果为阴性的前提下，有抗待测乳A中检测出的青霉 素钠含量与阳性对照乳C中检测出的青霉素钠含量相比存在差别，如果差别 在阳性对照乳C中检测出的青霉素钠含量的20%以内，均可记录有抗待测乳 A为阳性，判定待测乳B中不含抗生素和拮抗剂。在本实施例的一个具体实例中，利用本专利技术所提供的上述方法检测一份 新的原料乳样品，检验结果为有抗待测乳A阴性，待测乳B阴性，判定待测 乳B中添加了抗生素拮抗剂，即可推定该原料乳中原来必然含有抗生素，属 于不本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测乳中抗生素和／或抗生素拮抗剂的方法，包括如下步骤：　１）取待测乳加入抗生素，制成有抗待测乳Ａ；　２）另取待测乳Ｂ，与所述有抗待测乳Ａ同等条件下放置；　３）分别检测所述有抗待测乳Ａ以及所述待测乳Ｂ中的抗生素；　 ４）按照如下方法判定待测乳Ｂ的检测结果：　４．１）所述待测乳Ｂ中检测出抗生素，则所述待测乳Ｂ中含有抗生素；　４．２）所述待测乳Ｂ中未检测出抗生素，并且，所述有抗待测乳Ａ中未检测出抗生素，则所述待测乳Ｂ中含有抗生素和抗生素拮抗剂； 　４．３）所述待测乳Ｂ中未检测出抗生素，并且，所述有抗待测乳Ａ中检测出抗生素，则所述待测乳Ｂ中不含抗生素和拮抗剂。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：喻东威，刘志楠，赵源，李梅，
申请(专利权)人：内蒙古蒙牛乳业集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：15[中国|内蒙]